[논문]배양액 용량이 B6D2F1 마우스 배아발생능력에 미치는 영향

유창석; 박기상; 서병부

doi:10.12750/jet.2016.31.1.27

배양액 용량이 B6D2F1 마우스 배아발생능력에 미치는 영향
Effect of Different Volume of Microdrop Culture on B6D2F1 Mice Oogenesis 원문보기

Journal of embryo transfer = 한국수정란이식학회지, v.31 no.1, 2016년, pp.27 - 32

유창석 (대구대학교 동물자원학과) , 박기상 (대구대학교 동물자원학과) , 서병부 (대구대학교 동물자원학과)

Abstract ▼ AI-Helper

This study was conducted to evaluate the effects of different volume ($100{\mu}l$ vs. 2 ml) of microdrop culture on B6D2F1 mice oogenesis. In the present study, B6D2F1/CrljOri $F_1$ mice were utilized in order to maximize oogenesis. Also we used TCM-199, Dulbecco's medified Eagle's medium (DMEM), embryo culture medium (Fertilization medium, Cleavage medium, Blastocyst medium), G series medium and One step medium. Blastulation rate was not different between groups ($58.4{\pm}2.9%$ vs. $61.2{\pm}4.8%$). Zona hatched rate ($38{\pm}15.4%$ vs. $27{\pm}3.4%$) and attached rate ($55{\pm}13.9%$ vs. $46{\pm}3.9%$) did not differ by the volume of culture media. Total cell numbers ($59.8{\pm}9.7$ vs. $70.3{\pm}8.7$), ICM cell numbers ($15.8{\pm}0.6$ vs. $16.8{\pm}1.5$), TE cell numbers ($44.0{\pm}9.7$ vs. $53.6{\pm}7.3$), % ICM ($26.4{\pm}2.9%$ vs. $23.8{\pm}3.3%$) and ICM:TE ratio ($1:2.8{\pm}0.4$ vs. $1:3.2{\pm}0.6$) were not different between groups (i.e., $100{\mu}l$ vs. 2 ml). These results show that the capacity of the culture medium did not effect the cell numbers of B6D2F1 mice blastocysts. In summary, these results can provide fundamental data to maximize culture condition for in vitro fertilization on B6D2F1 mice.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 배양액의 용량(100 μl와 2 ml)이 B6D2F1 마우스 배아의 발생능력에 미치는 영향에 관하여 실험을 실시하였다. B6D2F1 마우스 2세포기 배아의 포배아 발달율은 100 μl군에서 58.

제안 방법

배양액 용량(100 μl와 2 ml)이 B6D2F1 마우스 2세포기 배아의 포배아 형성률에 미치는 영향을 확인하기 위하여 미성숙 난자를 체외성숙시키고, 수정 후 24시간 뒤에 온전하게 할구가 분할된 2세포기의 배아만을 이용하여 실험에 이용하였다. 각 실험군당 10∼15개의 배아를 배양하여 관찰하였으며, B6D2F1 마우스 2세포기 배아의 포배아 형성률의 결과는 Table 1에 나타내었다.

대상 데이터

G1 plus 배양액(Vitrolife, Sweden)과 Cleavage medium(CM) (COOk Medical, Austraila)은 2PN∼8세포기 단계까지 사용하였다. 그리고 G2 plus 배양액(Vitrolife,, Sweden)과 Blastocyst medium(BM) (COOk Medical, Australia)은 8세포기에서 포배아 단계까지 사용하였다. 정자부유 배양액으로 GIVF(Vitrolife, Sweden), 정자의 수정능획득과 체외수정 배양액으로 Fertilization medium(FM) (COOk Medical, Australia)을 사용하였다.
본 실험에서는 국내에서 사육 중인 Hybrid 계통의 B6D2F1 마우스(모계:C57BL/6NCrIBR. 부계:DBA/2CrIBR)를 사용하였으며, 암컷은 생후 5∼8주령, 수컷은 9∼13주령인 것을 사용하였다(오리엔트바이오). 실험동물은 약 일주일동안 동물이 새로운 사육환경에 적응하고, 최소한의 스트레스를 받도록 적응기간을 두고 실험을 실시하였다.
그리고 G2 plus 배양액(Vitrolife,, Sweden)과 Blastocyst medium(BM) (COOk Medical, Australia)은 8세포기에서 포배아 단계까지 사용하였다. 정자부유 배양액으로 GIVF(Vitrolife, Sweden), 정자의 수정능획득과 체외수정 배양액으로 Fertilization medium(FM) (COOk Medical, Australia)을 사용하였다.

데이터처리

4, USA)을 이용하여 처리하였다. 각 처리군간 유의성은 LSD와 Duncan 다중검정을 이용하여 5% 수준에서 검정하였다.
실험에 대한 주관적인 관점을 배제하기 위해 실험 배치와 관찰은 완전임의 배치법을 실시하였다. 실험 결과는 백분율로 나타내었고, 불연속 변수에 대한 표준 오차(±SD)와 유의성 검정은 SAS 프로그램(Statistics Analytical System, version 9.4, USA)을 이용하여 처리하였다. 각 처리군간 유의성은 LSD와 Duncan 다중검정을 이용하여 5% 수준에서 검정하였다.

이론/모형

7일간 배양한 경우에는 포배아의 투명대 탈출률과 투명대 탈출 포배아의 부착 유무를 확인하여 착상률을 간접적으로 측정하였다. 배양기간 중 2일에 한 번씩 신선 배양액으로 교환했으며, B6D2F1 마우스 포배아의 이중형광염색은 Park 등(2014)의 방법을 이용하였다.

성능/효과

그리고 본 실험에서 배양액 용량에 따른 B6D2F1 마우스 포배아의 투명대 탈출률은 각각 38±15.4%와 27±3.4%로 두 군간의 유의적인 차이는 나지 않았지만 100 μl군이 2 ml군에 비해서 높은 투명대 탈출률을 보였다. 이는 Park(2003)이 ICR 마우스를 이용하여 보고한 배양액 용량에 따른 배아 발달에서 완전 투명대 탈출률(33.
이러한 실험 결과는 배양액의 용량이 B6D2F1 마우스의 배 반포의 세포 수에 영향을 미치지 않는다는 것을 보여 보여준다. 또한 이 실험의 결과들을 바탕으로 B6D2F1 마우스의 체외 수정 및 배아 배양을 위한 배양 조건의 극대화 및 인간 배아의 체외 수정 및 체외 배양을 위한 임상 실험을 위한 기초 연구 자료로 활용이 가능할 것으로 판단된다.
6로 2 ml군에서 높은 것을 확인할 수 있었다. 한편, ICR 마우스를 이용하여 배양액 용량(50μl와 2 ml)이 포배아의 ICM 세포 수(12.8개와 13.0개), TE 세포 수(47.8개와 49.0개), 총 세포 수(63.7개와 61.6개), % ICM (21.2%와 21.0%) 그리고 ICM:TE ratio(1:3.72와 1:3.77)는 배양액 용량은 포배아의 세포 수와 무관하다고 보고하였으며(Park, 2003), 본 실험은 이러한 결과와 유사한 결과를 얻어 이러한 결과를 종합하여 볼 때 배양액의 용량은 포배아의 세포 수 발달과 무관하다고 판단된다. 그렇지만 Lane과 Gardner(1992)는 마우스 2-세포 배아를 배양할 때, 배양액 소적 당 배아 밀집도는 높이고 배양액 용량은 줄일수록(320 μl에서 20 μl) 포배아 형성 률과 포배아의 세포 수가 유의하게(p<0.

후속연구

이러한 실험 결과는 배양액의 용량이 B6D2F1 마우스의 배 반포의 세포 수에 영향을 미치지 않는다는 것을 보여 보여준다. 또한 이 실험의 결과들을 바탕으로 B6D2F1 마우스의 체외 수정 및 배아 배양을 위한 배양 조건의 극대화 및 인간 배아의 체외 수정 및 체외 배양을 위한 임상 실험을 위한 기초 연구 자료로 활용이 가능할 것으로 판단된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	인공수태시술이 최초로 성공한 때는?	1969년 인간 난자를 이용하여 세계 최초로 체외수정을 성공한 이래 시험관아기 시술을 이용하여 1978년 처음으로 인간의 아기가 태어났다(Chang 등, 1986). 이후 전 세계적으로 수많은 기관에서 인공수태시술을 시행하고 있으나, 아직도 체외수정 술을 이용한 임신 성공률의 향상에는 한계가 있는 것이 사실이다.
	임신 성공에 영향을 미치는 요인은?	이후 전 세계적으로 수많은 기관에서 인공수태시술을 시행하고 있으나, 아직도 체외수정 술을 이용한 임신 성공률의 향상에는 한계가 있는 것이 사실이다. 임신 성공에 영향을 미치는 요인으로는 여성 환자의 나이 또는 건강상태 불임요인, 시술자의 경험, 환경적 요인(배양실 온도, 습도, 배양기, 장비 등)이 있다(Ashworth 등, 2009). 또한 미성숙난자를 이용한 체외수정시술로 많은 출생이 보고 되고 있으나, 아직까지 그 성공률은 과배란 유도 후 얻은 성숙난자를 이용한 체외수정시술에 비하면 많이 낮은 것으로 알려져 있다(De Vos 등, 1999).
	미성숙 난자의 성숙을 유도하는 방법은?	또한 미성숙난자를 이용한 체외수정시술로 많은 출생이 보고 되고 있으나, 아직까지 그 성공률은 과배란 유도 후 얻은 성숙난자를 이용한 체외수정시술에 비하면 많이 낮은 것으로 알려져 있다(De Vos 등, 1999). 미성숙 난자의 성숙을 유도하기 위해서는 외인성 성선자극호르몬(Exogenous gonadotropin) (Park 등, 1994a, 1994b, 1994c; Greve 등, 1995; Meyer 등, 1999)이나 성장인자(Glowth factor) (Uhm 등, 2010), 단백질원을 투여하여 배양하거나, 생식기관의 상피세포(Uterine epithelial cell)나 난포에서 얻은 과립막 세포(Granulosa cell) 또는 vero cell과 함께 공배양을 하여 성숙을 유도하였다(Kim 등, 1995; Kim 등, 2002; Moulavi 등, 2006). 또한 성숙 과정에서 불완전한 배양액의 조성때문에 투명대 경화 현상이 일어나 수정이 잘 되지 않거나, 수정에 실패하는 경우가 발생하기도 한다(Park 등, 2000).

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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