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Bacillus licheniformis GA9가 생산하는 키틴 분해효소의 정제 및 특성

Purification and Characterization of a Chitinolytic Enzyme Produced by Bacillus licheniformis GA9

Microbiology and biotechnology letters = 한국미생물·생명공학회지, v.44 no.4, 2016년, pp.470 - 478  

황동호 (연세대학교 생명과학기술학부) ,  홍성욱 (세계김치연구소) ,  황형서 (세명대학교 한방바이오융합과학부) ,  정건섭 (연세대학교 생명과학기술학부)

초록
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지렁이의 장내로부터 분리한 미생물 중에서 키틴 가수분해 활성이 우수한 미생물을 선발하였으며, 이를 동정하여 Bacillus licheniformis GA9으로 명명하였다. B. licheniformis GA9이 생산하는 키틴 분해효소의 정제는 배양상등액 40-60% 황산암모늄 침전, 음이온교환 크로마토그래피, 겔 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 최종적으로 정제한 키틴 분해효소는 45.2배로 정제되었고 효소단백질 회수율은 20.0%를 나타내었다. 정제한 키틴 분해효소의 분자량은 약 52.1 kDa으로 나타났으며, N-terminal amino acid sequencing 분석결과, 아미노산 서열은 D-S-G-K-N-G-K-I-I-R-Y-Y-P-IR로 확인되었다. 키틴 분해효소의 최적반응 pH와 pH 안정성을 측정한 결과, pH 5.0에서 최대 활성을 나타내었으며 pH 5.0-6.0에서 안정성을 나타내었다. 키틴 분해효소의 최적반응 온도와 온도안정성의 경우, $40^{\circ}C$에서 최대 활성을 나타내었으며, $60^{\circ}C$까지 60%의 잔존 활성을 나타내었다. 정제한 키틴 분해효소는 10 mM $Co^{2+}$ 금속이온에 의해 효소활성이 증가하였으며, $Fe^{2+}$$Cu^{2+}$ 금속이온에 의해 효소활성이 감소하였으나, EDTA 첨가시 감소한 효소활성이 일부 회복되었다. 정제한 효소의 $K_m$$V_{max}$는 각각 4.02 mg/ml와 0.52 mg/min이었다. 또한 키틴 분해효소는 생명공학, 생물의약, 농업, 식품영양 등 다양한 산업분야에서 응용이 가능하다.

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A bacterium producing a large amount of chitinolytic enzyme was isolated from the intestinal tract of earthworm. The isolate was identified as Bacillus licheniformis by 16S ribosomal RNA analysis and designated as B. licheniformis GA9. The enzyme was purified by 40-60% ammonium sulfate precipitation...

주제어

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문제 정의

  • 본 연구는 키틴 분해효소를 산업적으로 활용하기 위해 키틴 분해활성이 우수한 미생물을 지렁이 장내에서 분리 및 선발하였고, 선발 미생물이 생산하는 키틴 분해효소를 정제하고 이화학적 특성을 확인하였다.
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