[논문]만성 알코올 유발 마우스 간손상 및 지방 축적에 대한 제주조릿대잎 에틸 아세테이트 분획물의 간 보호 효과

김아름; 이영주; 김효진; 양지원; 김주성; 지영흔

doi:10.14405/kjvr.2020.60.4.215

만성 알코올 유발 마우스 간손상 및 지방 축적에 대한 제주조릿대잎 에틸 아세테이트 분획물의 간 보호 효과
Sasa quelpaertensis Nakai ethyl acetate fraction protects the liver against chronic alcohol-induced liver injury and fat accumulation in mice 원문보기

Korean journal of veterinary research = 대한수의학회지, v.60 no.4, 2020년, pp.215 - 223

김아름 (차세대융복합과학기술협동과정, 제주대학교) , 이영주 (수의학과, 수의과대학, 제주대학교) , (차세대융복합과학기술협동과정, 제주대학교) , 김효진 (식품생명공학과, 공과대학, 제주대학교) , 양지원 (동물생명공학전공, 생명자원과학대학, 제주대학교) , 김주성 (식물자원환경전공, 생명자원과학대학, 제주대학교) , 지영흔 (차세대융복합과학기술협동과정, 제주대학교)

Abstract ▼ AI-Helper

Sasa (S.) quelpaertensis Nakai (Korean name, Jeju-Joritdae), which has anti-oxidative and anti-inflammatory activities, is a type of bamboo grass distributed widely in Jeju Island, Korea. S. quelpaertensis leaves are used for therapeutic purposes in traditional Korean medicine. This study examined the hepatoprotective effects of the S. quelpaertensis ethyl acetate fraction (SQEA) in a mouse model to mimic alcoholic liver damage. The mice were administered orally with 30% alcohol (5 g/kg) once per day with or without SQEA treatments (100 and 200 mg/kg) for 14 days consecutively. Alcohol consumption increased the serum alcohol content and histopathological changes but reduced the liver weight. Moreover, the livers of the alcohol group exhibited the accumulation of malondialdehyde and cytochrome P450 2E1 (CYP2E1), and lipid droplet coating protein perilipin-2. On the other hand, SQEA dose-dependently attenuated the alcohol-induced serum ethanol content and liver histopathological changes but increased the liver weight. Moreover, SQEA attenuated the level of CYP2E1 and inhibited alcohol-induced lipogenesis in the liver via decreased perilipin-2 expression. These results suggest that SQEA can provide a potent way to reduce the liver damage caused by alcohol consumption.

주제어

표/그림 (5)

$Fig. 1. Effect of SQEA on the ratio of liver/body weight (A), lipid peroxidation (B) in chronic alcohol consumption mice. The mice have received 30% alcohol (5 g/kg body weight, BW) for 14 days, and with SQEA (100, 200 mg/kg, BW). Lipid peroxidation was measured by the amount of MDA. The results were analyzed using a Student's t-test. The values are reported as the mean ± SE of three individual experiments (*p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001). SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction; MDA, malondialdehyde; BW, body weight.$ 그림 Fig. 1. Effect of SQEA on the ratio of liver/body weight (A), lipid peroxidation (B) in chronic alcohol consumption mice. The mice have received 30% alcohol (5 g/kg body weight, BW) for 14 days, and with SQEA (100, 200 mg/kg, BW). Lipid peroxidation was measured by the amount of MDA. The results were analyzed using a Student's t-test. The values are reported as the mean ± SE of three individual experiments (*p < 0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001). SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction; MDA, malondialdehyde; BW, body weight.
$Fig. 2. SQEA decreased metabolic changes in mice with alcoholic fatty liver and hepatocyte damage. Macroscopic and histological evaluation of (A) healthy control, (B) EtOH only, (C) EtOH+SQEA 100 mg/kg (D) EtOH+SQEA 200 mg/kg are shown. Representative images of H&E stained section of (E, I) healthy control, (F, J) EtOH only, (G, K) EtOH+SQEA 100 mg/kg and (H, L) EtOH+SQEA 200 mg/kg display histological changes in the liver. Scale bars of E - H are 100 μm, and those of I - L are 25 μm. Lymphoscytic inflammation (arrowhead), sinusoidal dilatation (arrow) are indicated. SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.$ 그림 Fig. 2. SQEA decreased metabolic changes in mice with alcoholic fatty liver and hepatocyte damage. Macroscopic and histological evaluation of (A) healthy control, (B) EtOH only, (C) EtOH+SQEA 100 mg/kg (D) EtOH+SQEA 200 mg/kg are shown. Representative images of H&E stained section of (E, I) healthy control, (F, J) EtOH only, (G, K) EtOH+SQEA 100 mg/kg and (H, L) EtOH+SQEA 200 mg/kg display histological changes in the liver. Scale bars of E - H are 100 μm, and those of I - L are 25 μm. Lymphoscytic inflammation (arrowhead), sinusoidal dilatation (arrow) are indicated. SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.
$Fig. 3. Chronic alcohol consumption-induced CYP2E1 expression in mice. Immunohistochemical staining for CYP2E1 in the liver of (A, F) healthy control, (B, G) EtOH only, (C, H) EtOH+SQEA 100 mg/kg, (D, I) EtOH+SQEA 200 mg/kg, and (E, J) Negative control. (K) Image J analysis of the number of CYP2E1 positive cells per visual field. The values are indicated as the mean ± SE of three individual experiments (***, †††p < 0.001). Scale bars of A-E are 100 μm and those of F-J are 25 μm. SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.$ 그림 Fig. 3. Chronic alcohol consumption-induced CYP2E1 expression in mice. Immunohistochemical staining for CYP2E1 in the liver of (A, F) healthy control, (B, G) EtOH only, (C, H) EtOH+SQEA 100 mg/kg, (D, I) EtOH+SQEA 200 mg/kg, and (E, J) Negative control. (K) Image J analysis of the number of CYP2E1 positive cells per visual field. The values are indicated as the mean ± SE of three individual experiments (***, †††p < 0.001). Scale bars of A-E are 100 μm and those of F-J are 25 μm. SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.
$Fig. 4. Chronic alcohol consumption induced perilipin-2 expression in mice. Immunohistochemical staining for perillipin in the liver of (A, F) healthy control, (B, G) EtOH only, (C, H) EtOH+SQEA 100 mg/kg, (D, I) EtOH+SQEA 200 mg/kg, and (E, J) Negative control. (K) Image J analysis of the number of perilipin-2 positive adipocytes per visual field. The values are indicated as the mean ± SE of three individual experiments (***, †††p < 0.001). Scale bars of A-E are 100 μm, and those of F-J are 25 μm. SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.$ 그림 Fig. 4. Chronic alcohol consumption induced perilipin-2 expression in mice. Immunohistochemical staining for perillipin in the liver of (A, F) healthy control, (B, G) EtOH only, (C, H) EtOH+SQEA 100 mg/kg, (D, I) EtOH+SQEA 200 mg/kg, and (E, J) Negative control. (K) Image J analysis of the number of perilipin-2 positive adipocytes per visual field. The values are indicated as the mean ± SE of three individual experiments (***, †††p < 0.001). Scale bars of A-E are 100 μm, and those of F-J are 25 μm. SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.
$Fig. 5. Serum AST, ALT, LDH, TC, and ethanol content analysis. (A) AST, (B) ALT, (C) LDH, (D) TC, and (E) Ethanol content. Values are indicated as the mean ± SE of three individual experiments (*, †p < 0.05). AST, aspartate aminotransferase; ALT, alanine aminotransferase; LDH, lactate dehydrogenase; TC, total cholesterol; SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.$ 그림 Fig. 5. Serum AST, ALT, LDH, TC, and ethanol content analysis. (A) AST, (B) ALT, (C) LDH, (D) TC, and (E) Ethanol content. Values are indicated as the mean ± SE of three individual experiments (*, †p < 0.05). AST, aspartate aminotransferase; ALT, alanine aminotransferase; LDH, lactate dehydrogenase; TC, total cholesterol; SQEA, Sasa quelpaertensis ethyl acetate fraction.

AI 본문요약
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문제 정의

이전 연구에서 Herath 등[20]은 단회폭음 동물 모델(binge alcohol consumption model)을 이용하여 페놀산(phenolic acid)과 플라보노이드(flavonoid)가 풍부한 제주조릿대잎 에틸 아세테이트(Sasa quelpaertensis Nakai ethyl acetate fraction of extract, 이하 SQEA) 추출물이 알코올로 인한 산화적 스트레스를 억제하고 지방산 산화(fatty acid oxidation) 및 지방형성(lipogenesis)을 감소 시켜 지방간을 예방한다고 보고하였다. 따라서 본 연구에서는 알코올을 장기간 투여하여 만성 간손상을 유발한 동물 모델 (chronic alcohol consumption mouse model)을 이용하여 제주조릿대잎 에틸 아세테이트 추출물(SQEA)의 간 보호 효과를 연구하고자 하였다.

제안 방법

그 후 70, 80, 90, 95, 100% ethanol에 순차적으로 담근 후 xylene에 3분씩 3단계를 거쳐 탈수 및 투명화 과정을 거쳐 봉입하였다. Olympus DP-72 (Olympus, Japan)을 이용하여 200배, 400배의 광학 배율에서 촬영하였다.
SQEA의 투여가 알코올에 의해 간손상이 유발된 마우스의 간 기능과 알코올 대사, 지질 대사에 미치는 영향을 혈청 내아스파르테이트아미노전달효소(이하 AST), 알라닌 아미노 전달 효소(이하 ALT), 젖산탈수소효소(이하 LDH), 총 콜레스테롤 (이하 TC), 혈중 에탄올 농도를 측정하여 확인하였다(Fig. 5). 혈청 내 AST는 정상 대조군(vehicle)에서 139±22.
SQEA의 투여가 알코올에 의해 손상된 간조직에서 CYP2E1 발현에 미치는 영향을 면역조직화학 염색을 통해 확인하였다(Fig. 3). CYP2E1 양성세포의 수는 정상 대조군 (vehicle)에서 236, 428±17, 170.
SQEA의 투여가 알코올에 의해 손상된 간조직에서 perilipin-2 발현에 미치는 영향을 면역조직화학 염색을 통해 확인하였다(Fig. 4). Perilipin-2 양성세포의 수는 정상 대조군 (vehicle)에서 4, 811±765.
SQEA의 투여가 알코올에 의해 손상된 간조직의 형태학적 변화에 미치는 영향을 확인하기 위하여 H&E 염색을 통해 확인하였다(Fig. 2). H&E 염색 결과, 정상 대조군(vehicle) 보다(Fig.
세포막 손상을 야기한다. SQEA의 투여가 지질 과산화에 미치는 영향을 알아보기 위해 지질과산화물의 함량을 측정하였다(Fig. 1B).
간조직을 10% 중성 완충포르말린(neutral buffered formalin)에 고정한 후 통상적인 방법에 따라 파라핀 블록을 제작하였다. 파라핀 블록을 3μm로 박절한 조직을 슬라이드에 부착한 뒤, 탈파라핀화를 위하여 xylene에 3분간 3단계를 거치고 100, 95, 90, 80, 70% ethanol에 순차적으로 담가 함수 시켰다.
간조직을 protease inhibitors (2mM Na3VO₄, 1mM PMSF, 10μg/mL aprotinin, 10μg/ml leupeptin)를 첨가한 RIPA buffer (150mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% deoxycholic acid, 0.1% SDS, 50mM Tris, pH 8.0)와 함께 균질기 (taco Prep bead beater, GeneReach Biotechnology Co., Taiwan)를 이용하여 마쇄하고 균질액을 원심분리(3, 000×g, 10min, 4 C)하여 단백질을 추출한 후 정량하였다. 정량한 단백에 10% (w/v) trichloroacetic acid (TCA)를 첨가하고 10 분동안 얼음에서 반응시키고 원심분리(2,000×g, 15min,4 C)하여 상층액을 얻은 후 0.
간조직을 중성 완충포르말린에 고정한 후 통상적인 방법에 따라 파라핀 블록을 제작하였다. 파라핀 블록을 3μm로 박절한 조직을 슬라이드에 부착한 뒤, 탈파라핀화를 위하여 xylene에 3분간 3단계를 거치고 100, 95, 90, 80, 70% ethanol에 순차적으로 담가 함수시켰다.
그 후 흐르는 물에서 5분간 수세한 후 Mayer’s hematoxylin과 eosin 용액을 이용하여 염색한 후 흐르는 물에서 3분간 수세하였다. 그 후 70, 80, 90, 95, 100% ethanol에 순차적으로 담근 후 xylene에 3분씩 3단계를 거쳐 탈수 및 투명화 과정을 거쳐 봉입하였다. Olympus DP-72 (Olympus, Japan)을 이용하여 200배, 400배의 광학 배율에서 촬영하였다.
파라핀 블록을 3μm로 박절한 조직을 슬라이드에 부착한 뒤, 탈파라핀화를 위하여 xylene에 3분간 3단계를 거치고 100, 95, 90, 80, 70% ethanol에 순차적으로 담가 함수시켰다. 그 후 항원성 부활 화를 위하여 cirate 완충액(10mM, pH 6.0)을 마이크로웨이브오븐을 이용하여 예열하였다. 예열된 citrate 완충액에 슬라이드를 담근 후 20분간 열처리를 하고 흐르는 물에서 5분간 수세하였다.
67% (w/v) solution in 50mM TBA)를 상층 액과 동일한 양을 첨가하여 가열하였다(100 C, 10min). 그 후 혼탁액을 실온으로 식히고 원심분리(1,000×g, 10min, 4 C) 하여 상층액을 100μL씩 96 well plate에 넣어 532nm에서 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) plate reader 를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
탈수 및 투명화 과정을 위하여 70, 80, 95, 100% ethanol에 단계적으로 3분씩 담근 후 xylene에 3분씩 3단계를 거친 후 봉입하였다. 사진은 Olympus DP-72 (Olympus)을 이용하여 200배, 400배의 광학 배율에서 촬영하였으며, 400배의 시야의 다섯군데를 검경하여 각 시야 당 100개의 양성세포를 계수하였다.
실험동물 사육실의 온도는 23±1 C, 습도는 50±5%로 유지하였고, 사료(NIH-07) 와 음수는 자유롭게 섭취하도록 하였다. 실험군은 Dulbecco’s phosphate-buffered saline (이하 DPBS)를 투여한 정상 대조군(vehicle, n=3), 알코올 투여 대조군(EtOH only, n=4), 알코올과 SQEA 100㎎/㎏ 병행 투여군(EtOH+SQEA 100 ㎎/㎏, n=4), 알코올과 SQEA 200㎎/㎏ 병행 투여군 (EtOH+SQEA 200㎎/㎏, n=4)으로 나누어 실험하였다. 본연구는 제주대학교 동물실험윤리위원회의 승인을 받았으며 (동물실험 승인번호2016-0053), 모든 실험은 제주대학교 동물실험윤리위원회의 규정에 의거하여 수행하였다.
실험동물을 각 그룹별로 투여를 종료한 후 심장 채혈을 통해 혈액을 채취하여 서울 의과학연구소(Seoul Clinical laboratories, Korea)에 혈청 내 아스파르테이트아미노전달효소(aspartate aminotransferase, AST), 알라닌아미노전달효소 (alanine aminotransferase, ALT), 젖산탈수소효소(lactate dehydrogenase, LDH), 총 콜레스테롤(total cholesterol, TC) 분석을 의뢰하였다.
실험동물을 각 그룹별로 투여를 종료한 후 심장 채혈을 통해 혈액을 채취하였으며 12,000rpm에서 10분간 원심분리하여 혈청을 분리하였다. 혈청의 에탄올 농도는 ethanol assay kit (Megazyme, Bray Co.
알코올 투여 대조군(EtOH only)은 30% 알코올(5g/kg body weight, BW)을 경구 투여하였고, 알코올과 SQEA 병행 투여군(EtOH+SQEA)은 30% 알코올과 SQEA를 100, 200㎎/㎏, BW의 농도로 경구 투여하였으며, 정상 대조군 (vehicle)에는 동량의 DPBS를 경구 투여하였다. 투여 간격은 첫 번째 투여를 기준으로 3번째 투여까지는 12시간 간격으로 실시하였고, 그 이후의 투여는 24시간 간격으로 11일간 경구 투여 하여, 총 14일간 경구 투여하였다.
알코올에 의해 지방간이 유도될 경우 간의 부피와 무게가 증가한다고 알려져 있는데[21], SQEA의 투여가 알코올에 의해 유도된 지방간 억제에 미치는 영향을 알아보기 위해 마우스 체중 당 간의 무게를 측정하였다(Fig. 1A).
이후 3, 3‘-diaminobenxidine (DAB, Vector Laboratories, USA)를 이용하여 발색하였고 양성 반응이 나타난 조직은 hematoxylin 용액으로 대조염색을 하였다. 음성대조군으로는 1차항체 대신 PBS를 사용한 후 동일한 방법으로 염색하였다. 각각의 단계 사이에는 PBS (phosphate buffered saline)와 0.
추출물(SQEA)을 제조하였다. 음지에서 건조된 제주조릿대잎(650g)을 세절한 후, 80% 에탄올을 이용하여 3일 동안교 반하여 잎 성분을 추출하였다. 추출 용액을 여과한 후 용매를 진공농축기로 제거하여 에탄올 추출물 50g (8.
, Taiwan)를 이용하여 마쇄하고 균질액을 원심분리(3, 000×g, 10min, 4 C)하여 단백질을 추출한 후 정량하였다. 정량한 단백에 10% (w/v) trichloroacetic acid (TCA)를 첨가하고 10 분동안 얼음에서 반응시키고 원심분리(2,000×g, 15min,4 C)하여 상층액을 얻은 후 0.67% (w/v) thiobarbituric acid (TBA, 0.67% (w/v) solution in 50mM TBA)를 상층 액과 동일한 양을 첨가하여 가열하였다(100 C, 10min). 그 후 혼탁액을 실온으로 식히고 원심분리(1,000×g, 10min, 4 C) 하여 상층액을 100μL씩 96 well plate에 넣어 532nm에서 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) plate reader 를 이용하여 흡광도를 측정하였다.
예열된 citrate 완충액에 슬라이드를 담근 후 20분간 열처리를 하고 흐르는 물에서 5분간 수세하였다. 조직 내 내인성 peroxidase를 억제하기 위하여 30분간 0.3% 과산화수소 용액에 담가 두었고, 비특이적 면역반응을 방지하기 위하여 blocking goat serum 을 30분간 반응시켰다. 그 후 1차항체로는 perilipin-2 (1:100, Novus Biologicals, USA)와 anti-cytochrome P450 2E1 enzyme (1:500 Millipore, USA)를 이용하였으며, 실온에서 한 시간 동안 반응시킨 후 4 C에서 하룻밤동안 반응시켰다.
3% PBS-T (phosphate buffered salinetriton X-100)로 충분히 세척하였다. 탈수 및 투명화 과정을 위하여 70, 80, 95, 100% ethanol에 단계적으로 3분씩 담근 후 xylene에 3분씩 3단계를 거친 후 봉입하였다. 사진은 Olympus DP-72 (Olympus)을 이용하여 200배, 400배의 광학 배율에서 촬영하였으며, 400배의 시야의 다섯군데를 검경하여 각 시야 당 100개의 양성세포를 계수하였다.
동량의 DPBS를 경구 투여하였다. 투여 간격은 첫 번째 투여를 기준으로 3번째 투여까지는 12시간 간격으로 실시하였고, 그 이후의 투여는 24시간 간격으로 11일간 경구 투여 하여, 총 14일간 경구 투여하였다. 마지막 투여 4 시간 뒤 마우스를 희생시켜 채혈한 후 간조직을 채취하였다.
파라핀 블록을 3μm로 박절한 조직을 슬라이드에 부착한 뒤, 탈파라핀화를 위하여 xylene에 3분간 3단계를 거치고 100, 95, 90, 80, 70% ethanol에 순차적으로 담가 함수 시켰다. 그 후 흐르는 물에서 5분간 수세한 후 Mayer’s hematoxylin과 eosin 용액을 이용하여 염색한 후 흐르는 물에서 3분간 수세하였다.
파라핀 블록을 3μm로 박절한 조직을 슬라이드에 부착한 뒤, 탈파라핀화를 위하여 xylene에 3분간 3단계를 거치고 100, 95, 90, 80, 70% ethanol에 순차적으로 담가 함수 시켰다. 그 후 흐르는 물에서 5분간 수세한 후 Mayer’s hematoxylin과 eosin 용액을 이용하여 염색한 후 흐르는 물에서 3분간 수세하였다.
혈청을 분리하였다. 혈청의 에탄올 농도는 ethanol assay kit (Megazyme, Bray Co., Ireland)를 사용하여 측정하였다.

대상 데이터

실험동물은 8-10주령 암컷과 수컷 C₅₇BL/6 마우스 (OrientBio, Korea)를 대상으로 하였다. 실험동물 사육실의 온도는 23±1 C, 습도는 50±5%로 유지하였고, 사료(NIH-07) 와 음수는 자유롭게 섭취하도록 하였다.

데이터처리

Lipid peroxidation was measured by the amount of MDA. The results were analyzed using a Student’s t-test. The values are reported as the mean ± SE of three individual experiments (* p < 0.
각 실험결과는 평균값±표준편차로 나타내었고, 통게 분석은 일원배치 분산분석법(ANOVA)을 실시하였으며, p< 0.05, p<0.01및 p<0.001의 수준에서 유의성이 있다고 판정하였다.

이론/모형

Herath [20] 등의 방법에 따라 제주조릿대잎 에틸아세테이트 추출물(SQEA)을 제조하였다. 음지에서 건조된 제주조릿대잎(650g)을 세절한 후, 80% 에탄올을 이용하여 3일 동안교 반하여 잎 성분을 추출하였다.

성능/효과

3). CYP2E1 양성세포의 수는 정상 대조군 (vehicle)에서 236, 428±17, 170.4개였으나(Fig. 3A, F, andK), 알코올 투여 대조군(EtOH only)에서는 636, 490± 27, 678.0개로 정상 대조군(vehicle)에 비하여 CYP2E1 양성 세포의 수가 유의적으로 증가하는 것을 확인하였다(Fig. 3B, G, and K, p<0.001). 반면, SQEA 병행 투여군(EtOH+ SQEA, 100, 200㎎/㎏)에서는 CYP2E1 양성세포의 수가 각각 26, 0951±31, 486.
2). H&E 염색 결과, 정상 대조군(vehicle) 보다(Fig. 2E and I), 알코올 투여 대조군(EtOH only) 에서대소포(macrovesicular), 미세소포 지방 방울(microvesicular lipid droplet)의 축적, 림프구의 침윤(lymphocyte infiltration) 이 증가하였으며, 동양혈관의 확장(sinusoidal dilation) 등이 확인되어 간손상이 일어났음을 확인하였다(Fig. 2F and J). SQEA 병행 처리군(EtOH+SQEA) 중 SQEA를 100㎎/㎏ 으로 투여하였을 때, 림프구의 침윤, 동양혈관의 확장은 여전히 존재했지만 지방 방울의 형태가 미세소포의 형태로 존재하였다(Fig.
2G and K). SQEA를 200㎎/㎏으로 투여하였을 때에는 림프구의 침윤, 동양혈관의 확장, 미세소포 크기 등이 감소한 것을 확인할 수 있었다(Fig. 2H and L).
선행 연구 결과와 유사하게 본 연구에서도 마우스에 알코올과 SQEA (100, 200㎎/㎏)를 병행 투여할 경우 알코올에 의한 지질과산화가 감소하는 경향을 보였으며, 특히 알코올에 의해 과발현하였던 CYP2E1가 억제된 것으로 보아 CYP2E1 경유 산화반응으로 인한 간손상을 억제할 것으로 사료된다. 또한 지방간은 알코올에 의해 유발되는 병리적 현상으로 간세포 내 지방 방울이 축적되어 체중 당 간의 무게가 증가하는데, 본 연구에서도 정상 대조군에 비하여 알코올투여 대조군에서 간 무게가 유의적으로 증가하였으며 SQEA (100, 200㎎/㎏)를 경구 투여한 경우 알코올 투여 대조군에 비하여 간 무게가 감소하였고 육안적 검사에서도 간 부피가 감소한 것으로 보아 SQEA (100, 200㎎/㎏)의 경구 투여가 간세포 내 지방 방울의 축적을 억제하여 지방간을 완화시킨 것으로 사료된다. 또한 병리조직학적 검사에서도 알코올 투여 대조군에서 지방증과 동양혈관의 확장, 림프구 침윤 등 알코올에 의한 간손상이 유발된 반면, SQEA (100, 200 ㎎/㎏)를 경구 투여하였을 경우 지방증과 동양혈관의 확장, 림프구 침윤 등이 감소하여 알코올로 인한 간손상을 억제하는 것으로 사료된다.
모든 시험군에서 꾸준히 체중이 증가하였고, 정상 대조군 (vehicle)의 간 무게는 0.0462±0.00155g이였으나 알코올 투여 대조군(EtOH only)에서는 0.0506±0.00009g으로 정상 대조군(vehicle)의 체중 당 간 무게보다 유의적으로 증가하였다(p<0.05). 반면, SQEA 병행 투여군(EtOH+SQEA 100, 200㎎/㎏)에서는 0.
001). 반면, SQEA 병행 투여군(EtOH+ SQEA, 100, 200㎎/㎏)에서는 CYP2E1 양성세포의 수가 각각 26, 0951±31, 486.7개와 169, 777±15, 317.9개로 알코올투여 대조군(EtOH only)에 비하여 유의적으로 감소하는 것을 확인하였으며(Fig. 3C, H, and K, p<0.001), SQEA의농도가 증가할수록 CYP2E1 양성세포의 수가 확연히 감소하는 것을 확인하였다(Fig. 3D, I, and K, p<0.001). 또한 음성 대조군에서CYP2E1가 발현하지 않는 것을 확인하였다 (Fig.
05). 반면, 알코올과 SQEA 병행 투여군(EtOH+SQEA, 100, 200 ㎎/㎏) 에서는 각각 87±6.6IU/L와 93±7.2IU/L로 알코올 투여대조군(EtOH only)보다 유의적으로 감소하였다(Fig. 5E, p<0.05).
Yoo [23] 등과 Kim [24] 등도 각각 민들레 추출물과 구찌뽕 추출물이 알코올로 인한 활성산소 생성을 억제하여 간손상을 완화시켰다. 선행 연구 결과와 유사하게 본 연구에서도 마우스에 알코올과 SQEA (100, 200㎎/㎏)를 병행 투여할 경우 알코올에 의한 지질과산화가 감소하는 경향을 보였으며, 특히 알코올에 의해 과발현하였던 CYP2E1가 억제된 것으로 보아 CYP2E1 경유 산화반응으로 인한 간손상을 억제할 것으로 사료된다. 또한 지방간은 알코올에 의해 유발되는 병리적 현상으로 간세포 내 지방 방울이 축적되어 체중 당 간의 무게가 증가하는데, 본 연구에서도 정상 대조군에 비하여 알코올투여 대조군에서 간 무게가 유의적으로 증가하였으며 SQEA (100, 200㎎/㎏)를 경구 투여한 경우 알코올 투여 대조군에 비하여 간 무게가 감소하였고 육안적 검사에서도 간 부피가 감소한 것으로 보아 SQEA (100, 200㎎/㎏)의 경구 투여가 간세포 내 지방 방울의 축적을 억제하여 지방간을 완화시킨 것으로 사료된다.
이상의 실험결과를 통하여, SQEA를 투여하였을 때 CYP2E1의 과발현이 억제되는 것을 확인할 수 있었다.
이상의 실험결과를 통하여, SQEA의 병행 투여가 간세포 내 지방 방울의 표면을 둘러싸고 있는 단백질인 perilipin-2 의 발현을 감소시키는 것을 확인하였다.
이상의 실험결과를 통하여, SQEA의 병행 투여가 혈청 내 ethanol content에는 유의적인 효과를 보인 것은 확인하였으나, 다른 간 기능 지표효소에서는 유의미한 결과를 얻지 못하였다.
이상의 실험결과를 통하여, SQEA의 투여는 알코올로 인한 지질과산화물의 생성을 다소 감소시키는 경향을 나타내었지만, 유의성이 없는 것을 확인하였다.
이상의 실험결과를 통하여, SQEA의 투여로 알코올에 의한 지방간 유도와 간세포의 손상이 완화되는 것을 조직상에서 확인할 수 있었다.
이상의 실험결과를 통하여, 알코올에 의해 지방간이 유도되어 간 무게가 증가하는 것을 확인하였고, SQEA를 병행 투여하였을 때, 간 무게가 감소하는 것으로 보아 SQEA의투여가 알코올에 의한 지방간 유도를 억제한 것을 확인할 수 있었다

후속연구

따라서 본 연구에 의한 SQEA가 알코올로 인한 활성산소종 생성을 억제함에 따라 산화적 스트레스를 감소시켜 간세포를 보호하고 지질 대사를 개선시킬 수 있다는 결과를 바탕으로, 만성 알코올성 간질환을 개선시킬 수 있는 물질로서 SQEA의 기능성 소재로서 활용 가능성을 시사하였다.
Kang [14] 등에 따르면, 제주조릿대에는 폴리사카라이드(polysaccharides), 아미노산(amino acid), 폴리페놀(polyphenols) 등과 지질대사 개선에 효과가 있다고 알려진 p-쿠마린산이 풍부하게 함유되어 있다고 보고하였으며, HepG2 세포에서 제주조릿대 추출물이 AMP-activated protein kinase (AMPK)의 인산화를 증가시켜 SREBP-1 및 지방산합성 효소(fatty acid synthase, FAS), 트리글리세리드 (triglyceride) 합성을 억제하여 올레산(oleic acid)으로 유도된 지질축적(lipid accumulation)을 감소시켰으며, 이는 p-쿠마린산을 처리한 비교군과 비슷한 수준을 보여 제주조릿대에 포함된 p-쿠마린산에 의해 지질축적이 감소된 것으로 보고하였다[19]. 본 연구에서도 알코올 투여 대조군에서 지방 간증의 지표로 알려진 지방 방울 단백질인 perilipin-2의 발현이 확연히 증가하는 것을 확인하였으며 SQEA (100, 200 ㎎/㎏) 를 경구 투여하였을 때 perilipin-2의 발현이 유의적으로 감소하는 결과는 이전 보고들과 일치하며[11], 이와 관련한 기전을 확인하기 위해서는 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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