[논문]산화적 스트레스로 유도된 간손상에 대한 소음인보중익기탕 열수추출물의 간세포보호효과

손진원; 정지윤; 김광연; 황보민; 박정아; 조일제; 백영두; 정태영; 김상찬; 지선영

doi:10.14374/hfs.2017.25.4.509

산화적 스트레스로 유도된 간손상에 대한 소음인보중익기탕 열수추출물의 간세포보호효과
The Protective Activity of Soeumin Bojungykgi-tang Water Extract Against Oxidative Stress-induced Hepato-Toxicity 원문보기

大韓韓醫學方劑學會誌 = Herbal formula science, v.25 no.4, 2017년, pp.509 - 526

손진원 (대구한의대학교 한의과대학) , 정지윤 (대구한의대학교 한의과대학) , 김광연 (한국한의학연구원) , 황보민 (대구한의대학교 한의과대학) , 박정아 (대구한의대학교 한의과대학) , 조일제 (대구한의대학교 한의과대학) , 백영두 (대구보건대학교) , 정태영 (대구한의대학교 한의과대학) , 김상찬 (대구한의대학교 한의과대학) , 지선영 (대구한의대학교 한의과대학)

Abstract ▼ AI-Helper

Background and objectives : Soeumin Bojungykgi-tang (seBYTE) has been used to supplement qi in Korean medicine. It has been demonstrated to possess various biological functions such as anti-cancer, anti-aging and anti-inflammatory effects. The present study evaluated the protective roles of seBYTE in hepatotoxic in vitro and in vivo model. Methods : To investigate cytoprotective effect of seBYTE, HepG2 cells were pretreated with seBYTE and then subsequently exposed to $10{\mu}m$ AA for 12 h, followed by $5{\mu}m$ iron. Cell viability was examined by MTT assay, and expression of apoptosis-related proteins was evaluated by immunoblot analysis. For responsible molecular mechanisms, ROS production, GSH contents, and mitochondrial membrane potential were measured. In addition, hepatoprotective effect of seBYTE in vivo was assessed in $CCl_4$-induced animal model. Results : seBYTE prevented AA + iron-induced cytotoxicity in concentration dependent manner. In addition, ROS production, GSH depletion, and mitochondrial dysfunction induced by AA + iron were significantly reduced by seBYTE pretreatment. Furthermore, seBYTE recovered expression of the pro-apoptotic proteins such as PARP and pro-caspase-3. In animal experiment, plasma ALT and AST levels were significantly elevated in $CCl_4$ treatment, but seBYTE significantly decreased the ALT and AST levels. Moreover, seBYTE alleviated the numbers of histological activity index, percentages of degenerative regions, degenerated hepatocytes, infiltrated inflammatory cells, nitrotyrosine- and 4-hydroxynonenal-positive cells in liver. Conclusions : These results showed that hepatoprotective effect of seBYTE against on $CCl_4$-induced hepatic damages is partly due to antioxidative and anti-apoptotic process.

AI 본문요약
AI-Helper

문제 정의

따라서 본 연구에서는 소음인보중익기탕이 항산화 작용을 가진다는 이전의 연구에 근거하여, 소음인보중익기탕의 항산화효과를 중심으로 in vitro 연구로서 HepG2 cell에 아라키도닉산 (AA; arachidonic acid)과 철 (iron)을 병용 처리하여 산화적 스트레스를 유발하고, 또한 in vivo 모델로서 CCl₄를 투여하여 산화적 스트레스를 유발한 동물모델에서 간세포보호효과를 평가하여 유의한 결과를 얻었기에 보고하는 바이다.

제안 방법

따라서 본 연구에서는 소음인보중익기탕 열수추출물 (seBYTE)이 산화적 스트레스에 의해 유도되는 간 손상에 대한 세포보호효과를 평가하였다. In vitro모델로서는 HepG2 세포주에 AA + iron을 처치하여 산화적 스트레스를 유발하여 seBYTE의 간세포보호효과를 평가하였고, in vivo 모델에서는 CCl₄에 의해 유발되는 급성 간손상에 대한 seBYTE의 세포보호효과를 관찰하였다.
따라서 본 연구에서는 소음인보중익기탕 열수추출물 (seBYTE)이 산화적 스트레스에 의해 유도되는 간 손상에 대한 세포보호효과를 평가하였다. In vitro모델로서는 HepG2 세포주에 AA + iron을 처치하여 산화적 스트레스를 유발하여 seBYTE의 간세포보호효과를 평가하였고, in vivo 모델에서는 CCl₄에 의해 유발되는 급성 간손상에 대한 seBYTE의 세포보호효과를 관찰하였다.

대상 데이터

In vitro assay에 사용된 HepG2 cell (human hepatocyte-derived cell line)은 American Type Culture Collection(Rockville, MD, USA)에서 구입하였으며, DMEM에 10% FBS와 50 ㎎/㎖ streptomycin, 50 U/㎖ penicillin을 혼합한 배지를 사용하여 5%의 CO₂ 및 37℃가 유지되는 incubator (Sanyo, Japan)에서 배양하였다. 실험에 사용된 모든 세포는 confluence가 80-90%가 유지되는 경우 실험에 사용하였고, 또한 20회 이하의 계대배양세포만 사용하였다.
In vivo study를 위한 실험동물은 6주령 male ICR mouse (25-30 g)를 Samtaco Bio Korea (오산, 한국)로부터 구입하여 1주일 동안 실험실환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용하였고, 사육실 환경은 습도 50%, 온도 20-23℃, 12시간 간격으로 light/dark cycle을 유지하고, 사료 (Nestle Purina Petcare Korea, Seoul, Korea)와 물은 자유롭게 섭취하도록 하였다
소음인보중익기탕의 구성 약재는 대원약업사 (Daegu, Korea)에서 구입하였으며, 소음인보중익기탕 10첩 분량 397.5 g을 4 L의 물로 3시간 탕전하고, 거즈로 1차 여과한 뒤, 0.2 ㎛ 필터 (Nalgene, New York, NY, USA)로 필터링하였다. 여과한 여액을 rotary evaporator(EYELA, Tokyo, Japan)로 감압 농축한 후, ultra-low temperature freezer (Nihon freezer, Japan)에서 동결하고, 동결된 추출물을 동결건조기 (Labconco, USA)로 동결건조하여 28.

데이터처리

실험 결과는 mean ± SD로 나타내었고, 처치군 사이의 통계적 유의성은 one way ANOVA로 검정하였다 (p<0.05 또는 p<0.01). 사후검정은 등분산 가정이 성립 하였을 때에는 Least-significant difference multi-comparison (LSD) test (in vivo study)와Tukey HSD test (in vitro study)를 이용하였고, 등분산 가정이 성립하지 않았을 때에는 Mann-Whitney U (MW) (in vivo study) test와 Tamhane test (in vitro study)를 실시하였다.

이론/모형

seBYTE의 ROS 소거능을 평가하기 위하여 이전의 방법¹⁴⁾에 따라 DCFH-DA assay를 실시하였다. 2′7′-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)는 cell-permeable non-fluorescent probe로서 H₂O₂와 intracellular esterases에 의하여 2′7′-dichlorofluorescein (DCF)로 바뀌며, 이의 형광강도를 측정하여 H₂O₂의 양을 상대적으로 평가한다.
seBYTE의 세포독성을 평가하기 위하여 MTT assay로 세포생존율을 평가하였다. seBYTE를 10, 30, 100, 300 ㎍/㎖의 농도로 24시간 처리한 결과 control군의 세포생존율 100.

성능/효과

41 (%)로 유의하게 감소되었다. 이러한 결과는 seBYTE가 산화적 스트레스로 유도되는 세포자멸사를 억제함에는 seBYTE의 미토콘드리아 보호효과가 개재되고 있음을 나타낸다.
본 연구에서 seBYTE 300 ㎍/㎖는 AA + iron에 의해 유도되는 GSH의 고갈을 유의하게 억제시켰다. 이러한 연구결과는 seBYTE가 산화적 스트레스를 억제하고, 이로 말미암아 간세포보호효과를 나타냄을 의미한다.
이상의 결과들로부터 seBYTE는 CCl₄로 유도된 급성 간독성에 대해 유의한 세포보호효과를 지닌 것으로 사료되며, 이러한 seBYTE의 간세포보호효과는 일부분 항산화효과를 통하여 세포보호효과를 나타내는 것으로 평가된다

후속연구

그러나, seBYTE의 구성약물인 人蔘, 黃芪, 甘草, 當歸 등 대부분의 구성약물은 모두 항산화효능이 있는 것으로 보고되어^,50-53), seBYTE의 항산화효능이 약물간 상승작용으로 나타난 것인지, 아니면 구성약물중의 특정 약재 또는 특정 약재들간의 상승 효능으로 도출되었는지는 향후 추가적인 연구가 필요할 것으로 판단된다
이러한 결과는 소음인보중익기탕이 in vivo와 in vitro 모델에서 산화적 손상에 대해 세포 보호 효능이 있음을 나타낸 것으로, 향후 소음인보중익기탕의 구성 약물, 약물배합에 대한 항산화효능 및 임상적 연구가 추가적으로 필요할 것으로 생각된다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	활성산소종은 언제 생기는가?	일반적으로 산소를 사용하는 생체의 에너지 생산과정에서는 superoxide radical, hydrogen peroxide,hydroxyl radical, singlet oxygen 등의 활성산소종(reactive oxygen species; ROS)이 생성되며, 이러한 ROS는 체내 superoxide dismutase, catalase, glutathione 등에 의하여 적절하게 제거되어 체내 항상성을 유지한다1). 그러나 과다한 ROS의 생성 또는 체내 항산화능 저하로 인하여 이러한 항상성이 파괴되면 산화적 스트레스 (oxidative stress)가 유발되고2), 산화적 스트레스는 DNA, proteins, lipids에 광범위한 손상을 유도하여, 종양, 치매 등을 비롯한 다양한 질환을 유도하게 된다3)
	간의 역할은?	간은 albumin 및 담즙을 생산하며, 소장에서 흡수된 영양소의 처리와 저장에 주된 역할을 하고, 특정 신체 내 배설물과 이물질을 파괴 및 제거한다. 또한 간은 물질대사가 활발한 장기로 대사의 결과물인 대사체들로 인한 산화적 스트레스에 많은 영향을 받는다4).

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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