[논문]구강암 세포주에서 김 추출물에 의한 세포자멸사 유도

김상찬; 이종록; 박숙자

doi:10.6116/kjh.2015.30.2.25.

구강암 세포주에서 김 추출물에 의한 세포자멸사 유도
Porphyra tenera induces apoptosis of oral cancer cells 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.30 no.2, 2015년, pp.25 - 30

김상찬 (대구한의대학교 한의과대학 방제과학글로벌 연구센터) , 이종록 (대구한의대학교 제약공학과) , 박숙자 (대구한의대학교 한의과대학 방제과학글로벌 연구센터)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : Laver (Porphyra tenera), a red algae species, is one of the most widely consumed edible seaweed in Korea. Laver contains various substances such as essential amino acid, fiber, minerals and polyphenols that benefit human health. In the present study, we prepared ethanol extracts from commercially processed product of Porphyra tenera, and evaluated the growth inhibitory effect against human oral squamous carcinoma YD-10B cells. Methods : Cell viability was measured by MTT assay. Apoptosis was confirmed by TUNEL assay and flow cytometry with the green fluorescent dye FITC annexin V entering apoptotic cells and the red fluorescent dye PI not entering. The expression of the relevant proteins was detected using Western blot. Results : Ethanol extracts of Porphyra tenera (PTE, $50-200{\mu}g/m{\ell}$) caused a significant decrease of cell viability in a dose dependant manner. The cell death occurred as a result of apoptotic process as determined by TUNEL assay and flow cytometric analysis. In line with this observation, decrease in procaspase proteins and increase in cytosolic cytochrome c were observed in cells treated with PTE. In addition, exposure to PTE decreased the expression levels of Bcl-2, and induced PARP cleavage and AIF translocation from mitochondria to nucleus. Conclusions : In conclusion, PTE exerts anti-cancer effects by inducing apoptosis via caspase activation and AIF nuclear translocation in YD-10B cells. These results provide evidence for the possible therapeutic effect of Porphyra tenera in oral cancer cells.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

구강암 세포주 YD-10B에 대한 PTE의 apoptosis 유도효과는 TUNEL assay를 실시하여 좀 더 명확히 규명하고자 하였다. 24시간 동안의 PTE 처리 결과, control에 비하여 진한 갈색의 핵(화살표)을 가진 세포들이 뚜렷하게 관찰되었다 (Fig.
구강암 세포주에서 PTE에 의해 나타나는 apoptosis 유도 효과를 좀 더 상세히 이해하기 위하여 apoptosis 신호전달과정에서 주요한 역할을 담당하고 있는 단백질들의 발현을 조사하였다. Proenzyme의 형태로 존재하며 proteolysis를 통해 활성화되는 caspase와 활성화된 caspase에 의해 절단되는PARP(poly ADP ribose polymerase) 단백질은 손상된 세포를 인지하고 복구할 수 있는 능력을 소실하여 apoptosis를 유도하게 된다.
본 연구에서는 식생활 속에서 쉽게 접할 수 있는 김을 활용하여 그 추출물이 인체 구강암 세포주의 세포자멸사와 관련 분자들에 대해 어떠한 영향을 미치는지 평가하고자 하였다.
본 연구에서는 인체 구강암 세포주인 YD-10B cell에 대한 김 에탄올 추출물의 세포 성장 억제 및 사멸에 미치는 영향을 조사하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
이상의 결과를 종합하여, 인체 구강암 세포주인 YD-10B 세포에서 김 추출물이 미토콘드리아를 통한 apoptosis pathway를 통해 세포사멸을 유도한다는 것이 확인되었다. 시험관에서 자란 암세포에서 apoptosis를 일으킬 수 있다는 것은 생체 내에서도 그러한 효과를 발휘할 수 있음을 의미하는 것으로,본 연구는 항암효능을 지닌 천연물의약품으로 발전할 수 있는 본초로서의 김에 대한 약리 효능을 잘 보여주는 결과라 할 수 있겠다.

제안 방법

개의 농도가 되게 세포를 배양하고 PTE를 24시간 처리하였다. Cell은 PBS로 2회 washing한 후에 4% paraformaldehyde로 고정하여 In Situ cell death detection kit-POD (Roche, Mannheim, Germany)를 사용하여 kit에 포함된 protocol에 맞춰 분석하였다. 즉, paraformaldehyde로 고정된 cell을 0.
PARP cleavage 확인을 위한 세포 핵분획물은 시판되는 nuclear extraction kit (Thermo scientific, Rockford, IL, USA)를 사용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 배양 세포로부터 추출하였다. 미토콘드리아의 AIF protein과 세포질의 cytochrome c protein의 발현을 조사하기 위한 세포 분획은 Mitochondria Isolation Kit (Thermo scientific, Rockford, IL, USA)를 이용하여 준비하였다.
1% sodium citrate로 permeabilisation 상태로 만든 후에 TdT-enzyme이 처리된 용액으로 labeling하였다. PBS로 2회 washing한 후에 Converter-peroxisase(POD)로 37℃에서 30분간 처리하고 DAB로 발색하여 light microscope로 관찰하였다.
PTE가 구강암 세포주인 YD-10B cell의 세포증식에 미치는 영향을 조사하기 위하여 다양한 농도(50, 100, 200 ㎍/㎖)로 처치하고 24시간 혹은 48시간 동안 배양하여 MTT assay로 cell viability를 측정하였다. 24시간 배양 후, PTE를 처치하지 않은 대조군 세포의 생존율을 100%로 하였을 때 PTE 50, 100, 200 ㎍/㎖은 각각 85.
01) 유도함으로써 세포증식을 억제하였다. PTE에 의한 세포사멸이 apoptosis에 기인하는지를 확인하기 위해 FITC annexin V/PI 이중 염색을 실시하여 flow cytometry로 분석하였다. Fig.
동일한 양의 단백질을 SDS-PAGE로 분리하여 nitrocellulose membrane으로 옮기고 1차 antibody로 2시간 반응시켰다. TBST로 3회 washing하고 2차 antibody로 1시간 더 반응시킨 후에 각각의 protein band는 ECL western blotting detection reagents (Amersham)를 사용하여 발색하였다. 발색 후 각 단백질의 발현량을 평가하기 위하여 image analyzing system(Ultra-Violet Products Ltd.
YD-10B cell을 12 well plate에 1×105 cells/well로 분주한 다음, PTE를 농도별(50, 100, 200 ㎍/㎖)로 처치하여 세포의 생존율을 구하였다.
고정된 cell은 1×106개/㎖의 농도로 PBS에 suspension 시킨 후, FITC annexin V와 PI를 처리하여 얼음위에서 20분간 반응시켜 flow cytometer (Particle Analysis System, Partec GmbH, Mnster, Germany)로 분석하였다.
이 결과는 caspase의 activation과 PARP 단백질의 파괴가 세포의 DNA 복제 및 유전자 발현과 관련된 신호전달에 영향을 주어 apoptosis를 통한 세포사멸에 기여했음을 의미한다. 또한 미토콘드리아에 의한 apoptosis 신호경로에 관여하는 Bcl-2, AIF (apoptosis- inducing factor), cytochrome c 단백질의 발현도 PTE의 처리에 의해 농도 의존적으로 변화하였다. PTE에 의해 anti - apoptotic regulation을 하는 Bc l- 2와 미토콘드리아 분획 속의 AIF 단백질 발현은 감소되었으며, 세포질로 분비된 cytochrome c의 발현은 증가되었음을 확인하였다(Fig.
TBST로 3회 washing하고 2차 antibody로 1시간 더 반응시킨 후에 각각의 protein band는 ECL western blotting detection reagents (Amersham)를 사용하여 발색하였다. 발색 후 각 단백질의 발현량을 평가하기 위하여 image analyzing system(Ultra-Violet Products Ltd., Upland, CA, USA)을 이용하여 densitometric analysis를 실시하였다.
cells/well로 분주한 다음, PTE를 농도별(50, 100, 200 ㎍/㎖)로 처치하여 세포의 생존율을 구하였다. 배양세포에 MTT 용액(1 ㎎/㎖)를 500 ㎕ 넣고 4시간 배양하여 생성된 formazan crystals을 DMSO에 녹여 Titertek Multiskan Automatic ELISA microplate reader (Model MCC/340, Huntsville, AL)를 사용하여 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포생존율은 시료를 처치하지 않은 대조군에 대한 백분율로 나타내었다.
붉은색 형광염색약인 propidium iodide (PI)와 초록색 형광염색약인 FITC annexin V (Molecular Probes, Eugene, OR)를 사용하여 apoptotic cell을 분석하였다. 1×10⁶의 cells을 10cm² plastic plate에 깔고 70-80%의 confluency를 유지하였다.
실험과정의 모든 cells은 80~90%의 confluence에서 실험하였고, 20 passages를 넘기지 않은 cell만 사용하였다. 세포생존율 실험을 수행하기 위해 PTE를 처리하지 않고 배지만 주입한 세포를 대조군으로 하였고, 실험군은 3개로 분류하여 각각 50, 100, 200 ㎍/㎖의 PTE를 처치하였다. 이후의 실험에서는 대조군(0 ㎍/㎖)과 한 농도의 PTE 실험군(100 ㎍/㎖)을 지정하여 세포자멸사에 대한 효과를 살펴보았다.
세포생존율 실험을 수행하기 위해 PTE를 처리하지 않고 배지만 주입한 세포를 대조군으로 하였고, 실험군은 3개로 분류하여 각각 50, 100, 200 ㎍/㎖의 PTE를 처치하였다. 이후의 실험에서는 대조군(0 ㎍/㎖)과 한 농도의 PTE 실험군(100 ㎍/㎖)을 지정하여 세포자멸사에 대한 효과를 살펴보았다.
Apoptosis 작용에 의해 나타나는 대표적인 현상들로는 plasma membrane의 변화에 의한 phosphatidylserine(PS)의 flip-flop과 DNA의 분절화(fragmentation) 등을 들 수 있으며^15,16), 본 실험에서는 김 추출물 처치에 의해 YD-10B세포에서 이 두 가지 현상이 일어남을 확인할 수 있었다. 인지질의 flip-flop은 PS와 결합하는 형광 염색약(annexin-V)을 활용하여 flow cytometry로 확인하였으며, 손상된 DNA는 TUNEL staining을 통해 관찰하였다.
Cell은 PBS로 2회 washing한 후에 4% paraformaldehyde로 고정하여 In Situ cell death detection kit-POD (Roche, Mannheim, Germany)를 사용하여 kit에 포함된 protocol에 맞춰 분석하였다. 즉, paraformaldehyde로 고정된 cell을 0.3% H2O2를 사용하여 blocking시키고 0.1% triton X-100/0.1% sodium citrate로 permeabilisation 상태로 만든 후에 TdT-enzyme이 처리된 용액으로 labeling하였다. PBS로 2회 washing한 후에 Converter-peroxisase(POD)로 37℃에서 30분간 처리하고 DAB로 발색하여 light microscope로 관찰하였다.

대상 데이터

Louis, MO, USA)에서 구입하였고, DMEM, fetal bovine serum(FBS), antibiotics (penicillin-streptomycin)는 Gibco/BRL(Eggenstein, Germany)로부터 구입하였다. 1차 antibody인 actin, AIF, Bcl-2, procaspase-3는 Santa Cruz Biotechnology(Bergheimer, Germany)에서 구입하였고, cytochrome c, cleaved PARP, procaspase-9은 Cell Signalling Technology(Irvine, CA, USA)에서 구입하였다. 2차 antibody는 1차 antibody의 host에 따라 anti-rabbit IgG-HRP (Actin,procaspase-3, procaspase-9, cleaved PARP)와 anti-mouse IgG-HRP (AIF, Bcl-2, cytochrome c)를 Cell Signalling Technology에서 구입하여 사용하였다.
1차 antibody인 actin, AIF, Bcl-2, procaspase-3는 Santa Cruz Biotechnology(Bergheimer, Germany)에서 구입하였고, cytochrome c, cleaved PARP, procaspase-9은 Cell Signalling Technology(Irvine, CA, USA)에서 구입하였다. 2차 antibody는 1차 antibody의 host에 따라 anti-rabbit IgG-HRP (Actin,procaspase-3, procaspase-9, cleaved PARP)와 anti-mouse IgG-HRP (AIF, Bcl-2, cytochrome c)를 Cell Signalling Technology에서 구입하여 사용하였다.
3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoleum(MTT), dimethyl sulfoxide (DMSO)는 Sigma (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였고, DMEM, fetal bovine serum(FBS), antibiotics (penicillin-streptomycin)는 Gibco/BRL(Eggenstein, Germany)로부터 구입하였다. 1차 antibody인 actin, AIF, Bcl-2, procaspase-3는 Santa Cruz Biotechnology(Bergheimer, Germany)에서 구입하였고, cytochrome c, cleaved PARP, procaspase-9은 Cell Signalling Technology(Irvine, CA, USA)에서 구입하였다.
Human유래 oral squamous cell carcinoma cell line인 YD-10B cell은 한국세포주은행 (Korea Cell Line Bank, Seoul, Korea)으로 부터 구입하였으며, 10% fetal bovine serum, 100 units/ml penicillin과 100 mg/ml streptomycin이 포함된 DMEM 배지에서 37℃의 온도와 5%의 CO₂가 유지되는 환경에서 배양하였다. 실험과정의 모든 cells은 80~90%의 confluence에서 실험하였고, 20 passages를 넘기지 않은 cell만 사용하였다.
933 g)를 획득하였으며, 실험에 사용할 때까지 -20℃에서 보관하였다. 김 에탄올 추출물(Porphyratenera extracts, PTE)에 대한 최종 수율은 0.23%였으며, DMEM 배지에 녹여 실험에 사용하였다.
김(海苔; Porphyra tenera)은 대구시내 칠성시장에서 구입하여 관능평가 후, 수도수로 세척하여 이물질을 제거한 다음 음건하여 사용하였다. 에탄올 추출물은 건조 중량(405 g)의 10배에 해당되는 에탄올에 침지하여 72시간 동안 추출한 후에 회전 감압농축기(EYELA, Tokyo, Japan)로 감압농축하고 freezer dryer(Labconco, MO, USA)로 동결 건조하여 최종 추출물 시료(0.
PARP cleavage 확인을 위한 세포 핵분획물은 시판되는 nuclear extraction kit (Thermo scientific, Rockford, IL, USA)를 사용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 배양 세포로부터 추출하였다. 미토콘드리아의 AIF protein과 세포질의 cytochrome c protein의 발현을 조사하기 위한 세포 분획은 Mitochondria Isolation Kit (Thermo scientific, Rockford, IL, USA)를 이용하여 준비하였다.
가 유지되는 환경에서 배양하였다. 실험과정의 모든 cells은 80~90%의 confluence에서 실험하였고, 20 passages를 넘기지 않은 cell만 사용하였다. 세포생존율 실험을 수행하기 위해 PTE를 처리하지 않고 배지만 주입한 세포를 대조군으로 하였고, 실험군은 3개로 분류하여 각각 50, 100, 200 ㎍/㎖의 PTE를 처치하였다.

데이터처리

로 나타내었다. 유의성 검정은 윈도우용 SPSS 17.0을 사용하여 one way analysis of varience (ANOVA),Turkey test (multiple comparison) 방식으로 분석하였으며, p값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의하다고 판정하였다.

이론/모형

YD-10B cells were exposed to PTE (50, 100, 200 ㎍/㎖) for 24 or 48 h. Cell viability was assessed by MTT assay. Data represent the mean ± S.

성능/효과

1. 김 에탄올 추출물은 구강암 세포주인 YD-10B cell에 대하여 시간별, 농도별 세포사멸 효과를 나타내었다.
2. Apoptotic cell을 염색할 수 있는 TUNEL assay와 Flow cytometry를 이용한 분석 결과, 김 에탄올 추출물에 의한 세포 사멸이 apoptosis에 기인함을 알 수 있었다.
구강암 세포주 YD-10B에 대한 PTE의 apoptosis 유도효과는 TUNEL assay를 실시하여 좀 더 명확히 규명하고자 하였다. 24시간 동안의 PTE 처리 결과, control에 비하여 진한 갈색의 핵(화살표)을 가진 세포들이 뚜렷하게 관찰되었다 (Fig. 3A). 이것은 apoptosis에 의해 DNA 분절(fragmentation)이 일어난 세포의 핵이 TUNEL staining에 반응하여 나타난 것으로 PTE가 YD-10B 세포의 apoptosis를 유도하였음을 의미한다.
PTE가 구강암 세포주인 YD-10B cell의 세포증식에 미치는 영향을 조사하기 위하여 다양한 농도(50, 100, 200 ㎍/㎖)로 처치하고 24시간 혹은 48시간 동안 배양하여 MTT assay로 cell viability를 측정하였다. 24시간 배양 후, PTE를 처치하지 않은 대조군 세포의 생존율을 100%로 하였을 때 PTE 50, 100, 200 ㎍/㎖은 각각 85.0%, 40.7%, 9.2%의 세포생존율을 나타내었으며, 48시간 배양에서 70.9%, 35.2%, 9.1%의 생존율을 나타내어 농도별, 시간별 세포사멸 및 세포증식 억제효과가 확인되었다(Fig. 1).
3. 세포자멸사에서 주요한 역할을 담당하는 단백질들의 발현조사를 통해, 김 추출물이 미토콘드리아의 장애(dysfunction)와 연관된 caspase 활성화 및 미토콘드리아 내의 AIF 발현 감소 등에 관여함으로써 apoptosis를 유도함을 알 수 있었다.
실제로 항암제 후보 발굴을 위한 연구 결과들을 살펴보면, 세포 사멸의 방법으로 항암활성을 발휘하는 물질들은 target cell에서 apoptosis를 유도함으로써 그 활성을 나타내고 있다^17,18). Apoptosis 작용에 의해 나타나는 대표적인 현상들로는 plasma membrane의 변화에 의한 phosphatidylserine(PS)의 flip-flop과 DNA의 분절화(fragmentation) 등을 들 수 있으며^15,16), 본 실험에서는 김 추출물 처치에 의해 YD-10B세포에서 이 두 가지 현상이 일어남을 확인할 수 있었다. 인지질의 flip-flop은 PS와 결합하는 형광 염색약(annexin-V)을 활용하여 flow cytometry로 확인하였으며, 손상된 DNA는 TUNEL staining을 통해 관찰하였다.
Control 세포는 24시간 배양 후에 두 가지 염색 시약에 모두 반응하지 않는 live cell(Q1)의 형태로 대부분 존재하였고 apoptotic cell은 2.5%였으나, PTE로 처치된 세포는 29.5%의 apoptotic cell population을 나타내어 PTE에 의한 YD-10B 세포사멸에 apoptosis signaling이 유의하게(p<0.01) 관여함을 알 수 있었다(Fig. 2B).
2에서 보는 바와 같이 세포자멸사가 진행된 세포는 FITC annexin V에 염색된 상태이며(Q2와 Q4), 특히 PI 염색 여부에 따라 PI(+)는 late apoptosis(Q2), PI(-)는 early apoptosis(Q4)가 진행 중임을 의미한다. PTE(100 ㎍/㎖)를 24시간 동안 반응시킨 결과, control 세포에 비해 증가된 세포자멸사 세포를 확인할 수 있었다(Fig. 2A). Control 세포는 24시간 배양 후에 두 가지 염색 시약에 모두 반응하지 않는 live cell(Q1)의 형태로 대부분 존재하였고 apoptotic cell은 2.
또한 미토콘드리아에 의한 apoptosis 신호경로에 관여하는 Bcl-2, AIF (apoptosis- inducing factor), cytochrome c 단백질의 발현도 PTE의 처리에 의해 농도 의존적으로 변화하였다. PTE에 의해 anti - apoptotic regulation을 하는 Bc l- 2와 미토콘드리아 분획 속의 AIF 단백질 발현은 감소되었으며, 세포질로 분비된 cytochrome c의 발현은 증가되었음을 확인하였다(Fig. 4).
모든 실험은 3회 이상 반복 실시하였으며 실험 결과는 mean ± S.D.로 나타내었다.
이 과정에서 핵에서 손상된 DNA를 수선(repair)하여 세포의 생존에 기여하는 PARP는 caspase-3에 의해 절단되어 비활성화됨으로써, apoptosis를 진행시키는데 역할을 담당하게 된다²²⁾. 본 연구에서 김 추출물은 apoptosis 억제 단백질인 bcl-2와 procaspase-3/9의 발현을 저해하였고,cytosol 분획 속의 cytochrome c와 cleaved PARP의 발현을 증가시켰다. 이 결과는 김 추출물이 cytochrome c의 방출, caspase activation, PARP cleavage로 연결되는 미토콘드리아를 통한 caspase 활성화 경로에 관여하였음을 의미한다.
최근의 연구들에 따르면 김은 항균 효과¹⁰⁾와 항콜레스테롤 효과¹¹⁾를 비롯한 다양한 생리활성을 지닌 것으로 보고되어 식품 이상의 가치를 지닌 천연물로 대두되어 지고 있다. 본 연구에서는 김 에탄올 추출물을 준비하여 인체 구강암 세포주인 YD-10B 세포에 대한 세포사멸 효과를 조사한 결과 apoptosis를 통한 구강암 세포의 사멸이 진행됨을 확인하였다. 김 추출물은 caspase, PARP, Bcl-2와 같은 apoptosis 관련 단백질들의 발현을 조절함으로써 암세포 성장 억제 및 사멸을 유도하였다.
4). 이 결과는 caspase의 activation과 PARP 단백질의 파괴가 세포의 DNA 복제 및 유전자 발현과 관련된 신호전달에 영향을 주어 apoptosis를 통한 세포사멸에 기여했음을 의미한다. 또한 미토콘드리아에 의한 apoptosis 신호경로에 관여하는 Bcl-2, AIF (apoptosis- inducing factor), cytochrome c 단백질의 발현도 PTE의 처리에 의해 농도 의존적으로 변화하였다.
본 연구에서 김 추출물은 apoptosis 억제 단백질인 bcl-2와 procaspase-3/9의 발현을 저해하였고,cytosol 분획 속의 cytochrome c와 cleaved PARP의 발현을 증가시켰다. 이 결과는 김 추출물이 cytochrome c의 방출, caspase activation, PARP cleavage로 연결되는 미토콘드리아를 통한 caspase 활성화 경로에 관여하였음을 의미한다.
3B). 이러한 결과는 flow cytometry 결과(Fig. 2)와 더불어 PTE가 구강암세포주인 YD-10B 세포에서 apoptotic cell death에 관여함을 명확하게 보여준다.
이상의 결과를 종합하여, 인체 구강암 세포주인 YD-10B 세포에서 김 추출물이 미토콘드리아를 통한 apoptosis pathway를 통해 세포사멸을 유도한다는 것이 확인되었다. 시험관에서 자란 암세포에서 apoptosis를 일으킬 수 있다는 것은 생체 내에서도 그러한 효과를 발휘할 수 있음을 의미하는 것으로,본 연구는 항암효능을 지닌 천연물의약품으로 발전할 수 있는 본초로서의 김에 대한 약리 효능을 잘 보여주는 결과라 할 수 있겠다.

후속연구

최근의 연구들에 의하면, AIF의 nuclear translocation(핵내 이동)은 PARP inhibitor에 의해 저해될 수 있으나 caspase inhibitor에 의해서는 저해되지 않음이 보고되었다^24,25). 이는 AIF가 caspase 비의존적 apoptosis pathway에 관여함을 의미하는 것으로 김 추출물이 여기에 부분적으로 관여할 것으로 사료되나, 미토콘드리아의 AIF 단백질 발현 감소와 PARP 활성화를 연결하는 신호과정에서 김 추출물의 정확한 역할은 좀 더 연구를 진행하여야 설명될 수 있을 것이다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	표적치료제 개발이란?	기존 항암제가 암세포뿐만 아니라 정상세포의 기능도 억제하기 때문에 생길 수 있는 많은 부작용을 극복하기 위해 다양한 표적치료 항암제 개발이 시도되고 있다. 표적치료제 개발이란 암세포에서 특이적으로 확인되는 분자를 표적으로 하여 효과를 나타내는 물질들로부터 치료제를 개발하는 것으로 세포주기조절(cell cycle regulation), 혈관신생(angiogenesis), 세포자멸사(apoptosis) 등과 같은 암 발생과 관련된 신호전달 체계에 대해 이해가 우선되어야 한다.
	apoptosis 과정에서 나타나는 세포의 현상은 무엇이 있는가?	실제로 항암제 후보 발굴을 위한 연구 결과들을 살펴보면, 세포 사멸의 방법으로 항암활성을 발휘하는 물질들은 target cell에서 apoptosis를 유도함으로써 그 활성을 나타내고 있다17,18). Apoptosis 작용에 의해 나타나는 대표적인 현상들로는 plasma membrane의 변화에 의한 phosphatidylserine (PS)의 flip-flop과 DNA의 분절화(fragmentation) 등을 들 수 있으며15,16), 본 실험에서는 김 추출물 처치에 의해 YD-10B 세포에서 이 두 가지 현상이 일어남을 확인할 수 있었다. 인지질의 flip-flop은 PS와 결합하는 형광 염색약(annexin-V)을 활용하여 flow cytometry로 확인하였으며, 손상된 DNA는 TUNEL staining을 통해 관찰하였다.
	김이 영양학적으로 다른 해조류와 다른 점은 무엇인가?	식용으로 널리 사용되고 있는 김은 우리나라 연안에서 다량으로 서식하는 보라털과(Bangiaceae)의 홍조류로서 해태(海苔), 감태(甘苔)라고도 하며 한의학에서는 치질, 토사곽란(吐瀉霍亂)을 치료하는 약재로도 사용되어 왔다1,2). 다른 해조류와 달리 김은 트레오닌(threonine), 트립토판(tryptophan), 메티오닌(methionine) 등 필수 아미노산과 단백질이 많이 들어 있으며, 칼슘, 요오드를 비롯한 무기질과 비타민도 풍부하게 함유되어 있어 양질의 영양소를 가진 건강식품으로 알려져 있다3,4). 또한 칼로리가 거의 없고 식이섬유소가 풍부하여 다이어트에 효과적이며, 당뇨병과 비만을 비롯한 만성질환의 발병을 낮춰주는 것으로 보고되었다5,6).

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저자의 다른 논문 :

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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