[논문]구아바 잎 추출물의 항산화 활성 및 항균력 분석

이정선; 이민혁; 이재남

doi:10.12925/jkocs.2020.37.1.56

구아바 잎 추출물의 항산화 활성 및 항균력 분석
Antioxidant and Antimicrobial Activities of Psidium guajava leaf extract 원문보기

Journal of the Korean Applied Science and Technology = 한국응용과학기술학회지, v.37 no.1, 2020년, pp.56 - 65

이정선 (을지대학교 평생교육원, 미용학전공) , 이민혁 (건국대학교 일반대학원 생물공학과) , 이재남 (건국대학교 산업대학원 향장학과)

초록
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본 연구는 ABTS radical 소거 활성을 통한 항산화 활성, RAW 264.7 대식 세포에서의 세포 독성, DCF-DA assay을 통한 세포 내 ROS 생성 억제 효과, 항균력을 측정하여 구아바 잎 추출물이 화장품 소재로써의 활용 가능성을 검토하고자 하였다. 실험 결과, 구아바 잎 추출물의 우수한 ABTS radical 소거능을 확인하였다. RAW 264.7 대식세포에서의 세포 독성은 나타나지 않았으며 세포 내에서 ROS 생성량은 농도 의존적으로 감소하는 억제효과를 확인하였다. 또한 구아바 잎 추출물의 항균력 분석에서는 피부상재균인 S. aureus, E. coli, C. albicans, P. acnes 균주들에서 항균 활성이 확인되었으며, 각 균주에 대한 최소 저해 농도(MIC)는 대체로 0.25 - 1 mg/mL의 수준으로서 P. acnes ≃ S. aureus < E. coli < C. albican 순의 낮은 농도로 측정되었다. 이와 같은 결과를 통해 구아바 잎 추출물의 항산화 활성과 세포 내 ROS 생성 억제 효과, 피부에 염증을 유발하는 피부상재균에 대한 항균력이 확인됨에 따라 독성이나 부작용이 없는 기능성 화장품 소재로써의 활용이 가능할 것으로 사료된다.

Abstract ▼ AI-Helper

This study attempted to review the possibility of Psidium guajava leaf extract as a cosmetics ingredient by measuring antioxidant activity through ABTS radical scavenging activity, cytotoxicity in RAW 264.7 macrophages, ROS generation-inhibiting effects through DCF-DA assay and antimicrobial activity, and the results found the followings: The Psidium guajava leaf extract revealed excellent ABTS radical scavenging activity. In RAW 264.7 macrophages, no cytotoxicity was found. The ROS generation in the cells was reduced in a dose-dependent manner. The antimicrobial activities were observed in the following strains: S. aureus, E. coli, C. albicans and P. acnes. In terms of minimum inhibitory concentration (MIC) on each strain, which ranged from 0.25 to 1 mg/mL, C. albican was the lowest, followed by E. coli, S. aureus and P. acnes. The above results confirmed the effects of Psidium guajava leaf extract: antioxidant activity, inhibition of ROS generation in the cells, antimicrobial effects on skin flora which causes inflammation. Therefore, it appears that the extract would be available as a cosmetics ingredient which is free of toxins and side effects.

주제어

표/그림 (6)

표 Table 1. Culture Conditions of the Strain Used in the Experiment
그림 Fig. 1. ABTS Radical Scavenging Activity of Psidium guajava leaf extract.
그림 Fig. 2. Cytotoxicity in RAW 264.7 cells. The cytotoxicity of Psidium guajava leaf extract was measured in RAW 264.7 cells.
그림 Fig. 3. The Reactive Oxidant Species (ROS) Generation-inhibiting Effects of Psidium guajava leaf extract in RAW 264.7 Macrophages cells.
그림 Fig. 4. Antimicrobial activity of the extract of Psidium guajava leaf on Staphylococcus aureus.
표 Table 2. Psidium guajava leaf of extract minimum inhibitory concectration (MIC)

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 본 연구에서는 구아바 잎 추출물의 ABTS radical 소거활성을 통한 항산화 활성을 확인하고, RAW 264.7 대식세포에 대한 세포 독성, 세포 내 ROS 생성 억제 효과, 피부 상재균의 항균활성과 최소저해 농도(MIC) 등을 측정하고자 하였으며, 이를 바탕으로 인체에 무해하고 효과적인 기능성 화장품 소재로써의 활용 가능성을 검토하고자 하였다.
본 연구에서는 구아바 잎 추출물을 70% 에탄올로 추출하여 ABTS radical 소거 활성을 통한 항산화 활성을 확인하고, RAW 264.7 대식 세포 에서의 세포 독성과 DCF-DA assay을 통한 세포 내 ROS 생성 억제 효과, Paper disc assay을 통한 피부상재균의 항균력을 측정하여 구아바 잎 추출물이 화장품 소재로써의 활용 가능성을 검토 하고자 하였다.

제안 방법

최소 저해 농도(MIC, minimum inhibitiry concentration)의 측정은 broth micro dilution method[23]를 변형하여 측정하였다. 1일간 배양된 세균 배양액을 650 nm에서 흡광도 0.3으로 희석하여 96 well plate에 각각의 시험균 배양액을 100 μL씩 분주하고, 구아바 잎 추출물을 0.25, 0.5, 1, 2.5, 5 mg/mL의 농도로 100 μL씩 처리한 후 1일간 추가 배양하였다. 구아바 잎 추출물이 세균의 증식에 미치는 영향을 microplate reader (Synergy HT; BioTek Instruments, USA) 를 통해 650 nm에서 흡광도를 측정하여 분석하 였다.
DCF-DA (2,7-dichlorofluorescein diacetate) 방법을 이용하여 세포 내 ROS 생성량 측정은 Eruslanov et al.[21]의 방법을 변형하여 측정하였다. RAW 264.
구아바 잎 추출물의 세포 독성을 확인하기 위하여 RAW 264.7 대식세포에 10, 25, 50, 100 μg/mL의 농도를 처리하여 세포 독성을 확인하였으며 Fig. 2에 나타내었다.
본 실험은 TEAC assay를 이용하여 ABTS radical 소거활성을 통한 항산화 활성 측정을 위하여 Re et al.[20]의 방법을 변형하여 측정하였다. TEAC assay는 DPPH assay처럼 ET (electron transfer)기반의 검정방법이다.
최소 저해 농도(MIC, minimum inhibitiry concentration)의 측정은 broth micro dilution method[23]를 변형하여 측정하였다. 1일간 배양된 세균 배양액을 650 nm에서 흡광도 0.

대상 데이터

본 실험에 사용한 균주와 배지는 아래의 Table 1에 나타내었다. Staphylococcus aureus ATCC 6538P는 미국 미생물 보존센터에서, Escherichia coli KCTC 1682 Candida albicans KCTC 7270 및 Propionibacterium acnes KCTC 3320은 한국 생명공학 연구원 생명 자원 센터에서 분양받아 사용하였다.
본 실험에 사용한 구아바 잎은 약초명가에서 국내산으로 구입하여 믹서(FM-909W, 한일, Korea)를 이용하여 갈아준 다음, 70% ethanol에 1:10 (w/w)으로 3일간 37℃ incubator에서 추출 하였다. 추출물의 침전물을 원심분리(3000 rpm, 5 min)로 가라앉힌 후 상층액을 여과지(Whatman filterpaper No.
본 실험에 사용한 세포는 단핵세포주인 RAW 264.7 대식세포를 사용하였으며, 한국세포주은행 (Korean Cell Line Bank, Korea)에서 분양하여 사용하였다. 세포배양은 10% fetal bovine serum (FBS; Sigma-Aldrich, USA)과 1% penicillin (100 IU/mL, GE Healthcare life sciences, USA), 1% streptomycin (50 μg/mL, GE Healthcare life sciences)를 High glucose Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM;Sigma-Aldrich, USA) 배지에 첨가하여 37℃, 5%의 CO₂인큐베이터 안에서 배양하였으며, 세포 주기는 3∼4 일을 유지하며 계대배양 하였다.

데이터처리

본 실험은 모두 동일한 조건에서 독립적으로 3 회 이상 측정한 후 실험 결과를 얻어 사용하였으며, 평균 ± 표준편차(Mean ± SD)로 표기하였다. 통계 처리는 SPSS Window Version 17.
본 실험은 모두 동일한 조건에서 독립적으로 3 회 이상 측정한 후 실험 결과를 얻어 사용하였으며, 평균 ± 표준편차(Mean ± SD)로 표기하였다. 통계 처리는 SPSS Window Version 17.0 (SPSS Inc., Illinois, USA)을 이용하여 분석하였고, 유의성 검증은 Student t-test로 실시하였다. 실험 결과 p값이 0.

성능/효과

P. acnes 균의 항균 활성은 농도별 각각의 clear zone 직경이 10, 11, 13, 14 mm로 나타났다. 구아바 잎 추출물의 피부 상재 균에 대한 최소 저해 농도(MIC)는 대체로 0.
7 세포에서의 세포 생존율을 통한 세포 독성을 확인한 결과 추출물의 농도가 증가 할수록 세포 증식의 효과가 확인되었으며 세포 독성이 나타나지 않았다. 구아바 잎 추출물의 세포 내 ROS를 억제하는 효과를 측정한 결과 RAW 264.7 세포주에서 ROS 생성량은 농도 의존적으로 감소하였으며, 특히 50 μg/mL 농도에 서부터 ROS의 생성량이 유의미하게 억제되었다 (p<.01). 또한 구아바 잎 추출물의 항균효과를 각 0.
본 실험 결과, 구아바 잎 추출물의 우수한 ABTS radical 소거능을 확인하였으며, trolox를 positive control로 비교하였을 때는 trolox와 유사한 radical 소거 활성을 확인하였다. 대식세포인 RAW 264.7 세포에서의 세포 생존율을 통한 세포 독성을 확인한 결과 추출물의 농도가 증가 할수록 세포 증식의 효과가 확인되었으며 세포 독성이 나타나지 않았다. 구아바 잎 추출물의 세포 내 ROS를 억제하는 효과를 측정한 결과 RAW 264.
[26]의 연구에서는 MAPK가 활성화 되면 세포의 활성과 분화를 증가시키게 되는데, 염증에 의한 암 발생에 관여하기도 한다고 보고하였다. 따라서 구아바 잎 추출물이 피부 염증 질환을 유발하는 ROS를 억제함으로서 노화예방 등의 화장품 소재로써의 가능성을 보여준다.
본 실험 결과, 구아바 잎 추출물의 우수한 ABTS radical 소거능을 확인하였으며, trolox를 positive control로 비교하였을 때는 trolox와 유사한 radical 소거 활성을 확인하였다. 대식세포인 RAW 264.
2에 나타내었다. 실험 결과, RAW 264.7 대식세포에 구아바 잎 추출물을 처리한 모든 농도에서 세포 독성이 나타나지 않았고, 무처리군인 control 생존율 100%와 비교하면 각각의 10, 25, 50, 100 μg/mL의 농도에서 생존율이 98.12%, 98.05%, 96.87, 95.94%로의 세포 생존율을 보였다. 이와 같은 결과를 통하여 구아바 잎 추출물의 세포 독성은 나타나지 않은 것으로 확인되었으며, 추후 최고 농도 100 μg/mL으로 희석하여 다음 실험을 진행하였다.
1에 나타내었다. 실험 결과, 구아바 잎 추출물을 0.1, 0.25, 0.5, 1 mg/mL 농도로 처리하였을 때 ABTS radical 소거능은 각각 64.2%, 76.3%, 92.1%, 94.8%로 확인되었다. 또한 trolox를 positive control로 이용 하여 구아바 잎 추출물과 항산화 활성을 비교한 결과는 1 mg/mL 농도에서 trolox는 97.
coli에도 gram positive bacteria에 대한 항균활성 만큼 낮은 농도에서 강한 활성을 보이지 않았지만 충분히 낮은 농도에서도 효과적으로 생육을 저해하였다. 이는 구아바 잎 추출물의 플라보노이드 성분이 gram positive bacteria 에 대해 높은 항균활성을 가지고 있어 화장품의 천연 방부제로써의 가치를 확인할 수 있었다.
피부에 염증을 유발하는 피부 상재균 S.aureus 대한 구아바 잎 추출물의 항균 활성을 확인하기 위해 paper disc assay[22]를 변형하여 측정한 결과, S. aureus에 대한 구아바 잎 추출물의 항균 활성은 0.05, 0.1, 0.25, 0.5 g/mL의 농도에서 각각의 clear zone 직경이 9, 10, 11, 13 mm로 나타났다(Fig. 4).
피부에 염증을 유발하는 피부 상재균인 C.albicans에 대한 구아바 잎 추출물의 항균활성을 확인하기 위해 paper disc assay[22]를 변형하여 측정한 결과, C. albicans에 대한 구아바 잎 추출물의 항균 활성은 0.5 g/mL의 농도에서부터 clear zone 직경이 10 mm로 나타나기 시작했다 (Fig. 4).
피부에 염증을 유발하는 피부 상재균인 E. coli 에 대한 구아바 잎 추출물의 항균 활성을 확인하기 위해 paper disc assay[22]를 변형하여 측정한 결과, E. coli에 대한 구아바 잎 추출물의 항균 활성은 0.05, 0.1, 0.25, 0.5 g/mL의 농도에서 각각의 clear zone 직경이 9, 9, 10, 12 mm로 나타났다(Fig. 4).
피부에 염증을 유발하는 피부 상재균인 P.acnes에 대한 구아바 잎 추출물의 항균 활성을 측정하기 paper disc assay[22]를 변형하여 측정한 결과, 구아바 잎 추출물의 항균 활성은 0.05, 0.1, 0.25, 0.5 g/mL의 농도에서 각각의 clear zone 직경이 10, 11, 13, 14 mm로 나타났다 (Fig. 4).

후속연구

이러한 과정에서 세포는 산화적 스트레스를 받아 DNA손상 및 사멸에 의해 암, 당뇨병, 파킨슨병, 심혈관계 질환 및 염증반응 등 여러 질병과 노화를 일으키게 되며[4] 산화적 스트레스가 지속되면 항산화 방어망이 파괴 된다. 따라서 생체 내 뿐 아니라, 피부에서의 ROS 생성을 억제하거나 생성된 ROS를 적극적으로 제거할 수 있는 항산화 방어망 구축을 위한 천연 항산화제 연구가 필요하다[5].
이와 같은 결과를 종합해 볼 때, 구아바 잎 추출물의 ABTS radical 소거활성을 통한 항산화 활성과 세포 내 ROS 생성 억제 효과, 피부에 염증을 유발하는 피부상재균에 대한 항균효과 및 낮은 농도의 최소저해 농도(MIC)가 확인됨에 따라 독성이나 부작용이 없는 기능성 화장품 소재로써의 활용이 가능할 것으로 사료된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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