[논문]누에, 맥문동복합물의 흉선 림프절내 T세포 활성 유도 효능 연구

김일규; 박해진; 김경조; 김수현; 김민주; 이진아; 노성수

doi:10.6116/kjh.2018.33.5.47.

누에, 맥문동복합물의 흉선 림프절내 T세포 활성 유도 효능 연구
Mixture Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber effects on T cells in Thymus, Lymph Nodes 원문보기

大韓本草學會誌 = The Korea journal of herbology, v.33 no.5, 2018년, pp.47 - 52

김일규 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 박해진 (대구한의대학교 산학협력단 코스메디컬센터) , 김경조 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 김수현 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 김민주 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 이진아 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실) , 노성수 (대구한의대학교 한의과대학 본초약리학교실)

Abstract ▼ AI-Helper

Objectives : The purpose of this study is to investigate effects on the immune system of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber mixture (BL) in Thymus, Lymph Nodes. Methods : Eight-week-old male Balb/c mice were divided into five groups : Group one included the normal mice (Nor). Positive control group two administrated with red ginseng (RG) 100 mg/kg. Group three administrated with Bombyx mori L. (BX) 300 mg/kg. Group four administrated with Liriopis seu Ophiopogonis Tuber (LP) 300 mg/kg. Group five administrated with the mixture of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber (BL) 300 mg/kg. After 2 weeks administration, mice were sacrified and antigen receptor in Thymus, Lymph Nodes was analyzed by using Fluorescence Activated Cellorter Sorting (FACS). we counted the total of Thymus and Lymph Nodes cells. GOT (glutamlc oxaloacetic transaminase), GPT (glutamlc pyruvic transamlnase) in serum were analyzed after experiment. Results : In Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the ratio of CD4+CD8+, CD4+CD69+ and CD4+CD25+ T cell in Thymus and Lymphnode, BL is higher than other groups except Nor in CD4+, CD4+CD69+, CD4+CD25+ T cell. The number of Thymus and Lymph Nodes increased in BL. In the level of GOT and GPT, BL decreased comparing to others group except Nor. Conclusions : BL may have effect on T cells in Thymus, Lymph Nodes. In addition, Bombyx mori could be immune functional material with others herb materials.

주제어

표/그림 (6)

그림 Fig. 1. Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the ratio of T cells in Lymph Nodes. (A) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the ratio of T cells CD4+CD8+ (B) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the number of T cells CD4+CD69+ (C) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the ratio of T cells CD4+CD25+. Nor : Normal. RG : Red Ginseng. BX : Bombyx mori L. LP: Liriopis seu Ophiopogonis Tuber BL: the mixture of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber
그림 Fig. 2. Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the ratio of T cells in Thymus. (A) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the ratio of T cells CD4+CD8+. Nor : Normal. RG : Red Ginseng. BX : Bombyx mori L. LP: Liriopis seu Ophiopogonis Tuber BL: the mixture of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber
그림 Fig. 3. Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the number of T cells in Lymph Nodes. (A) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the number of T cells CD4+ (B) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the number of T cells CD4+CD69+ (C) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the number of T cells CD4+ CD25+. Nor : Normal. RG : Red Ginseng. BX : Bombyx mori L. LP: Liriopis seu Ophiopogonis Tuber BL: the mixture of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber Significance: **p < 0.01 vs Nor.
그림 Fig. 4 Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the number of T cells in Thymus (A) Effects of Nor, RG, BX, LP, BL on the number of T cells CD4+CD8+. Nor : Normal. RG : Red Ginseng. BX : Bombyx mori L. LP: Liriopis seu Ophiopogonis Tuber BL: the mixture of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber. No significance
그림 Fig. 5. The number of T cell on Nor, RG, BX, LP, BL (A) The number of T cell on Nor, RG, BX, LP, BL in Lymph Nodes (B) The number of T cell on Nor, RG, BX, LP, BL in Thymus. Nor : Normal. RG : Red Ginseng. BX : Bombyx mori L.. LP: Liriopis seu Ophiopogonis Tuber. BL: the mixture of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber Significance: *p < 0.05, vs. Nor
그림 Fig. 7. glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic pyruvic transaminase (GPT) in serum. ALT level in TAA-induced rat; (A) GOT in serum. (B) GTP in serum. Nor : Normal. RG : Red Ginseng. BX : Bombyx mori L. LP: Liriopis seu Ophiopogonis Tuber BL: the mixture of Bombyx mori L. and Liriopis seu Ophiopogonis Tuber Significance: *p < 0.05, vs. Nor

AI 본문요약
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문제 정의

두 시료가 가진 면역활성 효과 관련 선행연구를 통한 보고를 근거로 복합물의 형태로 흉선, 림프절내 T세포 활성 가능성을 확인하고자 실험을 하였다.
본 연구에서는 누에, 맥문동복합물의 흉선, 림프절내 T세포의 면역활성을 분석한 결과 다음과 같은 결과를 도출했다.
이러한 면역관련 장기인 비장, 림프절과 면역세포 도움CD4+ T림프구, 세포독성CD8+림프구, CD4+CD25+림프구, CD4+ CD69+림프구 등에 미치는 누에, 맥문동 복합물의 면역활성을 알고자 실험한 결과 다음과 같은 결과 및 결론을 도출 할 수가 있었다.

가설 설정

림프에 존재하는 대부분의 림프구는 순환계통을 돌다가 빠져나와 림프조직으로 들어가 주위 조직에 대한 면역 감시기능을 한 후 다시 순환계통으로 들어간다.¹⁴⁾가슴샘은 가슴뼈의 뒤, 심장과 대동맥의 앞에 위치한다. 겉질과 속질로 나뉘며 조직학적으로는 그물세포와 그물섬유로 구성되어 있다.
림프절은 겉질과 속질로 구성되어있다.¹⁷⁾림프관을 타고 림프절로 들어온 림프액은 처음에 겉질 부위의 피막밑굴을 거쳐 속질부위의 속질굴을 거쳐 림프절을 빠져나가게 된다. 겉질의 바깥쪽에는 주로 B림프구가 모여 있어 외부 항원을 탐지하는 종자중심이 많이 분포하고 있다.

제안 방법

Balb/c계 생쥐를 정상군 (Nor), 양성대조군 홍삼추출물(RG) 100 ㎎/㎏, 대조군 누에추출물 (BX) 300 ㎎/㎏, 대조군 맥문동추출물 (LP) 300 ㎎/㎏, 대조군 누에, 맥문동복합 추출물 (BL) 300 ㎎/㎏군으로 6마리씩 나누어 14일간 경구 투여하였다. 실험동물을 ethyl ether로 마취시킨 후 흉선, 림프를 각각 적출하여 100mesh로 세포를 분리하여 D-PBS로 5분간 원심분리 1700rpm하여 2회 세척한 후 cell strainer에 통과시켜 세포 이외의 분해되지 않은 조직이나 불순물을 제거하였다.
각각의 시험 관에 흉선, 림프절세포를 5×10⁵ 세포로 조정한 후 4℃에서 면역 형광염색을 실시했다. Flow cytometry의 Cell Quest 프로그램을 이용하여 CD4+CD69+, CD4+CD25+, 그리고 CD4+CD8+의 활성세포 빈도(%)로 분석하였다.
각각의 시험 관에 흉선, 림프절세포를 5×105 세포로 조정한 후 4℃에서 면역 형광염색을 실시했다.
그 후 감압증류기 (N-1200A, EYELA.CO. LTD, Japan)를 이용하여 추출액을 농축하는 과정을 거치고, 동결건조기 (PF-10/ ALPHA 1-2LD, Germany)를 통하여 건조된 열수 추출물을 얻어 –80℃에서 냉동 보관하여 실험에 사용하였다.
동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22±2℃, 습도 50±5% 명암 주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절 하였다.
흉선, 림프절을 적출하여 100 mesh로 비장세포를 분리하여 D-PBS로 5분간 원심분리 1700 rpm하고 세척한 후 cell strainer에 통과시켜 세포 이외의 분해되지 않은 조직이나 불순물을 제거했다. 분리된 흉선, 림프절을 2회 1%의 FBS가 함유된 PBS로 세척한 후 cell strainer 에 통과시켜 세포 이외의 불순물을 제거했다. 각각의 시험 관에 흉선, 림프절세포를 5×10⁵ 세포로 조정한 후 4℃에서 면역 형광염색을 실시했다.
실험동물을 ethyl ether로 마취시킨 후 흉선, 림프를 각각 적출하여 100mesh로 세포를 분리하여 D-PBS로 5분간 원심분리 1700rpm하여 2회 세척한 후 cell strainer에 통과시켜 세포 이외의 분해되지 않은 조직이나 불순물을 제거하였다. 세포들을 ACK 용액을 실온에서 5분간 처리하여 적혈구를 용해시키고, 다시 D-PBS로 2회 세척한 후 0.04% trypan blue 로 염색한 후 세포수를 측정하였다.
Balb/c계 생쥐를 정상군 (Nor), 양성대조군 홍삼추출물(RG) 100 ㎎/㎏, 대조군 누에추출물 (BX) 300 ㎎/㎏, 대조군 맥문동추출물 (LP) 300 ㎎/㎏, 대조군 누에, 맥문동복합 추출물 (BL) 300 ㎎/㎏군으로 6마리씩 나누어 14일간 경구 투여하였다. 실험동물을 ethyl ether로 마취시킨 후 흉선, 림프를 각각 적출하여 100mesh로 세포를 분리하여 D-PBS로 5분간 원심분리 1700rpm하여 2회 세척한 후 cell strainer에 통과시켜 세포 이외의 분해되지 않은 조직이나 불순물을 제거하였다. 세포들을 ACK 용액을 실온에서 5분간 처리하여 적혈구를 용해시키고, 다시 D-PBS로 2회 세척한 후 0.

대상 데이터

8주령 Balb/c계 수컷 생쥐를 샘타코 바이오 (Korea, Osansi)에서 구입하여 실험에 사용하였다. 동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22±2℃, 습도 50±5% 명암 주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절 하였다.
본 실험에서 사용한 맥문동은 옴니허브 (대구, 한국)에서 구입한 것을 생약규격집에 맞추어 대구한의대학교 한의과대 학교에서 관능 검사하여 약전규격에 합격한 것만을 정선하여 실험에 사용하였고 누에는 영천양잠농협에서 분말을 구입하였다. 맥문동 100 g을 분쇄하여 환류추출기 (heating Mantle, MS-DM609/20L)에 넣고 100℃ 에서 증류수를 1 ℓ 가하여 120분 추출하였다.
동물 사육실의 조건은 conventional system으로 온도 22±2℃, 습도 50±5% 명암 주기 (light : dark cycle)는 12시간 주기로 조절 하였다. 사료는 고형사료 (Samyang corporation, Seoul, Korea), (조단백질 22.1% 이상, 조지방 8.0% 이하, 조섬유 5.0% 이하, 조회분 8.0% 이하, 칼슘 0.6% 이상, 인 0.4% 이상, 항생제 무첨가)와 물을 충분히 공급하였다.

데이터처리

모든 수치는 평균과 표준오차로 표시하였으며, SPSS (Version 22.0, IBM, Armonk, NY, USA)을 사용하여 one-way analysis of variance (ANOVA) test를 실시한 후 least-significant differences (LSD) test로 사후검증을 실시하여 각 군의 평균 차이에 대한 통계적 유의성을 p-value < 0.05에서 검증하였다.

이론/모형

혈청의 glutamic oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic pyruvic transaminase (GTP)는 assay kit (Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Osaka, Japan)의 프로토콜에 따라 측정하였다.

성능/효과

적응 면역반응은 B림프구가 관여하는 체액성 면역반응과 T림프구가 관여하는 세포 매개성 면역반응으로 구분된다.¹⁾체액성 면역반응은 항원 자극과 T림프구의 도움 등이 가해지면 B림프구는 항체를 생성하여 혈액과 림프로 분비한다.²⁾세포매개성 면역반응에 관여하는 T림프구는 항체를 생성, 분비하지 않고 세포에 가까이 접촉을 하여 세포를 제거한다.
1. 누에, 맥문동복합물은 세포독성 T세포 활성보다 보조 T세포의 활성에 기여함.
¹⁾체액성 면역반응은 항원 자극과 T림프구의 도움 등이 가해지면 B림프구는 항체를 생성하여 혈액과 림프로 분비한다.²⁾세포매개성 면역반응에 관여하는 T림프구는 항체를 생성, 분비하지 않고 세포에 가까이 접촉을 하여 세포를 제거한다.³⁾
2. 누에, 맥문동복합물은 흉선, 림프절이 다른 투여군보다 높게 세포 수가 증가함.
3. 누에, 맥문동복합물의 간 독성은 다른 투여군보다 낮은 경향성을 가짐.
2% 높게 나타났다. CD4+CD25+ T세포의 비율은 BL투여군 경우 6.2%로 나타났으며, Nor군, RG투여군 CD4+CD25+ T세포의 비율보다 3.6%, 3%보다 높게 나타났다. (Figure 1)
분리된 림프절 내 면역세포를 분석한 결과, CD4+, CD8+ T세포의 비율은 다섯 군 사이에 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. CD4+CD69+ T세포의 비율은 BL투여군 경우 3.4%로 Nor군과 RG투여군 CD4+CD69+ T세포의 비율보다 0.8%, 0.2% 높게 나타났다. CD4+CD25+ T세포의 비율은 BL투여군 경우 6.
간 손상 지표 측정인 GOT, GTP 결과를 보면 GOT 경우 다른 투여군보다 낮게 나타났고, GTP 경우 홍삼투여군보다 높게 나왔지만 단일 투여군보다 낮게 나타났다. GOT, GTP 수치가 정상일 경우 간 손상이 일어나지 않았다는 의미이며 두 개의 단일 소재간 혹시 모를 독성 상호작용으로 인한 간 독성, 손상을 우려 하였지만 단일 소재의 GOT, GTP 수치보다 낮게 나타났다.
간 손상 지표 측정인 GOT, GTP 결과를 보면 GOT 경우 다른 투여군보다 낮게 나타났고, GTP 경우 홍삼투여군보다 높게 나왔지만 단일 투여군보다 낮게 나타났다. GOT, GTP 수치가 정상일 경우 간 손상이 일어나지 않았다는 의미이며 두 개의 단일 소재간 혹시 모를 독성 상호작용으로 인한 간 독성, 손상을 우려 하였지만 단일 소재의 GOT, GTP 수치보다 낮게 나타났다.
그리고 단일추출물인 BX투여군, LP투여군보다 18×107, 8×107만큼 높게 증가하였다.
따라서 누에, 맥문동복합물은 흉선, 림프절 내 T세포 중보조 T세포가 흉선과 림프절내 활성화 되었다. 추가적으로 보조 T세포가 적응면역과 관련이 있으므로 적응면역반응에 관여할 수 있다.
누에, 맥문동복합물투여군은 세포독성 T세포 활성보다 보조 T세포의 활성효과가 있는 것을 알 수가 있다. 분리된 림프절 내 면역 세포를 분석한 결과, 누에, 맥문동복합추출물투여군은 CD4+ CD69+ T세포, CD4+CD25+ T세포의 비율이 높게 나타났다. 누에, 맥문동복합물투여군은 림프절에서 또한 세포독성 T세포보다 보조 T세포의 활성효과가 있는 것을 알 수가 있다.
분리된 림프절 내 면역세포를 분석한 결과, CD4+, CD8+ T세포의 비율은 다섯 군 사이에 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. CD4+CD69+ T세포의 비율은 BL투여군 경우 3.
분리된 림프절 내 총 CD4+ 세포수를 분석한 결과, CD4+ T 세포수는 Nor군의 경우 37.7×105 cells 로 나타났으며, RG투여군 경우 70.2 ×105 cells 로 증가하였다 .
분리된 림프절 내 총 CD4+CD25+ T세포수를 분석한 결과, Nor군 경우 3.6×105 cells 로 나타났으며, RG투여군 경우 8.1 ×105 cells 로 증가하였다.
분리된 림프절 내 총 CD4+CD69+ T세포수를 분석한 결과, 1.7×105cells 로 나타났으며, RG투여군 경우 3.6×105 cells 로 증가하였다.
분리된 흉선 내 면역세포를 분석한 결과, CD4+ T 세포의 비율은 BL투여군 경우 15.4%로 나타났으며, Nor 보다 낮지만 RG투여군의 비율과 비슷하였다. CD8+ T세포의 비율은 BL 투여군 경우 2.
분리된 흉선 내 면역세포를 분석한 결과, 누에, 맥문동복합 추출물투여군은 CD4+ T세포의 비율이 높게 나타났다. 누에, 맥문동복합물투여군은 세포독성 T세포 활성보다 보조 T세포의 활성효과가 있는 것을 알 수가 있다.
혈액 내 GOT 효소를 분석한 결과, Nor군 경우 62 u/l 로 나타났으며, RG투여군은 85 u/l로 Nor군에 비해 증가하였다. BX 투여군은 88 u/l 로 Nor군에 비해 증가하였다.
혈액 내 GPT 효소를 분석한 결과, 정상군의 경우 27 u/l 로 나타났으며, RG투여군은 23 u/l로 Nor군에 비해 감소하였다. BX투여군은 26 u/l 로 나타났으며 LP투여군은 29 u/l 로 나타났다.

질의응답

핵심어	질문	논문에서 추출한 답변
	면역이란?	면역은 체내에 존재하는 자기방어체계로서 인체가 외부로 부터 침입해오는 각종 물질이나 생명체를 자기 자신에 대한 이물질로 인식하여 제거하고 대사시키는 과정이다. 적응 면역반응은 특정 항원에 대하여 특정 림프구가 작용하여 기억하고 있다가, 동일 항원이 다음에 들어오면 반응한다.
	이번 연구에서 누에, 맥문동복합물의 흉선, 림프절내 T세 포의 면역활성을 연구한 결과는 어떻습니까?	1. 누에, 맥문동복합물은 세포독성 T세포 활성보다 보조 T 세포의 활성에 기여함. 2. 누에, 맥문동복합물은 흉선, 림프절이 다른 투여군보다 높게 세포 수가 증가함. 3. 누에, 맥문동복합물의 간 독성은 다른 투여군보다 낮은 경향성을 가짐. 따라서 누에, 맥문동복합물은 흉선, 림프절 내 T세포 중보조 T세포가 흉선과 림프절내 활성화 되었다. 추가적으로 보조 T세포가 적응면역과 관련이 있으므로 적응면역반응에 관여할 수 있다. 다른 측면에서 누에, 맥문동복합물을 통해 맥문 동과 비슷한 성분을 가진 한약이나 비슷한 효능을 가진 한약과 누에의 배합 가능성이 사료된다.
	림프계통은 어떻게 구성되어 있나요?	림프계통은 체표면과 체내 환경을 감시하고 유해물질에 반응하는 세포, 조직, 기관으로 구성되어 있다. 림프계통에는 비장, 골수, 가슴샘, 림프절 등이 포함되어 있다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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