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문제 정의
- 본 연구에서는 도라지 70% 에탄올 추출물과 분획물에 대하여 돌연변이원성 , 항돌연변이원성을 실험하였고 in vi tro 및 in vivo에서 의 항암 효과를 검색하였으며 , 항돌연변이 및 항암 효과가 가장 뛰어난 분획물을 선택하여 NDMA 생성 억제 효과를 살펴봄으로써 도라지 추출물 및 분획물들이 암 예방 및 개선 효과를 가진 안전성이 확보된 천연 소재로 활용 가능한지 알아보았다.
가설 설정
- 1) Value are mean土SD of 6 mice.
- plates. 2) NS: not significant.
제안 방법
- 감압여 과 장치에서 뜨거운 상태로 여과한 후 감압농축기를 사용하여 추출용매를 제거한 다음 농축물을 얻었다. 70% 에탄올로 추출하여 얻은 농축물을 용매의 극성 차이에 따라 분리를 행하여 헥산(hexane), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 부탄올 (butanol) 및 물(aqueous) 분획물 순서로 다섯 가지 분획물을 제조하였다. 분리된 각각의 용매 추출물은 감압 농축하여용매를 제거한 후 동결 건조하여 실험에 사용하였다.
- 알아보았다. HeLa, HepG2, MCF-7, A549오} 293 을 10% FBS가 함유하는 RPMI 1640 또는 DMEM 배지를 사용하여 5X104 cells/mL 농도로 100 uL씩 각 well에 첨가하여 24시간 동안 배양시킨 후 배지에 녹인 다양한 농도의 시료를 100 uL씩 첨가하여 48시간 동안 다시 배양하였다. 그 후 상등액을 조심스럽게 제거하고 냉장 보관한 10%(w/ v) TCA를 100 uL씩 첨가한 후 1시간 동안 4°C에서 방치한 뒤 증류수로 다섯 번 헹구었다.
- 3회 추출하였다. 감압여 과 장치에서 뜨거운 상태로 여과한 후 감압농축기를 사용하여 추출용매를 제거한 다음 농축물을 얻었다. 70% 에탄올로 추출하여 얻은 농축물을 용매의 극성 차이에 따라 분리를 행하여 헥산(hexane), 클로로포름(chloroform), 에틸아세테이트(ethyl acetate), 부탄올 (butanol) 및 물(aqueous) 분획물 순서로 다섯 가지 분획물을 제조하였다.
- 건열 멸균시킨 glass cap tube에 시료를 각각의 농도별로 50 uL씩 첨가하고 변이원 물질을 각각 50 uL씩 첨가하였다. 여기에 전 배양시킨 S Typhimurium 균액을 100 uL씩 주입한 후에 0.
- 4%(w/v) SRB 용액 100 uL를 첨가해 30분 동안 염색시켰다. 결합되지 않은 SRB 염색액은 1%(v/v) acetic acid 용액으로 네 번 정도 헹구어 다시 건조시킨 후 10 mM Tris buffer 100 uL로 염색제를 충분히 녹인 후 540 nm에서 Micro-Reader(Molecular Devices, Sunny vale, CA, USA)로 흡광도를 측정하였으며, 실험은 3회 반복하여 평균값을 결과에 이용하였다.
- 0X106 cells/mL가 되도록 종양세포 부유액을 만들어 1 mL씩을 복강 주사하여 이식 보존하면서 실험에 사용하였다. 고형암 성장 억제 실험은 각 군당 6마리 마우스의 왼쪽 서혜부(left groin)에 sarcoma-180 종양세포 부유액 0.2 mL(6x106 cells/mouse)씩을 피하 이식하고, 24시간 후부터 20일간 매일 1회씩 PBS에 녹인 시료 용액 200 此를 복강으로 투여하였다. 종양세포 이식 26〜30일째 되는 날 치사시켜 생성된 고형암을 적출하고 그 무게를 측정한 후 다음 식에 따라 종양 성장 저지 백분율 (tumor growth inhibition ratio, I.
- 도라지 70% 에탄올 추출물 및 분획물들의 in io에서의 항암 효과를 검토하기 위하여 복수 암세포(sarcoma-180) 를 이용한 실험동물에서의 고형암 성장 억제 효과를 알아보았으며, 그 결과는 Table 2에 나타내었다. 도라지를 첨가하지 않은 군의 종양 무게는 3.
- 도라지 에틸아세테이트 분획물의 NDMA 생성 억제 효과도라지 추출물과 5개의 분획물들 중에 에틸아세테이트 분획물은 가장 높은 항돌연변이 및 항암 효과가 있었으므로 NDMA 생성 억제 효과를 알아보기 위해 에틸아세테이트 분획물을 선택하였다. NDMA는 강력한 발암 물질로 아질산염과 아민이 산성조건 하에서 반응하여 생성된다(15).
- 메탄올 추출은 다양한 성분의 추출이 용이한 장점이 있으나 당성분이나 사포닌처럼 추출 대상에 따라서 에탄올을 사용하기도 한다. 도라지의 주요 생리활성 물질이 사포닌으로 알려져 있어(3) 본 연구에서는 에탄올을 사용하여 추출하였다. 비극성의 대표적인 용매는 헥산이 있고, 극성용매로는 알코올과 물 그리고 중간 정도로는 에틸아세테이트가 있다(5).
- 사용하였다. 동물사육실 실험조건은 온도 23±2°C, 습도 45~55%로 유지시켰으며, 조명은 오전 9시에 자동 점등, 오후 9시에 자동 소등하여 12시간 간격으로 조명을 조절하였다. 사료는 (주)샘타코 표준사료로 사용하였고 물은 증류수를 공급하였으며, 사료와 물을 자유롭게 먹도록 하였다.
- 도라지 에탄올 추출물을 50, 100, 150, 200 및 1, 000 ug/plate의 여러 농도로 첨가하여 실험한 결과 음성대조군에 비하여 농도에 따른 집락수 변화가 유의적으로 나타나지 않았다. 또한 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물 분획물에 대해서도 50, 100, 150, 200 및 1, 000 ug/plate의 여러 농도로 첨가하여 실험한 결과 음성대조군에 비하여 농도에 따른 유의적인 변화를 나타내지 않았다. 도라지 70% 에탄올 추출물, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물 분획물은 1, 000 ug/plate에서도 돌연변이성을 나타내지 않았지만 고농도라 제외하였고, 항돌연변이 실험을 위한 농도를 0〜 200 ug/plate로 하였다.
- 본 실험에서는 도라지 70% 에탄올 추출물 및 분획물들에 대해서 인간 자궁암세포(HeLa), 인간 간암세포(HepG2), 인간 유방암세포(MCF-7), 인간 폐암세포(A549)와 인간의 정상 신장세포(293)를 사용하여 SRB assay 방법으로 인간 암세포 성장 억제 효과를 Fig. 3~7에 나타내었다. SRB as- say는 미국 국립 암연구소에서 많이 사용되는 방법으로 특히 항암제를 대량 및 신속하게 검토할 수 있는 장점이 있고 주위 환경 변화에 덜 민감하고 중간 대사물에 영향을 받지 않는 안정한 end point를 제공해 주는 것으로 알려져 있다 (17).
- 본 연구에서는 70% 에탄올로 추출하여 얻은 농축물을 용매의 극성 차이에 따라 분리를 행하여 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물 분획물 순서로 다섯 가지 분획물들을 얻었다. 일반적으로 어떤 시료에 대해서 생리활성을 검정하고자 할 때는 통상 메탄올 추출한 후 다음 단계를 진행한다.
- 이것을 37°C에서 20분간 진탕 배양한 다음 상기의 돌연변이원성 실험과 같은 방법으로 실험하여 생성된 복귀돌연변이 colony 수를 측정하여 항돌연변이 원성 유무를 판정하였다. 시료와 변이원 물질의 농도는 예비실험을 통하여 결정하였으며 항돌연변이 활성은 변이원 물질의 활성에 대한 시료의 억제율(inhibition, %) 로 나타내었다.
- NDMA는 강력한 발암 물질로 아질산염과 아민이 산성조건 하에서 반응하여 생성된다(15). 아질산염, 2급 아민 그리고 시료를 산성조건(pH 2.5)에서 반응 시켜 도라지 에틸아세테이트 분획물들이 NDMA 생성에 미치는 영향력을 알아보았고, 그 결과는 Table 3과 같다. 도라지 에틸아세테이트 분획물은 농도 의존적으로 NDMA 생성 억제 효과를 나타내었고, 5 mg/mL 처리군에서는 75.
- 4)로 전체량이 700 uL가되도록 하였다. 이것을 37oC에서 30분간 preincubation 한 다음 histidine/biotin이 첨가된 top agar를 2 mL씩 가하여 잘 혼합한 후에 미리 조제해 놓은 minimal glucose agar plate 상에 도말하고 평판 고화시켜 37oC에서 48시간 배양하여 생긴 복귀돌연변이(his+ revertants colony) 수를 즉정하여 돌연변이원성의 유무를 판정하였다.
- 2 M sodium phosphate buffer를 가하여 최종부피가 700 uL가 되도록 하였다. 이것을 37°C에서 20분간 진탕 배양한 다음 상기의 돌연변이원성 실험과 같은 방법으로 실험하여 생성된 복귀돌연변이 colony 수를 측정하여 항돌연변이 원성 유무를 판정하였다. 시료와 변이원 물질의 농도는 예비실험을 통하여 결정하였으며 항돌연변이 활성은 변이원 물질의 활성에 대한 시료의 억제율(inhibition, %) 로 나타내었다.
- 2 mL(6x106 cells/mouse)씩을 피하 이식하고, 24시간 후부터 20일간 매일 1회씩 PBS에 녹인 시료 용액 200 此를 복강으로 투여하였다. 종양세포 이식 26〜30일째 되는 날 치사시켜 생성된 고형암을 적출하고 그 무게를 측정한 후 다음 식에 따라 종양 성장 저지 백분율 (tumor growth inhibition ratio, I.R.: %)을 계산하였다.
- 항돌연변이원성을 검토하기 위하여 Ames test에서 양성반응을 나타내며, 직접 변이원 물질로 알려진 MNNG와 4NQO를 사용하여 각각의 농도에 따른 항돌연변이 원성을 검토하였다. 도라지 70% 에탄올 추출물과 그 분획물들의 항돌연변이 실험 결과는 Fig.
대상 데이터
- 02% EDTA 그리고 100 units/mL penicillin-streptomycin(PEST)은 Gibco(Grand Island, NY, USA)로부터 구입하였다. HeLa, HepG2, MCF- 7 및 293 세포주는 DMEM 배지를, A549 세포주는 RPMI 1640 배지를 이용하였고, 10% FBS오} 1% PEST를 함유한 배지로 37°C, 5% CO2 조건에서 각각 배양시켰다.
- Mouse sarcoma cell line(sarcoma-180)은 한국세포주은행에서 구입하여 사용하였다. 실험에 이용한 sarcoma- 180 종양세포는 Balb/c 마우스의 복강 내에 7~10일 간격으로 계대배양 하여 보존하면서 사용하였다.
- 본 실험에 사용한 도라지는 국내산 4년근으로 구룡제약 (주)(Cheolwon, Korea)로부터 분말 형태로 제공받아 시료 중량의 10배인 70% 에탄올을 첨가하고 80°C에서 8시간 동안 3회 추출하였다. 감압여 과 장치에서 뜨거운 상태로 여과한 후 감압농축기를 사용하여 추출용매를 제거한 다음 농축물을 얻었다.
- 본 실험에 사용한 실험동물은 웅성 Balb/c 마우스로 체중이 25 g 전후의 것을 샘타코(주)(Osan, Korea)에서 분양받아 일주일간 적응시켜 사용하였으며, 각각의 실험군당 6마리를 사용하였다. 동물사육실 실험조건은 온도 23±2°C, 습도 45~55%로 유지시켰으며, 조명은 오전 9시에 자동 점등, 오후 9시에 자동 소등하여 12시간 간격으로 조명을 조절하였다.
- 동물사육실 실험조건은 온도 23±2°C, 습도 45~55%로 유지시켰으며, 조명은 오전 9시에 자동 점등, 오후 9시에 자동 소등하여 12시간 간격으로 조명을 조절하였다. 사료는 (주)샘타코 표준사료로 사용하였고 물은 증류수를 공급하였으며, 사료와 물을 자유롭게 먹도록 하였다. 동물실험은 강원대학교 윤리위원회의 승인을 받아 시행되었으며 강원대학교 동물실험 윤리지침을 준수하였다.
- 세포배양에 필요한 배지로 RPMI 1640, Dul- becco's modified Eagle's medium(DMEM), fetal bovine serum(FBS), 0.05% trypsin-0.02% EDTA 그리고 100 units/mL penicillin-streptomycin(PEST)은 Gibco(Grand Island, NY, USA)로부터 구입하였다. HeLa, HepG2, MCF- 7 및 293 세포주는 DMEM 배지를, A549 세포주는 RPMI 1640 배지를 이용하였고, 10% FBS오} 1% PEST를 함유한 배지로 37°C, 5% CO2 조건에서 각각 배양시켰다.
- 구입하여 사용하였다. 실험에 이용한 sarcoma- 180 종양세포는 Balb/c 마우스의 복강 내에 7~10일 간격으로 계대배양 하여 보존하면서 사용하였다. 즉 실험동물의 복강 내에서 7~10일간 배양된 sarcoma-180 세포를 복수오} 함께 취하고 phosphate buffered saline(PBS)과 함께 원심분리(1, 200 rpm, 10 min) 하여 종양세포를 분리하였다.
- 인체 암세포주는 HeLa 인간 자궁경부암세포(HeLa hu man cervical adenocarcinoma), HepG2 인간 간암세포 (HepG2 human hepatocellular carcinoma), MCF-7 인간 유방암세포(MCF-7 human breast adenocarcinoma), A549 인간 폐암세포(A549 human lung carcinoma) 그리고 293 인간 신장정상세포(293 transformed primary human em bryonal kidney)이며, 한국세포주은행(Seoul, Korea) 에서 분양받았다. 세포배양에 필요한 배지로 RPMI 1640, Dul- becco's modified Eagle's medium(DMEM), fetal bovine serum(FBS), 0.
- 직접 돌연변이원(direct mutagen)으로 A-methyl-A^- nitro-A-nitroso-guanidine(MNNG; Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA)과 4-nitroquinoline 1-oxide(4NQO; Sigma-Aldrich Co.)를 dimethyl sulfoxide(DMSO)에 녹여 실험에 사용하였다. 돌연변이원성 실험은 Salmonella Typhimurium의 변이주인 TA98과 TA100을 이용하여 Ames test를 개량한 preincubation(12)법으로 실시하였다.
데이터처리
- 2) Means with the different letters (a-c) within a column are significantly different by Duncan's multiple range test (P<0.05).
- 2) Means with the different letters (a-c) within a column are significantly different by Duncan's multiple range test (P<0.05).
- NS: not significant. Means with the different letters (a-c) above the bars in the same concentration are significantly different by Duncan's multiple range test (P<0.05).
- Each value represents the mean土SD of three plates. Means with the different letters (a-d) above the bars in the same concentration are significantly different by Duncan's multiple range test (P<0.05).
- 실험에서 얻어진 결과의 통계적 유의성은 SPSS(Version 10.0, SPSS, Chicago, IL, USA) program을 이용하여 실험군당 평균士표준편차로 표시하였고, 각 농도의 평균차의 통계적 유의성을 P<0.05 수준에서 Duncan's multiple range test에 의해 검정하였다.
이론/모형
- )를 dimethyl sulfoxide(DMSO)에 녹여 실험에 사용하였다. 돌연변이원성 실험은 Salmonella Typhimurium의 변이주인 TA98과 TA100을 이용하여 Ames test를 개량한 preincubation(12)법으로 실시하였다. 시료를 미리 건열 멸균시킨 glass cap tube에 각각 50 卩L씩 가하고 여기에 전 배양시킨 균액 100 uL를 가한 다음 0.
- 5)으로 총 부피를 10 mL로 만들어 37°C에서 1시간 반응시켰다. 반응 후 ammonium sulfamate 500 mg을 가한 다음 dichloromethane(DCM) 1 mL로 DCM층을 모아 무수황산나트륨으로 탈수시켜 Chung 등(9, 14)의 방법으로 분석 및 동정하였다.
- 세포 단백질 염색을 이용하여 세포 증식이나 독성을 측정하는 SRB(sulforhodamine B) assay(13)를 이용하여 항암 활성을 알아보았다. HeLa, HepG2, MCF-7, A549오} 293 을 10% FBS가 함유하는 RPMI 1640 또는 DMEM 배지를 사용하여 5X104 cells/mL 농도로 100 uL씩 각 well에 첨가하여 24시간 동안 배양시킨 후 배지에 녹인 다양한 농도의 시료를 100 uL씩 첨가하여 48시간 동안 다시 배양하였다.
성능/효과
- 2에 나타내었다. 4NQO에 의한 S Typhimurium TA98 및 TA100 돌연변이를 70% 에탄올 추출물 및 분획물 처리에 의해 농도 의존적으로 억제되었다. S Typhimurium TA98의 경우 시료 농도 200 ug/plate에서 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물에서 각각 69.
- 1과 2에 나타내었다. MNNG (0.4 ug/plate)의 경우 S Typhimurium TA100에서 농도 의존적으로 변이원성 억제 효과를 나타내었으며, 특히 시료농도 200 ug/plate에서 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올분획물에서 각각 64.2% 및 61.1%로 다른 분획물들에 비하여 유의적으로 높은 항돌연변이원성을 나타내었다(Fig. 1). 또한 같은 농도에서 물 분획물, 70% 에탄올 추출물, 헥산 및 클로로포름 분획물에서 각각 53.
- 고형암을 유발시키면서 도라지 추출물과 그것의 분획물들의 고형암 성장 억제 효과를 알아본 결과 농도 의존적으로 고형암 성장 억제 효과를 나타냈고 도라지 에틸아세테이트 분획물이 가장 높은 억제 효과를 보였다. 그리고 도라지 에틸아세테이트 분획물은 NDMA 생성을 억제하였다.
- 더하여 도라지 에틸아세테이트 분획물을 강한 발암물질인 NDMA 생성 억제 효과를 알아본 결과 강한 NDMA 생성 억제 효과를 나타내었다. 따라서 도라지 에틸아세테이트 분획물은 발암물질인 NDMA 생성 억제, 항돌연변이 효과에 의해 암 발생의 위험을 줄여주므로 항암 활성을 나타내는 천연 항암 소재로 활용 가능할 수 있다는 것을 제시하였다.
- 음성대조군의 복귀돌연변이 집락수는 TA 98이 28±5, TA100은 182±12로 나타났다. 도라지 에탄올 추출물을 50, 100, 150, 200 및 1, 000 ug/plate의 여러 농도로 첨가하여 실험한 결과 음성대조군에 비하여 농도에 따른 집락수 변화가 유의적으로 나타나지 않았다. 또한 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물 분획물에 대해서도 50, 100, 150, 200 및 1, 000 ug/plate의 여러 농도로 첨가하여 실험한 결과 음성대조군에 비하여 농도에 따른 유의적인 변화를 나타내지 않았다.
- 5)에서 반응 시켜 도라지 에틸아세테이트 분획물들이 NDMA 생성에 미치는 영향력을 알아보았고, 그 결과는 Table 3과 같다. 도라지 에틸아세테이트 분획물은 농도 의존적으로 NDMA 생성 억제 효과를 나타내었고, 5 mg/mL 처리군에서는 75.5% NDMA 생성 억제 효과를 나타내었다(Table 3).
- 더하여 도라지 에틸아세테이트 분획물을 강한 발암물질인 NDMA 생성 억제 효과를 알아본 결과 강한 NDMA 생성 억제 효과를 나타내었다. 따라서 도라지 에틸아세테이트 분획물은 발암물질인 NDMA 생성 억제, 항돌연변이 효과에 의해 암 발생의 위험을 줄여주므로 항암 활성을 나타내는 천연 항암 소재로 활용 가능할 수 있다는 것을 제시하였다.
- 그리고 도라지 에틸아세테이트 분획물은 NDMA 생성을 억제하였다. 따라서 도라지 에틸아세테이트 분획물은 항돌연변이 및 항암 효과가 있었고 현재 실험 조건에서 안전한 새로운 항암 소재 후보라는 것을 알 수 있었다.
- 비극성의 대표적인 용매는 헥산이 있고, 극성용매로는 알코올과 물 그리고 중간 정도로는 에틸아세테이트가 있다(5). 따라서 본 연구에서는 도라지에 들어 있는 유기화합물 중에서 비극성 물질로부터 차차 극성이 근 물질 순으로 추출하였고 중간 정도의 극성을 가진 에틸아세테이트 분획물이 가장 강한 항돌연변이 및 항암 효과가 있었다. 약용식물의 에틸아세테이트 분획 물은 사포닌이 함유되어있고(18) 식물 유래 기능성 영양성분 중 페놀성 화합물은 에틸아세테이트에 잘 용해된다(19).
- 56%의 유의적인 감소를 나타내었으며 다른 분획물에 비해 높은 억제율을 나타내었다. 또한 50 mg/kg의 고농도에서는 에틸아세테이트 분획물, 클로로포름 분획물 및 부탄올 분획물에서의 고형암 무게는 각각 1.44 g, 1.85 g 및 1.96 g으로 대조군에 비하여 각각 62.98%, 52.57% 및 49.67%의 고형암 성장억제 효과를 나타내었 으며, 특히 에틸아세테 이트 분획물에서 가장 높은 고형암 성장 억제 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다.
- 1). 또한 같은 농도에서 물 분획물, 70% 에탄올 추출물, 헥산 및 클로로포름 분획물에서 각각 53.9%, 53.6%, 45.5% 및 43.6% 순으로 돌연변이를 억제하는 것으로 나타났다(Fig. 1). Shon 등(8)은 S.
- 이는 암세포에 대한 높은 억제 효과에 비해 정상 세포에 대해서는 비교적 낮은 독성 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 이상의 결과로부터 HeLa, HepG2 및 A549 세포에서는 도라지 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물이 다른 분획물에 비해 높은 암세포 성장 억제율을 나타내었다. Jang 등(4)은 부탄올 분획물이 세포 내 활성산소종 생성억제 효과 및 NO 생성 저해 효과가 메탄올 추출물보다 높다고 보고하여 본 연구 결과와 같이 부탄올 분획물에서 높은 활성을 나타내었다.
- 이상의 결과를 종합해보면 도라지 70% 에탄올 추출물과 분획물들은 항돌연변이원성, 암세포주에 대한 성장 억제 효과 및 항종양 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 도라지 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물은 다른 분획물에 비해 강한 항돌연변이원성 , in vitro 및 in vivo에서 항암 활성을 나타내었다. 더하여 도라지 에틸아세테이트 분획물을 강한 발암물질인 NDMA 생성 억제 효과를 알아본 결과 강한 NDMA 생성 억제 효과를 나타내었다.
- 3). 인간 간암세포인 HepG2 세포에서 에틸아세테이트 분획물을 1 mg/mL의 농도로 처리하였을 때 72.0%로 높은 암세포 성장 억제율을 나타내었고, 부탄올및 물 분획물 그리고 70% 에탄올 추출물에서는 모두 60% 이상의 억제율을 나타내었다(Fig. 4). 인간 유방암세포인 MCF-7에서는 부탄올 분획물을 1 mg/mL의 농도로 처리하였을 때 71.
- 4). 인간 유방암세포인 MCF-7에서는 부탄올 분획물을 1 mg/mL의 농도로 처리하였을 때 71.4%로 높은 암세포 성장 억제율을 나타내었으며, 그다음으로 같은 농도에서 헥산 분획물은 69.1%, 에틸아세테이트 분획물은 67.4%, 70% 에탄올 추출물은 60.2%, 클로로포름 분획물은 57.7% 및 물 분획물은 54.6% 순으로 억제율을 나타내었다(Fig. 5). 인간 폐암세포인 A549에 대한 도라지 70% 에탄올 추출물 및 모든 분획물에서 50% 이상의 암세포 성장 억제율을 나타냈으며, 0.
- 인간 자궁암세포인 HeLa에 대한 도라지 추출물과 분획물의 억제 효과를 검토한 결과 1 mg/mL의 농도에서 50% 이상의 억제 활성을 나타내었으며, 특히 도라지 에틸아세테이트 분획물과 부탄올 분획물에서 다른 분획물들보다 높은 억제 활성을 보여주었는데 각각 66.1% 및 62.6%의 억제율을 나타내었다(Fig. 3). 인간 간암세포인 HepG2 세포에서 에틸아세테이트 분획물을 1 mg/mL의 농도로 처리하였을 때 72.
- 5). 인간 폐암세포인 A549에 대한 도라지 70% 에탄올 추출물 및 모든 분획물에서 50% 이상의 암세포 성장 억제율을 나타냈으며, 0.25~0.75 mg/mL 처리 농도에서는 부탄올 분획물이 가장 높은 암세포 성장억제율을 나타내었으나 1 mg/mL 처리 농도에서는 에틸아세테이트 분획물이 가장 높은 암세포 성장 억제율을 나타내었다(Fig. 6). 반면 인간 정상세포 293에 대해서는 모든 처리 군에서 30% 이하의 낮은 암세포 성장 억제 효과를 나타내었다(Fig.
- 91 g이었으나 도라지 70% 에탄올 추출물 및 분획물을 투여한 군에서는 종양의 크기가 유의적으로 줄어든 것을 알 수 있었다. 즉 도라지 에틸아세테이트 분획물의 농도를 25 mg/kg의 저농도로 처리하였을 경우 고형암의 무게는 2.44 g으로 대조군에 비하여 37.56%의 유의적인 감소를 나타내었으며 다른 분획물에 비해 높은 억제율을 나타내었다. 또한 50 mg/kg의 고농도에서는 에틸아세테이트 분획물, 클로로포름 분획물 및 부탄올 분획물에서의 고형암 무게는 각각 1.
후속연구
- 따라서 도라지의 주요 생리활성 물질은 중간 정도의 극성을 가진 용매인 에틸아세테이트 분획물에 잘 용해되는 사포닌, 페놀성 화합물 등일 것으로 추정된다. 도라지 에틸아세테이트 분획물에 함유된 생리활성 물질 분리, 분석 및 동정에 대한 연구와 이들 단일물질의 항돌연변이 및 항암 효과 등의 생리활성에 관한 연구들이 계속되어야 할 것이다.
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