[논문]꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 잎으로부터 분리된 다당류 추출물의 면역 활성

변의백; 장범수; 성낙윤; 변의홍

doi:10.3746/jkfn.2016.45.8.1099

꾸지뽕(Cudrania tricuspidata) 잎으로부터 분리된 다당류 추출물의 면역 활성
Immunomodulatory Activity of Crude Polysaccharide Separated from Cudrania tricuspidata Leaf 원문보기

한국식품영양과학회지 = Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition, v.45 no.8, 2016년, pp.1099 - 1106

변의백 (한국원자력연구원) , 장범수 (한국원자력연구원) , 성낙윤 (공주대학교 식품공학과) , 변의홍 (공주대학교 식품공학과)

초록
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본 연구는 꾸지뽕 잎으로부터 추출된 다당류인 CTP의 처리가 면역세포의 활성에 미치는 영향에 관하여 평가하였다. CTP는 에탄올 침전법에 의하여 추출하였고, 면역 활성능의 평가는 대식세포주인 RAW 264.7 세포와 미분화 골수세포로부터 유도 분화시킨 대식세포 및 마우스 비장으로부터 유리시킨 비장세포에 CTP를 농도별로 처리하여 관찰하였다. 선천면역계에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포에 CTP를 처리하였을 때 세포 증식률, NO 및 cytokine 분비능이 CTP 처리 농도 의존적으로 증가하는 것으로 관찰되었을 뿐만 아니라 비장세포에서도 이와 유사하게 세포 증식률이 증가하고 Th 1 type의 cytokine 분비능 또한 유의적으로 증가하는 것으로 관찰되었다. 이상의 결과로 미루어보아 꾸지뽕다당류 추출물인 CTP는 다양한 면역세포의 활성을 증가시키는 것으로 생각하며 이를 활용하여 다양한 식품 및 건강보조식품을 개발한다면 그 경제적 가치가 매우 클 것으로 생각한다.

Abstract ▼ AI-Helper

The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory activity of crude polysaccharide separated from Cudrania tricuspidata leaf. C. tricuspidata polysaccharide (CTP) was extracted by ethanol precipitation. Immunomodulation activity was tested in macrophage cells (RAW 264.7 and bone-marrow derived macrophage) and splenocytes. CTP treatment significantly increased cell proliferation up to $250{\mu}g/mL$ in both RAW 264.7 and bone-marrow derived macrophages. In this concentration range (below $250{\mu}g/mL$), nitric oxide and cytokine [tumor necrosis factor $(TNF)-{\alpha}$ and interleukin (IL)-6] production also significantly increased. Similarly, splenocyte proliferation dosedependently increased except for the $1,000{\mu}g/mL$ treated group. Regarding cytokine production activity in splenocytes, CTP treatment significantly increased production of Th 1 type cytokines [interferon $(IFN)-{\gamma}$] production but not Th 2 type cytokines (IL-4). Therefore, the results indicate that CTP may have a potential effect on immunomodulatory activity in various immune cells, and this is useful for development of immune enhancing adjuvant materials as a natural ingredient.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구에서는 예로부터 전통약재로 쓰여 오던 꾸지뽕으로부터 다당류 성분을 추출하고 추출된 다당류 성분의 면역 활성에 관하여 알아보기 위하여 대식세포주(RAW 264.7), 마우스 골수세포로부터 분화된 대식세포(macrophage) 및 비장에서 유리시킨 비장세포(splenocyte) 등의 다양한 면역세포에 처리하여 면역세포의 활성화에 미치는 영향에 관하여 관찰하였다.
본 연구는 CTP의 면역 활성에 미치는 영향에 관하여 관찰하기 위하여 다양한 농도의 CTP를 대식세포주인 RAW 264.7 세포와 마우스에서 분리한 미분화 골수세포에서 분화시킨 대식세포에 처리하여 대식세포의 증식률에 미치는 영향에 관하여 관찰하였다. RAW 264.
본 연구는 꾸지뽕 잎으로부터 추출된 다당류인 CTP의 처리가 면역세포의 활성에 미치는 영향에 관하여 평가하였다. CTP는 에탄올 침전법에 의하여 추출하였고, 면역 활성능의 평가는 대식세포주인 RAW 264.

제안 방법

1주간의 순화를 마친 마우스를 경추 탈골법으로 희생시킨 후 비장을 무균적으로 적출하여 10%의 FBS(Gibco)와 항생제 penicillin과 streptomycin(100 unit/mL, 100 μg/mL, Sigma-Aldrich Co.)을 함유한 RPMI-1640(Life Technology) 배지로 세척한 후 tissue grinder(Corning Costar, Corning, NY, USA)로 균질화하여 비장세포를 유리시켰다.
96 well plate에 3×104 cells/well(RAW 264.7) 및 1×105 cells/well(골수 분화 대식세포)이 되도록 분주하여 100 ng/mL의 lipopolysaccharide(LPS)와 농도별(0, 62.5, 125, 250 및 500 μg/mL) CTP를 각각 처리하여 24시간 동안 배양한 후, 5 mg/mL 농도의 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT, Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO, USA) 시약을 각각의 well에 10 μL 처리하고 2시간 동안 반응시킨 후 배양 상등액을 제거하고 dimethyl sulfoxide(Sigma-Aldrich Co.)를 100 μL씩 첨가한 다음 micro plate reader를 이용하여 517 nm에서 흡광도(optical density, O.D.)를 측정하였다.
본 연구는 꾸지뽕 잎으로부터 추출된 다당류인 CTP의 처리가 면역세포의 활성에 미치는 영향에 관하여 평가하였다. CTP는 에탄올 침전법에 의하여 추출하였고, 면역 활성능의 평가는 대식세포주인 RAW 264.7 세포와 미분화 골수세포로부터 유도 분화시킨 대식세포 및 마우스 비장으로부터 유리시킨 비장세포에 CTP를 농도별로 처리하여 관찰하였다. 선천면역계에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포에 CTP를 처리하였을 때 세포 증식률, NO 및 cytokine 분비능이 CTP 처리 농도 의존적으로 증가하는 것으로 관찰되었을 뿐만 아니라 비장세포에서도 이와 유사하게 세포 증식률이 증가하고 Th 1 type의 cytokine 분비능 또한 유의적으로 증가하는 것으로 관찰되었다.
CTP의 RAW 264.7 세포 및 미분화 골수세포로부터 분화된 대식세포에 대한 세포 증식률 평가를 MTT assay를 통하여 알아보았다. 96 well plate에 3×10⁴ cells/well(RAW 264.
CTP의 처리가 NO 분비량에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 48 well plate에 1×105 cells/well(RAW 264.7) 및 2×105 cells/well(골수 분화 대식세포)이 되도록 세포를 분주하여 100 ng/mL의 LPS와 농도별(62.5, 125, 250 μg/mL) CTP를 첨가한 후 24시간 동안 배양하였다.
CTP의 처리가 cytokine 분비량에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 48 well plate에 1×105 cells/well(RAW 264.7) 및 2×105 cells/well(골수 분화 대식세포)이 되도록 세포를 분주하여 100 ng/mL의 LPS와 농도별(62.5, 125, 250 μg/mL) CTP를 첨가하여 24시간 동안 배양하였다.
CTP의 처리가 비장세포의 cytokine 분비능에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 비장 조직으로부터 유리시킨 비장세포를 48 well plate에 well당 2×106개씩 분주한 후 3 μg/mL의 Con A(Sigma-Aldrich Co.)와 농도별(0, 125, 250, 500 μg/mL) CTP를 처리하여 24시간 동안 반응시키고 배양 상등액에 존재하는 cytokine(IL-2, 4, 5 및 IFN-γ)의 함량에 관하여 측정하였다.
CTP의 처리가 비장세포의 세포증식능에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 96 well plate에 well당 1×106개의 비장세포를 분주한 후, 3 μg/mL의 Concanavalin A(Con A, Sigma-Aldrich Co.)와 농도별(0, 62.5, 125, 250, 500 및 1,000 μg/mL) CTP를 처리하여 37°C로 유지되는 5% CO2 세포 배양기에서 24시간 배양한 후, WST-1Ⓡ(Daeil Lap Science, Seoul, Korea) 용액을 각각의 well에 10 μL씩 첨가하고 2시간 동안 반응시킨 후 450 nm에서 흡광도를 측정하여 비장세포의 증식능을 평가하였다.
CTP의 처리가 비장세포의 증식능에 미치는 영향에 관하여 관찰하기 위하여 농도별(62.5, 125, 250, 500, 1,000 μg/mL) CTP를 비장세포에 24시간 동안 처리한 후 WST-1 방법을 통하여 평가하였다.
배양 상등액을 원심분리기(Hanil)를 사용하여 원심분리(3,000 rpm, 15 min) 한 후, 분리된 배양 상등액에서 cytokine(TNF-α 및 IL-6)의 함량을 측정하였다. Cytokine 함량은 enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) kit(eBioscience Co., San Diego, CA, USA)을 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. Cytokine의 농도는 kit에 포함된 TNF-α와 IL-6의 표준용액(2,000 pg/mL)을 희석하여 얻은 표준 직선과 비교하여 산출하였다.
Cytokine의 농도는 kit에 포함된 TNF-α와 IL-6의 표준용액(2,000 pg/mL)을 희석하여 얻은 표준 직선과 비교하여 산출하였다.
)와 농도별(0, 125, 250, 500 μg/mL) CTP를 처리하여 24시간 동안 반응시키고 배양 상등액에 존재하는 cytokine(IL-2, 4, 5 및 IFN-γ)의 함량에 관하여 측정하였다. Cytokine의 측정은 ELISA kit(eBioscience)을 이용하여 측정하였다.
) 시약을 넣어 암실에서 10분간 반응시킨 후 micro plate reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. NO의 농도는 sodium nitrite(NaNO₂, Sigma-Aldrich Co.)를 사용하여 얻은 표준 직선과 비교하여 산출하였다.
RAW 264.7 대식세포주 및 골수분화 대식세포에 대한 세포 증식률의 평가는 농도별(62.5, 125, 250, 500 μg/mL) CTP를 각각의 면역세포에 24시간 처리한 후 MTT 방법을 통하여 평가하였다(Fig. 1).
상기 실험에서 꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP의 처리가 선천면역 반응에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포의 세포 증식률을 증가시키고, 대식세포의 활성화와 밀접한 관련이 있는 대식세포 활성 인자인 NO 및 cytokine의 분비능을 증가시키는 것으로 확인할 수 있었다. 그 외 CTP의 처리가 다른 면역세포인 비장세포의 면역 활성에 어떠한 영향을 미치는지를 알아보기 위하여 마우스 비장에서 유리시킨 비장 세포에 농도별 CTP를 처리하여 나타나는 면역 활성 효과에 관하여 관찰하였다(Fig. 4). CTP의 처리가 비장세포의 증식능에 미치는 영향에 관하여 관찰하기 위하여 농도별(62.
꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP의 cytokine 분비 유도 효과에 관하여 알아보기 위하여 CTP를 농도별로 처리한 후 세포 배양 상등액에 존재하는 cytokine 함량에 관하여 평가하였다(Fig. 3). LPS 처리군의 경우 대식세포의 면역 활성과 밀접한 관련이 있는 TNF-α 및 IL-6의 분비능을 대식세포주인 RAW 264.
꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP의 면역 활성 유도능에 관해 알아보기 위하여 대식세포주인 RAW 264.7 세포와 골수세포에서 분화시킨 대식세포에 CTP를 농도별로 처리한 후, 세포 배양 상등액에 존재하는 NO 생성량에 관하여 평가하였다(Fig. 2). 양성대조구로서 LPS 처리군의 경우 RAW264.
꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP의 처리가 주요 면역기관인 비장으로부터 유리시킨 비장세포에 면역 활성에 미치는 영향에 관하여 알아보기 위하여 농도별(125, 250, 500 μg/mL) CTP를 비장세포에 처리하여 비장세포가 분비하는 cytokine에 관하여 Th 1 type 및 Th 2 type으로 나누어 측정하였다(Fig. 5).
본 실험에 사용된 꾸지뽕 잎은 경동시장(Seoul, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 꾸지뽕 잎을 증류수로 2~3회 수세하여 음건한 후 실험용 분쇄기(NSG-1002SS, Hanil, Seoul, Korea)를 이용하여 분말화하였다. 꾸지뽕 조다당 추출물을 얻기 위하여 꾸지뽕 잎 분말 100 g을 증류수 2 L에 넣고 100°C에서 2시간 동안 가열하여 추출하였다.
꾸지뽕 조다당 추출물을 얻기 위하여 꾸지뽕 잎 분말 100 g을 증류수 2 L에 넣고 100°C에서 2시간 동안 가열하여 추출하였다.
따라서 면역 활성 실험 시 CTP의 최적농도를 250 μg/mL로 선택하여 추후 RAW 264.7 대식세포주 및 골수 분화 대식세포에 대한 NO 및 cytokine의 분비능 평가 시 CTP의 농도를 250 μg/mL 이하에서 평가하였다.
따라서 비장세포에 대한 CTP의 면역 활성 평가 시 CTP의 최적농도를 비장세포의 증식능이 가장 높게 증가하였던 500 μg/mL로 선택하여 추후 비장세포의 cytokine의 분비 유도능 평가 시 CTP의 농도를 500 μg/mL 이하에서 평가하였다.
또한, 비장세포에 다수 포함된 면역 T 세포의 마이토젠인 Con A(3 μg/mL)를 사용하여 CTP 처리군과 비교하여 보았다.
1). 또한, 양성대조구로서 LPS(100 ng/mL)를 사용하여 비교하여 보았다. LPS 처리군의 경우 RAW 264.
미분화 골수세포를 대식세포로 분화시키기 위하여 10% FBS가 포함된 Dulbecco's modified Eagle's medium(Life Technology)에 2 mM L-glutamine, 100 unit/mL penicillin/streptomycin, 50 μM mercaptoethanol, 0.1 mM non-essential amino acid, 1 mM sodium pyruvate, 25 ng/mL macrophage colony stimulating factor(MC-SF, R&D System, Minneapolis, MN, USA)를 첨가하여 배양하였다.
1 mM non-essential amino acid, 1 mM sodium pyruvate, 25 ng/mL macrophage colony stimulating factor(MC-SF, R&D System, Minneapolis, MN, USA)를 첨가하여 배양하였다. 배양 4일 후 대식세포로의 분화 유무를 확인하기 위하여 특이항체(FITC-conjugated anti-CD11b)를 사용하여 유세포 분석기로 분석한 결과 95% 이상이 대식세포로 분화되었음을 확인하였으며(21), 추후 CTP 면역 활성 실험에 사용하였다.
배양 상등액을 원심분리기(Hanil)를 사용하여 원심분리(3,000 rpm, 15 min) 한 후, 분리된 배양 상등액에서 cytokine(TNF-α 및 IL-6)의 함량을 측정하였다.
5, 125, 250 μg/mL) CTP를 첨가한 후 24시간 동안 배양하였다. 배양 상등액을 원심분리기(Hanil)를 이용하여 원심분리(3,000 rpm, 15 min) 한 후 분리된 배양 상등액에서 NO 함량을 측정하였다. 배양 상등액 100 μL에 동량의 Griess(Sigma-Aldrich Co.
)을 함유한 RPMI-1640(Life Technology) 배지로 세척한 후 tissue grinder(Corning Costar, Corning, NY, USA)로 균질화하여 비장세포를 유리시켰다. 세포현탁액에 적혈구를 제거하기 위하여 RBC lysis buffer(BD Biosciences)를 첨가하여 적혈구를 제거하였고, 혈구계수기를 이용하여 세포 수를 측정하였다.

대상 데이터

본 연구에 이용된 실험동물은 한국원자력연구원 동물실험윤리위원회의 승인을 받아 사용하였다(KAERI-IACUC-2014-006). C57BL/6 마우스로부터 골수 채취용 주사기 (BD Biosciences, San Diego, CA, USA)를 이용해 대퇴부 골수를 채취하였다. 채취한 골수를 차가운 phosphate buffered saline(PBS, Invitrogen Co.
마우스 유래의 대식세포주인 RAW 264.7 세포주는 한국세포주은행(Seoul, Korea)에서 분양받아 실험에 사용하였으며, 10% fetal bovine serum(FBS, Gibco, Carlsbad, CA, USA), 1% antibiotics(100 unit/mL penicillin and 100 unit/mL streptomycin)가 포함된 Roswell Park Memorial Institute(RPMI)-1640 배지(Life Technology, Carlsbad, CA, USA)를 사용하여 37°C, 5% CO2 incubator(Thermo, Waltham, MA, USA)에서 배양하였다.
본 실험에 사용된 꾸지뽕 잎은 경동시장(Seoul, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 꾸지뽕 잎을 증류수로 2~3회 수세하여 음건한 후 실험용 분쇄기(NSG-1002SS, Hanil, Seoul, Korea)를 이용하여 분말화하였다.
본 연구에 이용된 실험동물은 한국원자력연구원 동물실험윤리위원회의 승인을 받아 사용하였다(KAERI-IACUC-2014-006). C57BL/6 마우스로부터 골수 채취용 주사기 (BD Biosciences, San Diego, CA, USA)를 이용해 대퇴부 골수를 채취하였다.

데이터처리

Statistical analysis was performed using Student's two tails t-test with a significant level of * P<0.05, **P<0.01 compared to control (PBS) group.
Statistical analysis was performed using Student's two tails t-test with a significant level of * P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001 compared to control (PBS) group.
Statistical analysis was performed using Student's two tails t-test with a significant level of * P<0.05, **P<0.01, compared to control (PBS) group.
이상의 실험에서 얻어진 결과는 Statistical Package for Social Sciences(SPSS, 10.0, IBM, Chicago, IL, USA)를 이용하여 one-way ANOVA test로 분석하였으며, 시료 간의 유의성은 Student's t-test로 * P<0.05, **P<0.01, ***P< 0.001 수준에서 비교하였다.

이론/모형

CTP의 처리에 따른 비장세포의 활성능 실험은 Kim 등(22)의 방법에 따라 수행하였다. 1주간의 순화를 마친 마우스를 경추 탈골법으로 희생시킨 후 비장을 무균적으로 적출하여 10%의 FBS(Gibco)와 항생제 penicillin과 streptomycin(100 unit/mL, 100 μg/mL, Sigma-Aldrich Co.
PBS로 3회 세척하여 적혈구 찌꺼기를 완전히 제거하였다. 미분화 골수세포의 골수세포로 분화는 Byun 등(20)의 방법에 의하여 수행하였다. 미분화 골수세포를 대식세포로 분화시키기 위하여 10% FBS가 포함된 Dulbecco's modified Eagle's medium(Life Technology)에 2 mM L-glutamine, 100 unit/mL penicillin/streptomycin, 50 μM mercaptoethanol, 0.

성능/효과

CTP 처리구의 경우 마이토젠인 Con A 처리구 수준만큼 cytokine의 분비를 증가시키지는 않았지만 Th1 type의 cytokine인 IL-2 및 IFN-γ의 분비능이 CTP 처리 농도 의존적으로 유의적으로 증가하는 것으로 관찰되었으며, Th 2 type의 cytokine인 IL-4 및 IL-5의 분비능의 경우 유의적인 변화가 관찰되지 않았다.
94 μM로 LPS 처리구에서 유의적인 증가를 나타냈다. CTP 처리구의 경우 양성대조구인 LPS 처리구 수준처럼 NO 분비 유도능이 증가하지는 않지만, 대식세포주인 RAW 264.7 세포와 골수세포에서 분화시킨 대식세포 모두에서 처리 농도 의존적으로 배양 상등액의 NO생성량이 유의적으로 증가하는 것으로 관찰되었다.
또한, 양성대조구로서 LPS(100 ng/mL)를 사용하여 비교하여 보았다. LPS 처리군의 경우 RAW 264.7 대식세포주 및 골수 분화 대식세포에 대한 세포 증식률이 약간 감소하는 것으로 나타났으나 유의적인 차이는 관찰되지 않았다. 그러나 CTP 처리군의 경우 RAW 264.
LPS 처리군의 경우 대식세포의 면역 활성과 밀접한 관련이 있는 TNF-α 및 IL-6의 분비능을 대식세포주인 RAW 264.7 세포(1,084.5±163.50 pg/mL, 1,324.9± 213.79 pg/mL)와 골수세포(1,615.4±123.83 pg/mL, 1,791.7±145.61 pg/mL)에서 분화시킨 대식세포 모두에서 유의적으로 증가시키는 것으로 관찰되었고, CTP 처리군의 경우 양성대조구인 LPS 처리구 수준처럼 cytokine 분비 유도능이 증가하진 않았지만 CTP의 농도가 증가할수록 배양 상등액의 cytokine 함량이 증가하는 것으로 관찰되었다.
그러나 CTP 처리군의 경우 RAW 264.7 대식세포주 및 골수 분화 대식세포 두 세포 모두에서 세포 생존율이 250 μg/mL 농도 처리구에서 가장 높게 증가하다가 점차 감소하는 경향을 나타냈다.
61 pg/mL)에서 분화시킨 대식세포 모두에서 유의적으로 증가시키는 것으로 관찰되었고, CTP 처리군의 경우 양성대조구인 LPS 처리구 수준처럼 cytokine 분비 유도능이 증가하진 않았지만 CTP의 농도가 증가할수록 배양 상등액의 cytokine 함량이 증가하는 것으로 관찰되었다. 따라서 CTP의 처리는 NO 유도 분비능 실험에서와 유사하게 cytokine의 분비량 또한 증가시키는 것으로 나타났고, 이러한 NO 및 cytokine의 분비능 증가는 면역 활성과 밀접한 관련이 있는 것으로 생각한다.
또한, NO 분비능의 증가는 면역세포 내 면역 활성을 유도 및 유지하는 중요한 수단인 nuclear factor(NF)-κB를 활성화해 면역작용을 활발하게 유도시켜 면역조절자(immunomodulator)로 인식된다(24). 따라서 NO 분비능의 증가는 대식세포의 활성화와 밀접한 관련을 가지는 인자이며, 본 연구에서도 CTP의 처리에 따라 NO 분비능이 증가한 것으로 미루어 보아 꾸지뽕 다당류 추출물이 면역조절자로서 면역 활성에 매우 효과가 있을 것으로 생각한다.
따라서 본 연구에서도 TCP의 처리에 따라 TNF-α 및 IL-6의 분비능이 증가한 것으로 미루어 보아 꾸지뽕 다당류 추출물이 면역반응의 연결자인 cytokine의 분비능을 증가시켜 대식세포의 활성화를 유도한 것으로 판단된다.
또한, CTP의 처리에 따른 비장세포의 증식률은 500 μg/mL 처리구에서 최대로 증가하였으며, 그 이상의 농도인 1,000 μg/mL의 농도에서는 감소하는 것으로 관찰되었다.
또한, 비장세포에 다수 포함된 면역 T 세포의 마이토젠인 Con A(3 μg/mL)를 사용하여 CTP 처리군과 비교하여 보았다. 마이토젠 처리구인 Con A 처리군의 경우 비장세포의 증식능을 유의적으로 증가시키는 것으로 관찰되었으며, 농도별 CTP 처리구의 경우 CTP의 처리 농도가 증가할수록 세포증식능이 증가하는 것으로 관찰되었다. 또한, CTP의 처리에 따른 비장세포의 증식률은 500 μg/mL 처리구에서 최대로 증가하였으며, 그 이상의 농도인 1,000 μg/mL의 농도에서는 감소하는 것으로 관찰되었다.
상기 실험에서 꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP의 처리가 선천면역 반응에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포의 세포 증식률을 증가시키고, 대식세포의 활성화와 밀접한 관련이 있는 대식세포 활성 인자인 NO 및 cytokine의 분비능을 증가시키는 것으로 확인할 수 있었다. 그 외 CTP의 처리가 다른 면역세포인 비장세포의 면역 활성에 어떠한 영향을 미치는지를 알아보기 위하여 마우스 비장에서 유리시킨 비장 세포에 농도별 CTP를 처리하여 나타나는 면역 활성 효과에 관하여 관찰하였다(Fig.
7 세포와 미분화 골수세포로부터 유도 분화시킨 대식세포 및 마우스 비장으로부터 유리시킨 비장세포에 CTP를 농도별로 처리하여 관찰하였다. 선천면역계에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포에 CTP를 처리하였을 때 세포 증식률, NO 및 cytokine 분비능이 CTP 처리 농도 의존적으로 증가하는 것으로 관찰되었을 뿐만 아니라 비장세포에서도 이와 유사하게 세포 증식률이 증가하고 Th 1 type의 cytokine 분비능 또한 유의적으로 증가하는 것으로 관찰되었다. 이상의 결과로 미루어보아 꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP는 다양한 면역세포의 활성을 증가시키는 것으로 생각하며 이를 활용하여 다양한 식품 및 건강보조식품을 개발한다면 그 경제적 가치가 매우 클 것으로 생각한다.
양성대조구로서 LPS 처리군의 경우 RAW264.7 대식세포주에서 PBS(control) 처리군이 1.8±0.75 μM, LPS 처리군이 12.3±1.63 μM로 LPS 처리구에서 NO의 함량이 유의적으로 증가하였으며, 골수 분화 대식세포의 경우도 이와 유사하게 PBS(control) 처리군이 1.3±0.87 μM, LPS 처리군이 17.7±0.94 μM로 LPS 처리구에서 유의적인 증가를 나타냈다.
CTP 처리구의 경우 마이토젠인 Con A 처리구 수준만큼 cytokine의 분비를 증가시키지는 않았지만 Th1 type의 cytokine인 IL-2 및 IFN-γ의 분비능이 CTP 처리 농도 의존적으로 유의적으로 증가하는 것으로 관찰되었으며, Th 2 type의 cytokine인 IL-4 및 IL-5의 분비능의 경우 유의적인 변화가 관찰되지 않았다. 이러한 결과로 미루어 보아 꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP의 처리는 알레르기 유병률과 밀접한 관련이 있는 Th2 type cytokine의 분비에는 크게 영향을 주지 않으며, 면역 활성에 관련이 있는 Th1 type의 cytokine의 분비량을 증가시켜 면역 활성을 유도하는 것으로 생각한다.

후속연구

선천면역계에서 중요한 역할을 수행하는 대식세포에 CTP를 처리하였을 때 세포 증식률, NO 및 cytokine 분비능이 CTP 처리 농도 의존적으로 증가하는 것으로 관찰되었을 뿐만 아니라 비장세포에서도 이와 유사하게 세포 증식률이 증가하고 Th 1 type의 cytokine 분비능 또한 유의적으로 증가하는 것으로 관찰되었다. 이상의 결과로 미루어보아 꾸지뽕 다당류 추출물인 CTP는 다양한 면역세포의 활성을 증가시키는 것으로 생각하며 이를 활용하여 다양한 식품 및 건강보조식품을 개발한다면 그 경제적 가치가 매우 클 것으로 생각한다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	꾸지뽕의 서식지는?	꾸지뽕(Cudrania tricuspidata)은 뽕나무과에 속하는 낙엽교목으로서 한국을 비롯한 일본, 중국, 러시아 동부지역 등에서 주로 서식하며, 일부 아시아지역에서는 전통약초로써 주로 사용되고 있다. 열매는 자수과라고 부르고 열매들이 모여 덩어리를 이루는 형태를 나타내며, 지름이 약 2~3 cm로 둥근 모양이다.
	선천성면역에 관여하는 세포는?	면역체계는 크게 선천성면역과 후천성면역으로 분류되는데 각각의 면역단계에 따라 역할을 수행하는 면역세포들이 다르다. 선천성면역에 관여하는 세포로는 대식세포와 수지상세포 등이 있으며, 이들은 감염 초기에 활성화되어 침입을 통제하거나 침입한 병원균에 대한 정보를 내부에 전달하는 역할을 수행한다. 후천성 면역은 주로 면역 T 세포가 매개하는 면역반응으로 감염 중기에 활성화되어 감염된 세포를 직접 죽이거나 병원성 물질에 대한 항체 생산을 촉진하여 무력화시키는 작용을 유도한다(16).
	꾸지뽕 열매의 특징은?	꾸지뽕(Cudrania tricuspidata)은 뽕나무과에 속하는 낙엽교목으로서 한국을 비롯한 일본, 중국, 러시아 동부지역 등에서 주로 서식하며, 일부 아시아지역에서는 전통약초로써 주로 사용되고 있다. 열매는 자수과라고 부르고 열매들이 모여 덩어리를 이루는 형태를 나타내며, 지름이 약 2~3 cm로 둥근 모양이다. 주로 9~10월에 붉은색을 나타내는 이열매는 해열, 양혈, 근육 이완 등에 매우 효과가 좋다고 알려져 동아시아에서 전통 한방 약재로 주로 사용되고 있다(1). 약리 활성이 가장 널리 알려진 꾸지뽕의 잎, 줄기 부분은 xanthones, flavonoids 등의 폴리페놀(polyphenol) 성분이 다량 함유되어 있다고 보고되고 있으며, tyrosinase 저해, 항산화, 암세포 독성, 항염증 활성에 대한 연구가 기 보고된 바 있다(2-7).

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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