[논문]급성 위염 동물 모델에서 감국(甘菊) 추출물과 아마인유(亞麻仁油) 혼합물의 위 점막 보호 효과

이진아; 김수현; 김민주; 안정현; 박해진; 이우락; 노성수

doi:10.6116/kjh.2018.33.6.19.

급성 위염 동물 모델에서 감국(甘菊) 추출물과 아마인유(亞麻仁油) 혼합물의 위 점막 보호 효과
Protective Effects of Chrysanthemi Indici Flos Extract and Flaxseed Oil Mixture on HCl/ethanol-induced Acute Gastric Lesion Mice 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.33 no.6, 2018년, pp.19 - 28

이진아 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 김수현 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 김민주 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 안정현 ((주)농부플러스) , 박해진 (대구한의대학교 한방식품영양조리학부) , 이우락 ((주)농부플러스) , 노성수 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The objective of this study was to investigate the protective effect of Flaxseed oil and Chrysanthemi Indici Flos 50% ethanol extract in an HCl/ethanol induced acute gastritis model. Methods : ICR mice were divided into 6 groups; normal mice (Nor), gastritic mice with distilled water (Veh), gastritic mice with 10 mg/kg sucralfate (SC), gastritic mice with 16 g/㎏ Flaxseed oil (FO), gastritic mice with FO + 50 mg/kg Chrysanthemi Indici Flos (FCL), and gastritic mice with FO + 100 mg/kg Chrysanthemi Indici Flos (FCH). Then, mice were orally administered with 150 mM HCl/60% ethanol and caused acute gastritis. After 1 hr, mice were sacrificed, and blood and stomach tissue were collected. Results : Administration of FCL and FCH to mice prior to the induction of gastritis was found to reduce gastric injury. reactive oxygen species (ROS) and peroxy nitrite ($ONOO^-$) levels of stomach tissues were significantly decreased in FO, FCL, and FCH compared to Veh group. As results of stomach protein analyses, FCL and FCH effectively reduce inflammatory-related factors such as inducible nitric oxide synthase (iNOS), interleukin-6 (IL-6), and interleukin 1 beta ($IL-1{\beta}$) in gastric lesion mice. In addition, nuclear factor kappa B p65 ($NF-{\kappa}B$ p65) and phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa $B{\alpha}(p-I{\kappa}B{\alpha})$ were down-regulated in FCL and FCH administrated gastric lesion mice. Conclusions : These results suggest that FCL and FCH has an inhibitory effect against gastric injury. Therefore, FCL and FCH has the potential to be used as a natural therapeutic drug.

주제어

표/그림 (7)

그림 Fig. 1. Scavenging activity of CIL on DPPH and ABTS free radical.
표 Table 1. Total Polyphenol and Total Flavonoid Contents of Chrysanthemi Indici Flos
그림 Fig. 2. Optical change stomach tissues of HCl/ethanol-induced acute gastritic mice.
그림 Fig. 3. Oxidative stress biomarker in stomach tissues. Oxidative stress biomarker reactive oxygen species (ROS) and produces peroxynitrite (ONOO-) in stomach tissues.
그림 Fig. 4. Expression of anti-oxidant enzyme of stomach tissues in HCl/ethanol induced acute gastritis mice.
그림 Fig. 5 Expression of inflammtion-related proteins of stomach tissues in HCl/ethanol induced acute gastritis mice.
그림 Fig. 6. Expression of inflammtion-related proteins of stomach tissues in HCl/ethanol induced acute gastritis mice.

AI 본문요약
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문제 정의

甘菊과 亞麻仁의 항산화 및 항염증 효능은 많이 알려져 있지만, 위염 및 위 점막 손상에 대한 억제 연구는 이루어지지 않고 있다. 이에 본 연구에서는 천연 소재인 甘菊 추출물과 亞麻仁油를 이용하여 급성 위염 동물 모델에서의 위 점막 손상 억제 효능을 평가하였으며, 유의성 있는 결과를 얻었기에 이를 보고하는 바이다.

제안 방법

추출한 시료의 free radical 소거능 측정을 위해 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical 소거법을 이용하였다. 0.2 mM DPPH용액 100 ㎕와 시료를 농도별로 희석한 용액 100 ㎕를 혼합하여 37℃에서 30분간 암소상태로 방치한 후 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였으며, 양성대조군으로 L-ascorbic acid를 사용하였다. 흡광도는 아래의 식 (a)에 따라 계산하여 산출하였다.
CIL의 항산화 활성을 측정하기 위하여 DPPH, ABTS 자유 라디칼 소거 활성을 측정하였다. DPPH 자유 라디칼 소거 활성을 측정한 결과, 표준물질인 L-ascorbic acid의 IC ₅₀ 값은 1.
실험 전, 정상군 (Nor)은 아무런 처치를 하지 않았으며, 대조군 (Veh)은 증류수 경구 투여 후 위염을 유발하였고, 양성대조군인 sucralfate 투여군 (SC) (Sigma Aldrich)은 10 ㎎/㎏ body weight의 농도로 경구 투여하였다. 亞麻仁油 단독 투여군 (FO, 16 g/㎏ body weight)과 亞麻仁油 (16 g/㎏ body weight) + 甘菊 50% EtOH (50 ㎎/㎏ body weight) 혼합 투여군 (FCL) 및 亞麻仁油 (16 g/㎏ body weight) + 甘菊 50% EtOH (100 ㎎/ ㎏ body weight) 혼합 투여군 (FCH)은 각 농도에 맞게 경구 투여 하고 1시간 후 150 mM HCl/60% ethanol을 각 0.55 ㎖ 씩 경구 투여하였으며, 1시간 후 isoflurane (Sigma Aldrich)으로 흡입 마취하여 위 조직을 적출하였다.
는 DHR123 buffer (rodamin buffer, 5 mM DTPA, 10mM DHR123)와 분쇄한 위 조직을 혼합한 후, 37℃에서 5분간 교반하였다. 그 다음 형광 광도계를 이용해 0분부터 매 5분씩 emission 파장 535 ㎚와 excitation 파장 480 ㎚에서 30분간 측정한 값을 계산하였다. ROS 및 ONOO^- 의 실험 방법은 각각 Ali et al 과 Kooy et al의 방법을 이용하여 시행 하였다^17,18).
준비된 membrane에 각각의 1차 antibody를 처리하여 4℃에서 overnight 시킨 다음 PBS-T로 6분마다 5회 세척하고, 각각 처리된 1차 항체에 사용되는 2차 항체 (PBS-T로 1:3000로 희석해서 사용)를 사용하여 상온에서 1시간 반응시킨 후, PBS-T 로 6분마다 5회 세척하였다. 그리고 membrane을 enhanced chemiluminescence (ECL) 용액에 노출시킨 후, SensiQ2000 Chemidoc (Lugen Sci Co., Ltd., Seoul, Korea) 에 감광시켜 단백질 발현을 확인한 후, 해당 band를 ATTO Densitograph Software (ATTO Corporation, Tokyo, Japan) 프로그램을 사용하여 정량하였다.
동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22 ± 2℃, 습도 50 ± 5%, 명암주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절하였다.
또한, 산화적 스트레스에 의한 염증반응을 확인하기 위하여 염증 관련 단밸질인 NF-κBp65와 p-IκBα의 발현을 측정하 였다.
본 연구에서는 甘菊 50% EtOH 추출물와 亞麻仁油 혼합물을 경구 투여하여 급성 위염 동물모델에서의 위 점막 보호 효과를 확인하였으며 다음과 같은 결과를 얻었다.
본 연구에서는 급성 위염 유발 동물 모델의 위 조직을 이용하여 산화적 스트레스 마커인 ROS와 ONOO^-를 측정하였다. ROS를 측정한 결과, 대조군 (168828.
부검 뒤 얻은 위 조직을 이용하여 항산화 관련 단백질인 Nrf2, HO-1, SOD, catalase의 발현을 측정하였다. 산화적 스트레스는 세포 보호 유전자의 발현을 유도하는데, Nrf2는 산화적 스트레스가 발생할 경우 활성친전자체를 중화시키는 핵심 전사인 자로써 HO-1 등 항산화 효소들의 발현을 증가시키며²⁴⁾, 항산화 효소들은 생체 내의 방어기전으로 생성된 활성산소종을 소거하거나 생성을 억제 시킨다²⁵⁾.
동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22 ± 2℃, 습도 50 ± 5%, 명암주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절하였다. 사료는 고형사료 (조단백질 22.1% 이상, 조지방 8.0% 이하, 조섬유 5.0% 이하, 조회분 8.0% 이하, 칼슘 0.6% 이상, 인 0.4% 이상, 삼양사, 항생제 무첨가)와 물을 충분히 공급하였다. 동물실험의 윤리적, 과학적 타당성 검토 및 효율적인 관리를 위하여 대구한의대학교 동물 실험윤리 위원회 (Institutional Animal Care and Use Committee: IACUC)의 승인 (승인번호:DHU 2018-057)을 받았다.
산화적 스트레스 바이오 마커인 ROS 값은 위 조직을 1 mM EDTA-50 mM sodium phosphate buffer (pH 7.4)를 이용하여 분쇄한 후 25 mM DCFH-DA를 혼합하여 형광 광도계를 이용해 0분부터 매 5분씩 emission 파장 530 ㎚와 excitation 파장 485 ㎚를 이용하여 30분간 측정한 값을 계산하였다.
적출한 위 조직을 고정한 다음, 광학 디지털 카메라 (DSCHX50V, Sony, Tokyo, Japan)를 이용하여 촬영하였다. 손상된 위 점막 측정은 I-Solution lite (Innerview Co., Gyeonggido, Korea) 프로그램을 이용하여 실제 손상 부위의 면적을 측정한 후, 위 전 체 면적과 비교하여 비율로 표시하였다.
시료 10 ㎕에 증류수 790 ㎕, Folin-Ciocalteu’s phenol reagent 50 ㎕를 혼합하여 실온에서 1분간 반응시킨 후 150 ㎕의 20% sodium carbonate를 첨가하였다.
시료 10 ㎕에 증류수 790 ㎕, Folin-Ciocalteu’s phenol reagent 50 ㎕를 혼합하여 실온에서 1분간 반응시킨 후 150 ㎕의 20% sodium carbonate를 첨가하였다. 실온에서 2시간동안 반응시킨 후 UV 분광광도계 (Infinite M200, Tecan, Salzburg, Austria)를 이용하여 765 ㎚에서 흡광도를 측정한 다음, 표준물질 gallic acid를 사용하여 표준 검량선을 구하고 시료 추출물의 총 폴리페놀 함량을 산출하였다.
실험 전, 정상군 (Nor)은 아무런 처치를 하지 않았으며, 대조군 (Veh)은 증류수 경구 투여 후 위염을 유발하였고, 양성대조군인 sucralfate 투여군 (SC) (Sigma Aldrich)은 10 ㎎/㎏ body weight의 농도로 경구 투여하였다.
실험동물은 군당 8마리씩 6그룹으로 구분하여 실험을 실시하였다. 실험 전 날까지 고형사료와 물을 충분히 공급하였고, 실험 24시간 전부터 절식하였으며 물은 제공하였다.
위 조직에서 western blot을 실시하여 항산화 단백질인 Nrf2, HO-1, SOD, catalase의 발현을 확인하였다. Nrf2의 발현을 확인한 결과, 대조군 대비 정상군은 87% (p<0.
위 조직에서 염증성 매개인자인 NF-κBp65, p-IκBα의 발현을 확인하였다.
위의 세포질을 얻기 위해 100 mM Tris-HCl (pH 7.4), 5 mM Tris-HCl (pH 7.5), 2 mM MgCl2, 15 mM CaCl2, 1.5 M sucrose, 0.1 M DTT, protease inhibitor cocktail을 첨가한 buffer A를 넣고 조직 분쇄기 (tissue grinder) (Biospec Product, Bartlesville, OK, USA)로 분쇄한 후 10% NP-40 용액을 첨가하였다. 아이스 위에서 20분간 정치시킨 후 12,000 rpm으로 2분간 원심분리 하여 세포질을 포함하고 있는 상층액을 분리하였다.
본 실험에서는 甘菊 추출물과 亞麻仁油 혼합물 처리 후, 150 mM HCl/60% ethanol를 이용해 급성 위염을 유발하였는데, ethanol은 위 점막을 자극해 출혈과 손상을 일으키고 HCl은 위 운동을 증가시켜 손상을 더욱 악화시키는 것으로 알려져 있다²¹⁾. 유발 1시간 뒤, 부검하여 얻은 위 조직을 이용해 산화적 스트레스 개선 효과, 항산화 관련 인자 및 염증 관련 인자의 발현을 측정하여 위점막 보호 효과를 평가하였다.
적출한 위 조직을 고정한 다음, 광학 디지털 카메라 (DSCHX50V, Sony, Tokyo, Japan)를 이용하여 촬영하였다. 손상된 위 점막 측정은 I-Solution lite (Innerview Co.
위 조직 세포질의 IκBα, p-IκBα, iNOS, IL-6, IL-1β, HO-1, SOD, catalase, β-actin 단백질과 핵에서의 NF-kBp65, Nrf2, histone 단백질 발현을 측정하기 위하여 10㎍의 단백질을 8-15% SDS polyacrylamide gel을 이용하여 전기연동 후, acrylamide gel을 nitrocellulose membrane으로 이동시켰다. 준비된 membrane에 각각의 1차 antibody를 처리하여 4℃에서 overnight 시킨 다음 PBS-T로 6분마다 5회 세척하고, 각각 처리된 1차 항체에 사용되는 2차 항체 (PBS-T로 1:3000로 희석해서 사용)를 사용하여 상온에서 1시간 반응시킨 후, PBS-T 로 6분마다 5회 세척하였다. 그리고 membrane을 enhanced chemiluminescence (ECL) 용액에 노출시킨 후, SensiQ2000 Chemidoc (Lugen Sci Co.
추출한 시료의 항산화 효능을 알아보기 위해 2,2'-azinobis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS) free radical 소거능을 측정하였다.
diethylene glycol 1 ㎖와 시료 추출물 100 ㎕와 1 N NaOH 10 ㎕를 잘 혼합시켜 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 420 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 표준물질로는 naringin을 사용하였으며, 표준 검량선을 구하여 추출물의 총 플라보노이드 함량을 산출하였다.
아이스 위에서 20분간 정치시킨 후 12,000 rpm으로 2분간 원심분리 하여 세포질을 포함하고 있는 상층액을 분리하였다. 핵을 얻기 위해 10% NP-40가 더해진 buffer A에 두 번 헹구고 100 ㎍의 buffer C (50 mM HEPES, 50 mM KCl, 0.3 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 10% glycerol)를 첨가해 재부유시킨 후 10분마다 vortex를 3번 하였다. 4℃에서 12,000 rpm으로 10분간 원심 분리 한 후 핵을 포함하고 있는 상층액을 얻어 −80℃에서 각각 냉동 보관하였다.

대상 데이터

ICR 마우스 6주령 수컷 48마리를 오리엔트 (경기, 한국)에서 구입하여 1주일 동안 실험실 환경에 적응시킨 후 실험에 사용하였다. 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22 ± 2℃, 습도 50 ± 5%, 명암주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절하였다.
Nitrocellulose membranes는 Amersham GE Healthcare (Little. Chalfont, UK)에서 구입하였고, phosphorylation of nuclear factor-kappa B p65 (NF-κB p65), inhibitor of nuclear factor kappa B alpha (IκBα), phosphorylation inhibitor of nuclear factor kappa B alpha (p-IκBα), inducible nitric oxide synthase (iNOS), interleukin-6 (IL-6), interleukin-1 beta (IL-1β), nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2), heme oxygenase-1 (HO-1), super oxide dismutase (SOD), catalase, histone, β-actin과 2차 항체는 Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA) 로부터 구입하였으며, Protease inhibitor mixture, DMSO, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)는 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka. Japan)에서 구입하였다.
2%) –80℃에서 보관하였다. 亞麻仁油는 다온푸드 (경기, 한국)에서 구입한 것을 사용하였으며, 상온 보관 하였다.
또한 2', 7' Dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA)와 Dihydrorhodamine 123는 Molecular Probes (Eugene, OR, U.S.A.)에서 ECL Western Blotting Detection Reagents는 GE Healthcare로부터 구입하여 사용하였으며, 단백질 정량을 위한 BCA protein assay kit는 Thermo Scientific (Rockford, IL, USA)에서 구입하였다.
본 실험에 사용된 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 7 mM 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic acid) (ABTS), gallic acid, Folin-Ciocalteu’s phenol reagent, sodium carbonate, naringin, diethylene glycol, sodium hydroxide, potassium phosphate monobasic, potassium phosphate dibasic, Sucrose octasulfate aluminum complex (Sucralfate)는 Sigma aldrich (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였으며 Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하여 사용하였다.
본 실험에서 사용한 甘菊은 담아온약초 (경북, 한국)에서 구입한 것을 생약규격집에 맞추어 관능검사 후, 약전규격에 적합한 것만을 정선하여 사용하였다. 甘菊 200 g을 분쇄한 후, 10 배 용량의 50% ethanol을 이용하여 24시간 냉침하여 추출하였다.

데이터처리

In vitro의 수치는 평균과 표준편차로, in vivo의 수치는 평균과 표준오차로 표시하였으며, SPSS (Version 22.0, IBM, Armonk, NY, USA)를 사용하여 one-way analysis of variance (ANOVA) test를 실시한 후 least-significant differences (LSD) test로 사후검증을 실시하여 각 군의 평균 차이에 대한 통계적 유의성을 * P<0.05, ** P<0.01, *** P<0.001 에서 검증하였다.

이론/모형

그 다음 형광 광도계를 이용해 0분부터 매 5분씩 emission 파장 535 ㎚와 excitation 파장 480 ㎚에서 30분간 측정한 값을 계산하였다. ROS 및 ONOO^- 의 실험 방법은 각각 Ali et al 과 Kooy et al의 방법을 이용하여 시행 하였다^17,18).
총 폴리페놀 함량은 Folin-Denis법¹⁵⁾ 에 의해 측정하였다. 시료 10 ㎕에 증류수 790 ㎕, Folin-Ciocalteu’s phenol reagent 50 ㎕를 혼합하여 실온에서 1분간 반응시킨 후 150 ㎕의 20% sodium carbonate를 첨가하였다.
총 플라보노이드 함량은 Lister 등¹⁶⁾ 의 방법에 의해 구하였다. diethylene glycol 1 ㎖와 시료 추출물 100 ㎕와 1 N NaOH 10 ㎕를 잘 혼합시켜 37℃에서 1시간 동안 반응시킨 후 420 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.
추출한 시료의 free radical 소거능 측정을 위해 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) free radical 소거법을 이용하였다. 0.

성능/효과

1. 亞麻仁油의 섭취는 150mM HCl/60% ethanol로 유발된 위 점막 손상 동물모델에서 위 조직의 손상을 감소시켰으며, 甘菊 50% EtOH 추출물과 亞麻仁油 혼합물 또한 농도 의존적으로 위 점막의 손상을 감소시켰다.
2. 甘菊 50% EtOH 추출물과 亞麻仁油 혼합물을 경구 투여함으로써 산화적 스트레스 관련 인자인 ROS, ONOO^-의 수치를 효과적으로 감소시켜 위 점막 손상을 개선시킨 것으로 나타났다.
3. 甘菊 50% EtOH 추출물과 亞麻仁油 혼합물을 경구 투여함으로써 Nrf2와 항산화 효소인 HO-1, SOD, catalase의 발현을 유의적으로 증가시켰다.
4. 甘菊 50% EtOH 추출물과 亞麻仁油 혼합물을 경구 투여함으로써 IκBα의 인산화를 감소시켜 NF-κBp65의 발현을 농도 의존적으로 감소시켰다.
5. 甘菊 50% EtOH 추출물과 亞麻仁油 혼합물을 경구 투여함으로써 염증성 매개인자인 iNOS와 염증성 사이토카인인 IL-6와 IL-1β의 발현을 억제시켰다.
ABTS 자유 라디칼 소거 활성을 측정한 결과, 표준물질인 L-ascorbic acid의 IC 50 값은 3.52 ± 0.02 ㎍/㎖으로 나타났고, 甘菊 추출물의 IC 50 값은 22.95 ± 0.18 ㎍/㎖으로 나타났다 (Fig. 1).
CIL의 총 폴리페놀 및 플라보노이드를 측정한 결과, 총 폴리페놀 함량은 40.73 ± 0.53 ㎎/g으로 나타났으며, 총 플라보노이드 함량은 66.99 ± 0.30 ㎎/g으로 높은 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량을 나타냈다 (Table 1).
DPPH 자유 라디칼 소거 활성을 측정한 결과, 표준물질인 L-ascorbic acid의 IC 50 값은 1.21 ± 0.03 ㎍/㎖으로 나타났고, 甘菊 추출물의 IC 50 값은 18.51 ± 0.20 ㎍/㎖으로 나타났다.
FO군 (143616.2 ± 7229.8 fluorescence/min/㎎ protein)과 FCL군 (146175.2 ± 15291.0 fluorescence/min/㎎ protein)에서도 감소한 것을 확인할 수 있었으며 FCH군 {137087.6 ± 6532.2 fluorescence /min/㎎ protein (p<0.05)}도 유의적으로 감소하였다.
HO-1의 발현은결과, 대조군 대비 FO군은 7% 낮게 나타났지만, 정상군 및 SC군은 각각 58% (p<0.001), 29% (p<0.05) 유의적으로 높게 나타났고, FCL군과 FCH군 또한 39% (p<0.01))씩 유의적으로 높게 나타났다.
IL-1β의 발현 확인결과, 대조군 대비 정상군과 SC군은 각각 11%, 8% 감소하였으며 FO군, FCL군 및 FCH군 또한 각각 21% (p<0.05), 21% (p<0.05), 24% (p<0.05) 유의적으로 감소하였다(Fig. 6).
Nrf2의 발현을 확인한 결과, 대조군 대비 정상군은 87% (p<0.001) 유의적으로 높게 나타났으며 양성대조군인 SC군과 FO군 에서는 각각 44%, 35% 유의적으로 (p<0.05) 높게 나타났고, FCL군 및 FCH군은 각각 17%, 39% (p<0.05) 농도 의존적으로 증가하였다.
ONOO-를 측정한 결과, 대조군 (20663.00 ± 2781.04 fluorescence/㎎ protein)은 정상군 {13052.00 ± 1037.77 fluorescence/㎎ protein (p<0.001)}에 비하여 유의적으로 수치가 증가하였고, 양성대조군인 SC군 {16047.18 ± 618.21 fluorescence/㎎ protein (p<0.05)}과 FO군 {16031.33 ± 646.31 fluorescence /㎎ protein (p<0.05)}에서는 대조군 대비 유의성 있게 감소하 였으며, FCL군 {12678.00 ± 482.07 fluorescence/㎎ protein (p<0.001)}과 FCH군 {11793.60 ± 770.87 fluorescence/㎎ protein (p<0.001)}에서 또한 유의하게 수치가 감소하였다 (Fig. 3).
ROS를 측정한 결과, 대조군 (168828.6 ± 16602.4 fluorescence/min/㎎ protein)에 비하여 정상군 (151228.6 ± 9749.7 fluorescence/min/㎎ protein)은 수치가 낮게 나타났으며 양성대조군인 SC군 (164129.5 ± 5393.1 fluorescence/min/ ㎎ protein) 또한 감소하였다.
SC군 (C) 또한 10.57 ± 0.96% (p<0.001)로 대조군 (B)에 비해 손상 정도가 유의하게 감소하였으며, FCL군 (E) (11.79 ± 0.85%) 및 FCH군 (F) (10.57 ± 0.45%)의 경우에도 SC군 (C)과 유사하게 손상정도가 유의적으로 (p<0.001) 감소되었다 (Fig. 2).
SOD의 경우, 대조군에 비해 정상군 및 SC군은 25% (p<0.05), 20% (p<0.05) 유의적으로 높게 나타났고, FO군도 9% 높게 나타났으며 FCL 군과 FCH군에서도 각각 7%, 29% (p<0.05) 농도 의존적으로 높게 나타났다.
catalase의 발현은 대조군에 비해 정상군과 FO군에서 30%, 3% 높게 나타났고, 양성대조군인 SC군에서도 43% (p<0.01) 유의적으로 높게 나타났으며 FCL군과 FCH군에서 또한 각각 9%, 35% (p<0.05) 농도 의존적으로 높게 나타났다(Fig. 4).
p-IκBα의 경우 대조군 대비 정상군은 18% 감소하였으며 양성대조군인 SC군은 21% 감소 하였고, FO군, FCL군 및 FCH군은 각각 5%, 10%, 16% 감소하였다 (Fig. 5)
그 결과, NF-κBp65는 대조군 대비 정상군에서 24% 감소하였고 양성대조군인 SC군은 20% (p<0.05) 유의적으로 감소하였으며 FO군, FCL군 및 FCH군에서 각각 9%, 15%, 17% 발현이 감소하였다.
대조군 (B)의 손상 부위 면적 비율은 23.28 ± 1.05%로 정상군 (A)에 비해 매우 높게 나타났으며, FO군 (D)은 17.65 ± 1.67% (p<0.001)로 대조군 (B)에 비해 유의적으로 낮은 손상율을 나타났다.
따라서 염증성 인자인 NF-κBp65, p-IκBα, iNOS, IL-6, 및 IL-1β의 발현을 측정한 결과, 대조군이 정상군 보다 발현량이 높게 나타났으며 FO, FCL 및 FCH의 약물 처리에 따라서 염증관련 단백질이 유의적으로 억제되었고, 특히 FCH 처리에서 높은 감소효과가 나타났다.
부검 뒤 얻은 위 조직을 육안적으로 관찰한 결과, 아무런 처치를 하지 않은 정상군은 위 점막 손상이 발견되지 않았으나, 증류수를 처리한 후 급성위염을 유발한 대조군은 위 점막이 손상을 받아 출혈 및 부종이 발생하였고, 반면에 약물 처리군인 FCL군과 FCH군은 농도 의존적으로 위 점막의 손상이 억제된 것을 확인할 수 있었다. 위 점막 손상도를 측정한 결과, 대조군은 정상군에 비해 유의적으로 손상도가 높게 나타났으며, 약물 처리군인 FCL군과 FCH군은 유의적으로 손상 정도가 감소하였다.
산화적 스트레스는 세포 보호 유전자의 발현을 유도하는데, Nrf2는 산화적 스트레스가 발생할 경우 활성친전자체를 중화시키는 핵심 전사인 자로써 HO-1 등 항산화 효소들의 발현을 증가시키며²⁴⁾, 항산화 효소들은 생체 내의 방어기전으로 생성된 활성산소종을 소거하거나 생성을 억제 시킨다²⁵⁾. 실험 결과 Nrf2, HO-1, SOD, catalase는 정상군에 비해 대조군에서 발현이 감소하였으며, 약물 처리군인 FO군, FDL군 및 FCH군에서의 발현이 증가하였다.
염증성 매개인자인 iNOS, IL-6, IL-1β의 발현을 확인한 결과, iNOS의 발현의 경우 대조군 대비 정상군은 48% (p< 0.01) 유의적으로 감소하였으며 양성대조군인 SC군에서도 46% (p<0.01) 유의적으로 감소하였고, FO군, FCL군 및 FCH 군에서도 각각 11%, 17%, 27% 농도 의존적으로 감소하였다.
위 점막 손상 정도를 육안으로 관찰한 결과, 아무런 처치를 하지 않은 정상군 마우스의 위 점막에서는 손상이 발견되지 않았으나 증류수를 처리한 대조군 (B)에서는 150 mM HCl/60% ethanol에 의해 위 점막이 손상을 받아 출혈 및 부종이 발생된 것을 관찰할 수 있었다. 대조군 (B)의 손상 부위 면적 비율은 23.
부검 뒤 얻은 위 조직을 육안적으로 관찰한 결과, 아무런 처치를 하지 않은 정상군은 위 점막 손상이 발견되지 않았으나, 증류수를 처리한 후 급성위염을 유발한 대조군은 위 점막이 손상을 받아 출혈 및 부종이 발생하였고, 반면에 약물 처리군인 FCL군과 FCH군은 농도 의존적으로 위 점막의 손상이 억제된 것을 확인할 수 있었다. 위 점막 손상도를 측정한 결과, 대조군은 정상군에 비해 유의적으로 손상도가 높게 나타났으며, 약물 처리군인 FCL군과 FCH군은 유의적으로 손상 정도가 감소하였다.
체내에 축적되어 정상적으로 소거되지 않은 ROS는 세포를 산화적 스트레스 상태에 이르게 하며, 과도하게 축적된 산화적 스트레스 상태에서의 ONOO^-는 염증반응 및 여러 만성질환 발생에 관여하며, 또한 protein과 DNA 등과 반응하여 세포의 손상을 야기한다²³⁾. 위 조직에서 산화적 스트레스 바이오 마커인 ROS와 ONOO^-를 측정한 결과, 정상군에 비해 대조군에서는 수치가 증가한 것을 확인할 수 있었으며, FO군 뿐만 아니라 FCL군과 FCH군도 농도 의존적으로 수치가 감소하였다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	甘菊(감국)의 효능은 무엇인가?	甘菊 (Chrysanthemum incidicum Linne )은 국화과 (Compositae) 국화속 (Chrysanthenum )의 다년생 초본으로10), 우리나라 중부 이남의 산지에 분포하는 야생국화이다11). 주요성분으로는 luteolin, apigenin, apigenin 7-O-β-Dglucoside 및 luteolin 7-O-β-D-glucoside 등의 플라보노이드 화합물과 cumambrin A, cumambrin B, arteglasin A 및 angeloyljadin 등이 알려져 있으며12), 甘菊은 濕疹 등의 피부질환, 동맥경화, 高血壓 등에 효과적일 뿐 아니라 위염과 안질환에도 좋은 효능을 나타내는 것으로 알려져 있다10).
	위장 질환은 무엇인가?	위장 질환은 소화기 질환 중 하나로, 세계 인구의 4~5%가 일생 동안 한 번 이상 경험하게 되는 흔한 질환이다1). 위벽은 4개의 층으로 이루어져 있으며, 첫 번째 층인 위 점막이 손상된 경우를 위염이라 하고, 두 번째 층 이상이 손상된 경우를 위궤양이라 한다2).
	위염의 발병 원인은 무엇인가?	위염은 위 점막을 손상시키는 공격인자와 보호하는 방어인자 사이의 균형이 깨져 염증이 발생되는 것을 의미하는데3,4), 위염이 더 심해지면 위궤양이나 만성적인 위염으로 진행하며 만성위염은 위암으로 이어진다5). 주요 발병 원인으로는 소염제 등의 약물 과다복용, Helicobacterpylori균 감염, 불규칙한 식습관, NSAID (non-steroid anti-inflammatory drugs), 스트레스, 알코올 등이 있다4,6).

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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