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문제 정의
- 또한, 다양한 균주들을 대상으로 와송 분획 추출물의 항균력을 측정하여 식품첨가물이나 생활용품 개발 등에 활용함으로써 식품산업 및 향장산업에서의 이용가치를 검토하고자 하였다. 그리고 와송 분획 추출물별 폐암, 대장암, 유방암 세포주의 세포독성을 조사함으로써 암 예방 및 치료를 할 수 있는 건강 기능성 식품으로의 활용 가능성을 규명하고자 하였다.
- 즉, 분획별 총 폴리페놀과 플라보노이드의 함량을 측정하였고, 천연 항산화제로서의 이용 가능성을 알아보기 위하여 항산화능 및 항산화 효소 활성을 측정하였다. 또한, 다양한 균주들을 대상으로 와송 분획 추출물의 항균력을 측정하여 식품첨가물이나 생활용품 개발 등에 활용함으로써 식품산업 및 향장산업에서의 이용가치를 검토하고자 하였다. 그리고 와송 분획 추출물별 폐암, 대장암, 유방암 세포주의 세포독성을 조사함으로써 암 예방 및 치료를 할 수 있는 건강 기능성 식품으로의 활용 가능성을 규명하고자 하였다.
제안 방법
- 5) 500 ㎕, 5 mM ascorbate 100 ㎕, 2mM H2O2 10 ㎕를 혼합하였다. Ascorbate의 산화정도를 spectrophotometer를 이용하여 290 ㎚에서 1분간 흡광도를 측정하였다. 단백질 1 ㎎당 산화된 ascorbate를 μmol로 표기하였다.
- Catalase(CAT)활성은 Mishra et al. (1993)의 방법을 변형하여 측정하였다. 효소액 100 ㎕와 100 mM potassium phosphate buffer (pH 7.
- 동결건조된 와송 부피의 2배량(v/v)의 98% methanol에 48시간 이상 침지하여 총 3회 반복 추출하였고, 이 추출액을 40∼45℃에서 감압 농축(BUCHI, Switzerland)하였다. Methanol추출물을 분별 깔대기에 담아 Fig. 1에서와 같이 각 용매별로 분획, 추출하였다. 즉, 분별 깔대기에 증류수 500 ㎖를 넣고, 극성이 낮은 n-hexane 500 ㎖를 첨가하여 24시간 이상 교반하여 분획, 추출하였고, 다음으로 methylenechloride 500 ㎖, ethylacetate 500 ㎖, n-butyl alcohol 500 ㎖로 순차적으로 반복 추출하여 용매별 분획물을 획득하였다.
- 그리고 각 well에 100 ㎕의 DMSO를 첨가하여 15분간 shaking 시켰다. Micro plate spectrophotometer (BIO RAD, xMark, USA)를 사용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 각 세포의 추출물 무첨가군을 100%로 하여 암세포 증식 억제율을 구하였다.
- 이 혼합액을 water bath (BUCHI, Switzerland)에서 37℃로 60분간 반응시켰다. Spectrophotometer (Mecasys, Korea)를 이용하여 750 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 폴리페놀 표준물질로 chlorogenic acid(Sigma, USA)를 이용하여 검량선을 작성하였으며, 이를 기준으로 와송의 분획별 추출물의 총 폴리페놀 함량을 정량하였다.
- 시료 100 ㎕와 100 ㎛의 DPPH 용액 900 ㎕를 혼합한 후, 암소에서 30분간 반응시켜주었다. Spectrophotometer를 이용하여 517 ㎚에서 흡광도를 측정하여 radical의 감소를 정량하였다. 대조구에 대한 흡광도의 감소 정도 백분율로 나타냈다.
- 희석된 ABTS∙+용액 950 ㎕에 시료를 50 ㎕를 잘 혼합한 후, 암소에서 5분간 반응시켰다. Spectrophotometer를 이용하여 734 ㎚에서 흡광도를 측정하여 radical 감소를 정량하였다. 대조구에 대한 흡광도의 감소 정도 백분율로 나타냈다.
- 9) 500 ㎕, 15 mM guaiacol 100 ㎕, 65 mM H2O2100 ㎕를 혼합하였다. Tetra guaiacol 형성을 spectrophotometer를 이용하여 470 ㎚에서 흡광도 변화를 측정하였다. 단백질 1 ㎎당 형성된 tetra guaiacol을 μmol로 표기하였다.
- Top agar 표면에 멸균된 8 ㎜ paper disc (Adventic, Japan)를 일정한 간격으로 올려놓고, 중앙의 paper disc에는 kanamycin (1 ㎎/㎖) 30 ㎕, 주변의 paper disc에는 각 분획추출물들을 30 ㎕씩 주입하였다.
- 사용한 균주는 Listeria monocytogenes, Staphylococcusepidermidis, Staphylococcus aureus, Malassezia furfur, Escherichia coli와 Pseudomonas aeruginosa 등 총 6가지를 선발하였으며, 위 균주들은 한국생명공학원구원 생물자원센터(KCTC)와 한국미생물보존센터(KCCM)로부터 구입하여 실험에 사용하였다. 각 균주에 적합한 한천 배지(Table 1)를 petri dish에 분주, 응고시킨 다음 0.8% agar와 균주 100 ㎕를 혼합하여 준비한 top agar를 도말하였다. Top agar 표면에 멸균된 8 ㎜ paper disc (Adventic, Japan)를 일정한 간격으로 올려놓고, 중앙의 paper disc에는 kanamycin (1 ㎎/㎖) 30 ㎕, 주변의 paper disc에는 각 분획추출물들을 30 ㎕씩 주입하였다.
- Micro plate spectrophotometer (BIO RAD, xMark, USA)를 사용하여 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 각 세포의 추출물 무첨가군을 100%로 하여 암세포 증식 억제율을 구하였다.
- 그러나 현재까지의 연구에서는 대부분 단일용매 추출물에 관한 연구에 국한되어 있다. 따라서 본 논문에서는 와송을 n-hexane, methylenechloride, ethylacetate, n-butylalcohol,water를 이용하여 5가지 용매로 분획 추출하였고, 각 분획 추출물에 대해 여러 생리활성을 비교하였다. 즉, 분획별 총 폴리페놀과 플라보노이드의 함량을 측정하였고, 천연 항산화제로서의 이용 가능성을 알아보기 위하여 항산화능 및 항산화 효소 활성을 측정하였다.
- Folin-Denis 방법(1912)에 따라 와송 분획 추출물에 대한 총 폴리페놀의 함량을 측정하였다. 분획 추출물은 98% methanol에 1 ㎎/㎖로 용해하여 25 ㎕, 10배 희석한 folin-ciocalteu reagent 500 ㎕를 혼합하여 상온에서 5분간 반응시킨 후, 7.5% sodium carbonate (Na2CO3) 500 ㎕를 첨가하여 혼합하였다. 이 혼합액을 water bath (BUCHI, Switzerland)에서 37℃로 60분간 반응시켰다.
- 0) 500 ㎕, 110 mM H2O2 400 ㎕를 혼합하였다. 소거된 H2O2를 spectrophotometer를 이용하여 240 ㎚에서 1분간 흡광도를 측정하였다. 단백질 1 ㎎당 소거된 H2O2를 μmol로 표기하였다.
- 1에서와 같이 각 용매별로 분획, 추출하였다. 즉, 분별 깔대기에 증류수 500 ㎖를 넣고, 극성이 낮은 n-hexane 500 ㎖를 첨가하여 24시간 이상 교반하여 분획, 추출하였고, 다음으로 methylenechloride 500 ㎖, ethylacetate 500 ㎖, n-butyl alcohol 500 ㎖로 순차적으로 반복 추출하여 용매별 분획물을 획득하였다. 이 분획물을 감압 농축하여 완전히 건조시킨 후,냉동 보관하면서 각 생리활성 실험에 사용하였다.
- 따라서 본 논문에서는 와송을 n-hexane, methylenechloride, ethylacetate, n-butylalcohol,water를 이용하여 5가지 용매로 분획 추출하였고, 각 분획 추출물에 대해 여러 생리활성을 비교하였다. 즉, 분획별 총 폴리페놀과 플라보노이드의 함량을 측정하였고, 천연 항산화제로서의 이용 가능성을 알아보기 위하여 항산화능 및 항산화 효소 활성을 측정하였다. 또한, 다양한 균주들을 대상으로 와송 분획 추출물의 항균력을 측정하여 식품첨가물이나 생활용품 개발 등에 활용함으로써 식품산업 및 향장산업에서의 이용가치를 검토하고자 하였다.
- Spectrophotometer (Mecasys, Korea)를 이용하여 750 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 폴리페놀 표준물질로 chlorogenic acid(Sigma, USA)를 이용하여 검량선을 작성하였으며, 이를 기준으로 와송의 분획별 추출물의 총 폴리페놀 함량을 정량하였다.
- Spectrophotometer를 이용하여 425 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 플라보노이드 표준물질로 naringin (Sigma, USA)을 이용하여 검량선을 작성하였으며, 이를 기준으로 와송의 분획별 추출물의 총 플라보노이드 함량을 정량하였다.
대상 데이터
- 노지에서 재배된 와송(Orostachys japonicus)을 2014년 7월 채취하여 실험에 이용하였다. 와송을 -70℃ 이하 초저온 냉동고(NIHON, Japan)에 5시간 이상 동결시킨 후, 동결된 재료를 0.
- Blois 방법(1958)에 따라 와송의 분획 추출물의 DPPH radical 소거 활성을 측정하였다. 분획 추출물을 98% 메탄올을 용매로 하여 희석시켜 실험에 이용하였다. 시료 100 ㎕와 100 ㎛의 DPPH 용액 900 ㎕를 혼합한 후, 암소에서 30분간 반응시켜주었다.
- 와송의 분획 추출물의 항균활성 효과를 측정하기위하여 한천배지확산법(disc agar plate diffusion method)을 이용하였다. 사용한 균주는 Listeria monocytogenes, Staphylococcusepidermidis, Staphylococcus aureus, Malassezia furfur, Escherichia coli와 Pseudomonas aeruginosa 등 총 6가지를 선발하였으며, 위 균주들은 한국생명공학원구원 생물자원센터(KCTC)와 한국미생물보존센터(KCCM)로부터 구입하여 실험에 사용하였다. 각 균주에 적합한 한천 배지(Table 1)를 petri dish에 분주, 응고시킨 다음 0.
- (1989)의 방법에 따라 MTT assay법에 의해 와송 추출물의 암세포 증식 억제 효과를 분석하였다. 실험에 사용된 암세포주는 한국 세포주 은행에서 분양받은 인간 유래 폐암세포주 Calu-6 (KCLB No.10002), 유방암 세포주 MCF-7 (KCLB No.30022), 대장암 세포주 HCT-116 (KCLB No.10247)를 실험에 이용하였다. 각 세포주를 3×104 cell/㎖ 밀도가 되도록 조정하여 96 well microplate에 98 ㎕/well 씩 분주한 후, 37℃, 5% CO2 습윤 세포 배양기에서 24시간 incubation하여 세포를 부착시켰다.
- 의 방법(1999)에 따라 와송의 분획 추출물의 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)diammoniumsalt) radical 소거활성을 측정하였다. 와송 분획 추출물을 메탄올을 용매로 하여 희석시켜 실험에 이용하였다. ABTS∙+용액은 증류수에 2.
- 와송을 -70℃ 이하 초저온 냉동고(NIHON, Japan)에 5시간 이상 동결시킨 후, 동결된 재료를 0.05 ∼ 0.5 Torr (mmHg)로 -50℃ 이하에서 완전하게 진공 동결건조(Ilshin, Korea)하여 시료로 이용하였다.
데이터처리
- ANOVA procedure을 실시하여 다중범위검정(Duncan's multiple range test)을 이용하여 0.05% 수준에서 유의성을 검정하였다.
- Means separation was conducted with by Duncan's multiple range test (P=0.05).
- Means separation was conducted with by Duncan's multiple range test.
- 와송의 용매별 분획추출물의 생리활성에 대한 각 실험은 3회 실시하였으며, 결과 값은 평균±표준오차로 표기하였다.
- 와송의 용매별 분획추출물의 생리활성에 대한 각 실험은 SAS software (SAS Institute, USA)을 이용하였다. ANOVA procedure을 실시하여 다중범위검정(Duncan's multiple range test)을 이용하여 0.
이론/모형
- Ascorbate peroxidase (APX) 활성은 Chen과 Asada (1989) 방법에 따라 측정하였다. 효소액 100 ㎕와 200 mM potassium phosphate buffer (pH 7.
- Blois 방법(1958)에 따라 와송의 분획 추출물의 DPPH radical 소거 활성을 측정하였다. 분획 추출물을 98% 메탄올을 용매로 하여 희석시켜 실험에 이용하였다.
- Folin-Denis 방법(1912)에 따라 와송 분획 추출물에 대한 총 폴리페놀의 함량을 측정하였다. 분획 추출물은 98% methanol에 1 ㎎/㎖로 용해하여 25 ㎕, 10배 희석한 folin-ciocalteu reagent 500 ㎕를 혼합하여 상온에서 5분간 반응시킨 후, 7.
- Hansen et al. (1989)의 방법에 따라 MTT assay법에 의해 와송 추출물의 암세포 증식 억제 효과를 분석하였다. 실험에 사용된 암세포주는 한국 세포주 은행에서 분양받은 인간 유래 폐암세포주 Calu-6 (KCLB No.
- Jia와 Tang의 방법(1998)에 따라 와송 분획 추출물에 대한 총 플라보노이드 함량을 측정하였다. 분획 추출물을 98% 메탄올에 1 ㎎/㎖농도로 용해하여 100 ㎕, diethylene glycol 1000 ㎕, 1N NaOH 10 ㎕를 넣어 잘 혼합한 후, water bath에서 37℃로 60분간 반응시켰다.
- Peroxidase (POX) 활성은 Chance와 Maehly (1995)의 방법에 따라 측정하였다. 효소액 100 ㎕와 80 mM potassium phosphate buffer (pH6.
- 항산화 효소 활성 측정은 용매 1000 ㎕에 와송 분획추출물 5 ㎎을 첨가하여 overnight시킨 후, 15,000 rpm으로 10분간 원심분리한 후 상층액을 이용하였다. 각 분획 추출물 효소액의 단백질은 Bradford 방법(1976)에 따라 BSA를 표준물질로 사용하여 정량하였다.
- 와송 분획 추출물의 아질산염 소거활성 능력 측정은 Kato et al. (1987)의 방법에 따라 0.1 N HCl 또는 0.2 M citrate buffer를 이용하여 반응액의 pH를 각 1.2, 4.0, 6.0으로 맞추어 반응의 차이를 측정하였다. 분획 추출물(20 ㎎/㎖) 40 ㎕에 1 mM NaNO2 20 ㎕와 pH buffer 140 ㎕를 사용하였다.
- 와송의 분획 추출물의 항균활성 효과를 측정하기위하여 한천배지확산법(disc agar plate diffusion method)을 이용하였다. 사용한 균주는 Listeria monocytogenes, Staphylococcusepidermidis, Staphylococcus aureus, Malassezia furfur, Escherichia coli와 Pseudomonas aeruginosa 등 총 6가지를 선발하였으며, 위 균주들은 한국생명공학원구원 생물자원센터(KCTC)와 한국미생물보존센터(KCCM)로부터 구입하여 실험에 사용하였다.
- 의 방법(1999)에 따라 와송의 분획 추출물의 ABTS(2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid)diammoniumsalt) radical 소거활성을 측정하였다.
성능/효과
- 99%의 아질산염 소거활성을 보였으며, n-hexane과 methylenechloride 분획에서는 활성이 나타나지 않았다. Ethylacetate 추출물은 pH 농도가 증가해도 분획추출물 중 비교적 높은 아질산염 소거능을 나타냈다. 이는 왕고들빼기의 메탄올 추출물의 아질산 소거능을 연구한 Park(2014)의 결과와도 유사한 결과이다.
- 44%의 아질산염 소거활성을 보였다. pH 1.2에서와 마찬가지로 ethylacetate 분획추출물이 가장 높은 소거능을 확인하였다. 그리고 pH 6.
- 와송의 분획 추출물의 DPPH radical 소거활성은 Table 3에 나타냈다. 각 분획추출물의 radical 소거활성능은 10 ㎎/㎖에서 ethylacetate 98.17%, n-butylalcohol 94.84%, n-hexane 89.99%, methylenechloride 88.64%, water 40.34% 순으로 나타났다. 특히 ethylacetate는 대조구로 이용한 ascorbic acid의 97.
- 와송의 ABTS radical 소거활성은 Table 4에 나타냈다. 각 분획추출물의 radical 소거활성은 10 ㎎/㎖에서 ethylacetate 98.56%, methylenechloride 98.21%, n-butylalcohol 91.98%, n-hexane 85.73%, water 59.88% 순으로 나타났다. 특히 ethylacetate는 1 ㎎/㎖에에서도 95.
- 5와 Table 6에 나타냈다. 공시한 6종의 균주(Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Malassezia furfur, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) 모두에서 항균활성이 있는 것으로 나타났으며, 특히 ethylacetate 분획추출물에서 향균활성이 가장 높았고, n-butylalcohol, water 분획에서도 다소 높은 활성을 확인할 수 있었다. 그러나 n-hexane 및 methylenechloride 분획추출물에서는 저해환이 거의 형성되지 않아 항균활성이 미미한 것으로 나타났다.
- 공시한 6종의 균주(Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Malassezia furfur, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa) 모두에서 항균활성이 있는 것으로 나타났으며, 특히 ethylacetate 분획추출물에서 향균활성이 가장 높았고, n-butylalcohol, water 분획에서도 다소 높은 활성을 확인할 수 있었다. 그러나 n-hexane 및 methylenechloride 분획추출물에서는 저해환이 거의 형성되지 않아 항균활성이 미미한 것으로 나타났다.
- 유방암 세포주(MCF-7)의 경우 n-butylalcohol 분획추출물에서 높은 암세포증식 억제 활성을 나타냈다. 그러나 대장암 세포주(HCT-116)의 경우는 5가지 분획추출물 1000 ㎍/㎖ 농도에서 60% 이상의 생존율을 보여 폐암, 유방암 세포주보다 세포증식 억제활성이 낮은 것으로 나타났다. 와송의 경우 분획별 추출물에 따라 암세포 증식 억제율에 차이가 있었으며, 암 세포주의 종류에 따라서도 추출물의 증식억제 효능에 편차가 있음을 확인하였다.
- 2에서와 마찬가지로 ethylacetate 분획추출물이 가장 높은 소거능을 확인하였다. 그리고 pH 6.0에서는 ethylacetate 47.15%, n-butylalcohol 29.09%, water 7.99%의 아질산염 소거활성을 보였으며, n-hexane과 methylenechloride 분획에서는 활성이 나타나지 않았다. Ethylacetate 추출물은 pH 농도가 증가해도 분획추출물 중 비교적 높은 아질산염 소거능을 나타냈다.
- 7%의 세포 생존율을 보고하였는데, 50㎍/㎖ 및 100 ㎍/㎖ 농도에서는 와송 추출물이 낮은 세포생존율을 보이지만 500 ㎍/㎖ 농도에서는 황칠나무 추출물에 비교하여 세포생존율이 더높게 나타나 와송 추출물은 높은 농도보다 낮은 농도에서 황칠나무 추출물에 비해 높은 세포증식억제 효과를 나타냈다. 그리고 대장암 세포주(HCT-116)에서의 생존율은 n-hexane 61.79%, methylenechloride 61.84%, ethylacetate 63.58%, n-butylalcohol 65.97%, water 82.17%로 나타났다. Hong et al.
- 와송 분획별 추출물은 특히 폐암 세포주(Calu-6)에서 세포증식 억제 활성이 큰 것으로 나타났다. 또한 n-hexane 분획추출물의 경우 1000 ㎍/㎖의 농도에서 33%의 생존율을 보여 높은 암세포증식억제활성을 보였다. 유방암 세포주(MCF-7)의 경우 n-butylalcohol 분획추출물에서 높은 암세포증식 억제 활성을 나타냈다.
- 항균활성은 Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Malassezia furfur 균주에서 항생제 kanamycin보다 큰 저해환을 형성하여 높은 항균력이 확인되었다. 또한 와송의 용매분획별 추출물의 인체암 세포주에 대한 세포증식억제 효과는 특히 ethylacetate 분획추출물에서 폐암, 유방암에 대해 높은 효과를 나타냈다. 이와 같은 결과들을 종합하면 와송의 ethylacetate 분획추출물을 이용한 천연 항산화제와, 천연 항균제로서의 개발 가치가 높은 것으로 기대되어 경제성 있는 천연소재가 될 것으로 사료된다.
- 2%, 2년생 인삼이 59%, 나머지 3년, 4년, 6년생 인삼이 85%이상의 폐암 세포주 생존율을 보고하였는데, 이는 와송 분획별 추출물이 인삼보다 높은 세포증식 억제활성을 나타냄을 알 수 있었다. 또한 유방암 세포주(MCF-7)의 경우를 보면, n-hexane 50.63%, methylenechloride 60.80%, ethylacetate 60.15%, n-butylalcohol 44.77%, water 80.06%의 생존율을 보였으며, water추출물을 제외한 대부분 추출물에서 세포증식 억제효과를 나타냈다. Im et al.
- 40 ㎍/㎎ 순으로 나타났다. 또한 총 flavonoid 함량은 polyphenol과 동일하게 ethylacetate 분획에서 205.20 ㎍/㎎ 로 가장 높았으며, 다음으로 n-hexane 98.54㎍/㎎, n-butylalcohol 97.85 ㎍/㎎, methylenechloride 74.63㎍/㎎, water 5.67 ㎍/㎎ 순으로 나타났다. Kim et al.
- 20 ㎍/㎎ 로 나타났다. 또한 항산화 활성을 보면, ethylacetate 분획추출물의 1 ㎎/㎖ 농도에서 DPPH radical, ABTS radical 소거능은 95% 이상으로, ascorbic acid의 97%의 소거능과 거의 유사한 결과를 보여 높은 항산화능을 확인할 수 있었다. 항산화효소 활성의 경우, APX 및 CAT 효소 활성은 1125.
- 5 ㎍/㎎로 비수리 및 애엽 등의 3배 이상으로 매우 높은 함량을 확인할 수 있었으며, 플라보노이드 함량 또한 ethylacetate 분획추출물의 경우 비수리의 2배, 애엽, 참나무 겨우살이, 질경이의 5배 이상 높게 나타난 것을 확인하였다. 아로니아의 폴리페놀 함량과 플라보노이드 함량과 비교할 때, 와송 ethylacetate 분획추출물의 폴리페놀 함량은 0.16배 낮지만, 플라보노이드 함량은 와송 ethylacetate 분획추출물이 3.3배 높게 나타났다. 이와 같은 결과로 볼때, 와송의 폴리페놀과 플라보노이드 함량은 상대적으로 높다는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 현재 피로회복과 심혈관 질환 예방으로 출시된 폴리페놀 건강기능성 식품, 노화방지 화장품 등에 와송의 천연폴리페놀을 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
- 와송의 분획추출물 10 ㎎/㎖을 아질산나트륨 용액에 첨가하여 아질산염에 대한 소거능을 조사한 결과를 Table 5에 나타냈다. 아질산 소거능은 pH에 매우 농도의존적으로 나타났으며, 즉 pH 1.2에서 n-hexane 25.13%, methylenechloride 36.67%, ethylacetate 81.68%, n-butylalcohol 74.00%, water 47.14%의 소거활성을 보였으며, ethylacetate 분획에서 가장 높은 아질산 소거활성을 나타냈다. 그리고 pH4.
- 와송 ethylacetate 분획추출물의 폴리페놀 함량은 634.48 ㎍/㎎, 플라보노이드 함량은 205.20 ㎍/㎎ 로 나타났다. 또한 항산화 활성을 보면, ethylacetate 분획추출물의 1 ㎎/㎖ 농도에서 DPPH radical, ABTS radical 소거능은 95% 이상으로, ascorbic acid의 97%의 소거능과 거의 유사한 결과를 보여 높은 항산화능을 확인할 수 있었다.
- (2014)의 길경추출물에 의한 대장암 세포주에 관한 연구에서는 1000 ㎍/㎖의 농도일 때 약 80%의 세포 생존율을 보고하였는데, 와송의 분획별 추출물의 경우도 길경의 결과와 비교하여 대장암 세포주에서 비슷한 암세포증식 억제활성을 갖는 것으로 사료된다. 와송 분획별 추출물은 특히 폐암 세포주(Calu-6)에서 세포증식 억제 활성이 큰 것으로 나타났다. 또한 n-hexane 분획추출물의 경우 1000 ㎍/㎖의 농도에서 33%의 생존율을 보여 높은 암세포증식억제활성을 보였다.
- 와송 분획추출물의 polyphenol 함량은 ethylacetate가 634.48 μg/mg로 가장 높았으며, 다음으로 n-butylalcohol 351.14 ㎍/㎎, n-hexane 148.37 ㎍/㎎, methylenechloride 124.38 ㎍/㎎, water 8.40 ㎍/㎎ 순으로 나타났다.
- 6~8에 나타냈으며, 세포 사멸율 50%의 추출물 농도를 나타내는 IC50값은 Table 7에 나타냈다. 와송 추출물농도 1000 ㎍/㎖에서 폐암 세포주(Calu-6)의 생존율은 n-hexane 33.11%, methylenechloride 40.74%, ethylacetate 40.43%, n-butylalcohol 70.33%,water 87.33%로 나타났다. Chon et al.
- 와송의 ethylacetate 분획추출물은 1 ㎎/㎖의 농도에서 90% 이상의 소거능이 측정되어 천연 항산화제로서 충분한 기능을 할 것으로 사료된다.
- 그러나 대장암 세포주(HCT-116)의 경우는 5가지 분획추출물 1000 ㎍/㎖ 농도에서 60% 이상의 생존율을 보여 폐암, 유방암 세포주보다 세포증식 억제활성이 낮은 것으로 나타났다. 와송의 경우 분획별 추출물에 따라 암세포 증식 억제율에 차이가 있었으며, 암 세포주의 종류에 따라서도 추출물의 증식억제 효능에 편차가 있음을 확인하였다. 이와 같은 결과를 종합하여 볼때, 향후 와송을 이용하여 폐암이나 유방암 예방 및 치료 소재로서의 개발 가치가 있을 것으로 사료된다.
- 0에서 50% 이상의 아질산염 소거활성을 나타냈다. 이와 같은 결과들로 비교하여 볼 때, 와송의 ethylacetate 분획추출물의 경우 pH 1.2, 4.0에서 81.68%, 66.19%로 높게 나타났으며, pH 6.0에서도 47.15%로 소목, 마디풀 보다 30% 더 높은 아질산염 소거활성을 확인할 수 있었는데, 이는 현재 육가공 식품에 품질 유지와 풍미를 위해 전반적으로 많이 쓰이고 있어 발암물질 논란이 되고 있는 아질산염의 소거제로서 이용 가능성을 기대할 수 있다고 본다.
- 이와 같은 결과와 비교하여 볼 때, 와송의 ethylacetate 분획추출물의 polyphenol의 함량은 634.5 ㎍/㎎로 비수리 및 애엽 등의 3배 이상으로 매우 높은 함량을 확인할 수 있었으며, 플라보노이드 함량 또한 ethylacetate 분획추출물의 경우 비수리의 2배, 애엽, 참나무 겨우살이, 질경이의 5배 이상 높게 나타난 것을 확인하였다.
- 88% 순으로 나타났다. 특히 ethylacetate는 1 ㎎/㎖에에서도 95.59%의 소거능을 보이며 대조구로 이용한 ascorbic acid와 비슷하게 효과를 보이는 것으로 나타났다. Ju et al.
- 34% 순으로 나타났다. 특히 ethylacetate는 대조구로 이용한 ascorbic acid의 97.90%보다 높은 값을 보이며 매우 우수한 효과를 보이는 것으로 나타났다. 또한 DPPH radical의 50%의 소거능을 나타내는 IC50 값은 ethylacetate 0.
- 87 mmol H2O2 decomposed/min/㎎ protein 으로 높은 것으로 나타났다. 항균활성은 Listeria monocytogenes, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Malassezia furfur 균주에서 항생제 kanamycin보다 큰 저해환을 형성하여 높은 항균력이 확인되었다. 또한 와송의 용매분획별 추출물의 인체암 세포주에 대한 세포증식억제 효과는 특히 ethylacetate 분획추출물에서 폐암, 유방암에 대해 높은 효과를 나타냈다.
후속연구
- 또한 와송의 용매분획별 추출물의 인체암 세포주에 대한 세포증식억제 효과는 특히 ethylacetate 분획추출물에서 폐암, 유방암에 대해 높은 효과를 나타냈다. 이와 같은 결과들을 종합하면 와송의 ethylacetate 분획추출물을 이용한 천연 항산화제와, 천연 항균제로서의 개발 가치가 높은 것으로 기대되어 경제성 있는 천연소재가 될 것으로 사료된다.
- 3배 높게 나타났다. 이와 같은 결과로 볼때, 와송의 폴리페놀과 플라보노이드 함량은 상대적으로 높다는 것을 확인할 수 있었으며, 이는 현재 피로회복과 심혈관 질환 예방으로 출시된 폴리페놀 건강기능성 식품, 노화방지 화장품 등에 와송의 천연폴리페놀을 활용할 수 있을 것으로 사료된다.
- 와송의 경우 분획별 추출물에 따라 암세포 증식 억제율에 차이가 있었으며, 암 세포주의 종류에 따라서도 추출물의 증식억제 효능에 편차가 있음을 확인하였다. 이와 같은 결과를 종합하여 볼때, 향후 와송을 이용하여 폐암이나 유방암 예방 및 치료 소재로서의 개발 가치가 있을 것으로 사료된다.6
- Sung (2004)의 은행잎 추출물, Kwon (2003)의 동백나무잎 추출물의 항균성 연구결과를 와송추출물의 결과와 비교하였을 때, 대부분 균주에서 와송추출물이 다른 식물추출물에 비해 높은 항균활성을 나타냄을 알 수 있었다. 특히 ethylacetate 분획추출물의 경우 공시한 대부분의 균주에서 큰 저해환을 형성하여 높은 항균활성을 갖는 것으로 나타나 천연항균제, 천연보존료 개발에 유익한 원료로서 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
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