[논문]마이크로웨이브 에너지를 이용한 레몬그라스로부터 플라보노이드 성분의 추출: CCD-RSM을 이용한 최적화

유봉호; 장현식; 이승범

doi:10.14478/ace.2021.1005

마이크로웨이브 에너지를 이용한 레몬그라스로부터 플라보노이드 성분의 추출: CCD-RSM을 이용한 최적화
Extraction of Total Flavonoids from Lemongrass Using Microwave Energy: Optimization Using CCD-RSM 원문보기

공업화학 = Applied chemistry for engineering, v.32 no.2, 2021년, pp.168 - 173

유봉호 (단국대학교 공과대학) , 장현식 (단국대학교 화학공학과) , 이승범 (단국대학교 화학공학과)

초록
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본 연구에서는 마이크로웨이브 에너지를 이용하여 항산화성분을 다량 함유하고 있는 레몬그라스로부터 플라보노이드 성분을 추출하였다. 또한 반응표면분석법 중 중심합성계획모델을 이용하여 추출공정을 최적화하였다. 추출공정의 독립변수로는 주정/초순수의 부피비, 마이크로웨이브 조사시간, 마이크로웨이브 조사세기를 설정하였고, 반응치는 추출수율과 플라보노이드 함량을 확인하였다. CCD-RSM 분석 결과 최적조건인 주정/초순수 부피비(56.3 vol.%), 마이크로웨이브 조사시간(6.1 min), 마이크로웨이브 조사세기(574.6 W)에서 추출수율(17.2%)와 플라보노이드 함량(44.7 ㎍ QE/mL dw)의 결과를 얻는 것으로 나타났다. 이때 종합만족도는 D = 0.8562이고, P-value는 추출수율(0.037)과 플라보노이드 함량(0.002)으로 나타났다. 이 조건에서의 실제실험 결과 오차율은 5.0% 이하로 나타나 높은 유의수준의 결과를 얻을 수 있었다.

Abstract ▼ AI-Helper

In this study, we measured total flavonoids after extracting the total flavonoids from lemongrass which is known to have a high content of antioxidant ingredients when using microwave energy. Also, optimal extraction conditions of active ingredients using central composite design-response surface methodology (CCD-RSM) were presented. Both ultrapure water and alcohol were used as extraction solvents and the volume ratio of ethanol/ultrapure water, microwave irradiation time, and microwave irradiation power were set as independence variables. And the extraction yield and total flavonoids were measured. The optimal extraction conditions using CCD-RSM were the volume ratio of ethanol/ultrapure water = 56.3 vol.%, the microwave irradiation time = 6.1 min, and the microwave irradiation power = 574.6 W. We could also obtain expected results of yield = 17.2 wt.% and total flavonoids = 44.7 ㎍ QE/mL dw under the optimum conditions. The comprehensive satisfaction degree of this formula was 0.8562. The P-value was calculated for the yield of 0.037 and the total flavonoids content of 0.002. The average error from actual experiments established for the verification of conclusions was lower than 2.5%. Therefore, a high favorable level could be obtained when the CCD-RSM was applied to the optimization of extraction process.

주제어

표/그림 (5)

그림 Figure 1. Variation of temperature with microwave irradiation time and ethanol/water volume ratio.
표 Table 1. Experimental Data on Yield and Total Flavonoids of Lemongrass based on Central Composite Design by Response Surface Method in MASE
그림 Figure 2. Response surface for yield of lemongrass extract at constant values as a function of time, ethanol concentration and power in MASE.
그림 Figure 3. Response surface for total flavonoids of lemongrass extract at constant values as a function of time, ethanol concentration and power in MASE.
그림 Figure 4. Optimization graph of response surface for yield and total flavonoids of lemongrass.

AI 본문요약
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문제 정의

또한 레몬그라스는 해열작용, 진통작용에 탁월하며 최근 항산화 작용에 특히 두각을 나타나는 것으로 보고되었다[10, 11]. 따라서 본 연구에서는 lemongrass를 원료로 microwave assisted solvent extraction (MASE) 실험을 진행하여 최적 추출조건을 알아보고자 하였다. 마이크로웨이브 에너지를 이용하여 플라보노이드를 추출하기 위한 기초실험을 진행한 후 중심합성계획모델-반응표면분석법 (central composite design-response surface methodology, CCD-RSM) 을 적용하여 최적추출조건을 결정하였다[12].
본 연구에서는 마이크로웨이브 에너지를 이용하여 항산화능 및 플라보노이드 성분이 포함된 레몬그라스로부터 플라보노이드 성분을 추출하기 위한 최적추출조건을 CCD-RSM으로 산출한 결과 다음과 같은 결론을 얻을 수 있었다.
등고선도로 나타내었다. 최종적으로 인자에 따른 요인에 대한 최적화를 하고자 한다. 추출수율과 플라보노이드 함량 모두 최대 값을 가질 수 있는 세 가지 인자에 대한 최적 조건 그래프를 Figure 4에 나타내었다.

제안 방법

1. 추출에 사용된 추출용매는 초순수와 95%-주정을 이용하여 최적추출조건의 범위를 알아보았고, 추출된 플라보노이드 성분의 추출 수율을 측정하고, 플라보노이드 함량분석을 수행하였다. 추출수율에 영향을 끼치는 주효과도와 교호효과도를 같이 고려하였을 때, 추출 수율의 경우 마이크로웨이브 조사시간이 플라보노이드 함량의 경우에는 주정/초순수 부피비가 가장 큰 영향을 미치는 것을 알 수 있었다.
추출용매로는 초순수(ultrapure water)와 95%-주정(대한주정라이프, 95%)을 이용하였으며, 추출공정의 최적화 과정에서 반응표면분석법의 독립변수로는 주정/초순수 부피비, 마이크로웨이브조사 시간, 마이크로웨이브 조사세기 등을 설정하였다. 기초실험으로부터 각 독립변수의 최적 추출 범위를 결정한 후 CCD-RSM을 이용하여 최적화 과정을 수행하였다. 이때 반응치(response)로는 추출된 플라보노이드 성분의 추출수율과 플라보노이드 함량(total flavonoids)을선정하였다.
0 W)이다. 독립변수에 영향을 받는 반응치(response)는 추출 수율과 플라보노이드 함량을 측정하여 그 값을 회귀분석에 사용하였다. 마이크로웨이브 에너지를 이용한 추출공정에서 최적의 조건을 찾기 위해 CCD-RSM에 따라 설계된 20개의 조건에 대하여 각 실험을 진행하였다.
레몬그라스로부터 추출된 플라보노이드 성분은 여과과정 거친 후 진공증류를 통해 농축하여 -10 ℃ 로 6 h 동안 1차 동결한다. 동결된 시료는 냉동건조장치(LP3, Jouan) 에서 0.1 mbar, -40 ℃의 조건으로 24 h 건조한 후 추출수율을 측정하였다.
0 W로 일정하게 조사시키면서 주정/초순수의 부피비에 따른 추출용매의 온도변화를 실험한 결과 주정이 비율이 감소할수록 혼합용매의 끓는점인 87~97 ℃까지 상승하는 것을 알 수 있었다. 따라서 본 연구에서는 마이크로웨이브 조사시간 범위를 4.0~10.0 min으로 설정한 후 실험을 진행하였다.
레몬그라스로부터 추출된 플라보노이드 성분의 함량 분석은 자외선 분광광도계를 이용하여 측정하였다. 플라보노이드의 검정곡선을 작성하기 위해 표준물질로 quercetin (Sigma-Aldrich, Q4951)을 이용하였으며, 자외선 파장은 415 nm에서 측정하였다[9].
마이크로웨이브 에너지를 이용하여 레몬그라스로부터 플라보노이드 성분을 추출하기 위한 독립변수를 결정하기 위해 기초실험을 진행하였다. 본 연구에서는 추출용매의 극성을 조절하기 위해 주정/초순수 부피 비, 그리고 추출에너지를 공급하기 위해 마이크로웨이브 조사 시간과 조사세기 등을 독립변수로 설정하였다.
독립변수에 영향을 받는 반응치(response)는 추출 수율과 플라보노이드 함량을 측정하여 그 값을 회귀분석에 사용하였다. 마이크로웨이브 에너지를 이용한 추출공정에서 최적의 조건을 찾기 위해 CCD-RSM에 따라 설계된 20개의 조건에 대하여 각 실험을 진행하였다. 추출수율, 플라보노이드 함량에 대하여 측정하여 정리된 결과는 Table 1와 같다.
본 연구에서 사용된 최적화 도구인 CCD-RSM는 통계학적인 특성과 수학적 기술을 결합하여 여러 조건에 따른 최적화된 공정을 제시한다. [15].
본 연구에서는 추출용매의 극성을 조절하기 위해 주정/초순수 부피 비, 그리고 추출에너지를 공급하기 위해 마이크로웨이브 조사 시간과 조사세기 등을 독립변수로 설정하였다. 마이크로웨이브 조사 시간 변수범위를 결정하기 위해 마이크로웨이브 조사세기와 주정/초순수 부피비에 추출용매의 온도변화를 Figure 1에 나타내었다.
앞서 세 가지 인자(마이크로웨이브 조사시간, 주정/초순수 부피비, 마이크로웨이브 조사세기)에 따른 두 가지 요인(추출수율, 플라보노이드 함량)에 대한 회귀식을 각각 얻었으며, 그에 따른 표면도를 3차원 그래프와 등고선도로 나타내었다. 최종적으로 인자에 따른 요인에 대한 최적화를 하고자 한다.
기초실험으로부터 각 독립변수의 최적 추출 범위를 결정한 후 CCD-RSM을 이용하여 최적화 과정을 수행하였다. 이때 반응치(response)로는 추출된 플라보노이드 성분의 추출수율과 플라보노이드 함량(total flavonoids)을선정하였다. 추출된 플라보노이드 성분의 수율은 냉동건조법(freeze drying method)을 이용하여 측정하였다.
1 mL를 혼합한 후 메탄올을 이용하여 총부피를 5 mL로 제조하였다. 제조된 시료는 암실에서 40 min간 방치한 후 자외선 분광광도계를 이용하여 정량하였다. 측정된 흡광도는 검정곡선을 이용하여 quercetin equivalents (µg QE/mL dw)로 환산하였다[13, 14].
마이크로웨이브 에너지를 이용하여 플라보노이드를 추출하기 위한 기초실험을 진행한 후 중심합성계획모델-반응표면분석법 (central composite design-response surface methodology, CCD-RSM) 을 적용하여 최적추출조건을 결정하였다[12]. 추출에 사용된 추출 용매로는 초순수와 95%-주정이고, 주정/초순수 부피비, 마이크로웨이브 조사 시간, 마이크로웨이브 조사세기 등을 변수로 설정하였다.
5 g의 시료를 이용하여 추출공정을 수행하였다. 추출용매로는 초순수(ultrapure water)와 95%-주정(대한주정라이프, 95%)을 이용하였으며, 추출공정의 최적화 과정에서 반응표면분석법의 독립변수로는 주정/초순수 부피비, 마이크로웨이브조사 시간, 마이크로웨이브 조사세기 등을 설정하였다. 기초실험으로부터 각 독립변수의 최적 추출 범위를 결정한 후 CCD-RSM을 이용하여 최적화 과정을 수행하였다.

대상 데이터

실험에 사용된 레몬그라스는 푸드믹서로 분쇄하여 건조한 후 추출 용매 250 mL를 기준으로 준비된 12.5 g의 시료를 이용하여 추출공정을 수행하였다. 추출용매로는 초순수(ultrapure water)와 95%-주정(대한주정라이프, 95%)을 이용하였으며, 추출공정의 최적화 과정에서 반응표면분석법의 독립변수로는 주정/초순수 부피비, 마이크로웨이브조사 시간, 마이크로웨이브 조사세기 등을 설정하였다.
분광광도계를 이용하여 측정하였다. 플라보노이드의 검정곡선을 작성하기 위해 표준물질로 quercetin (Sigma-Aldrich, Q4951)을 이용하였으며, 자외선 파장은 415 nm에서 측정하였다[9]. 냉동 건조한 시료 1 mg/mL에 10% aluminum nitrate 0.

이론/모형

따라서 본 연구에서는 lemongrass를 원료로 microwave assisted solvent extraction (MASE) 실험을 진행하여 최적 추출조건을 알아보고자 하였다. 마이크로웨이브 에너지를 이용하여 플라보노이드를 추출하기 위한 기초실험을 진행한 후 중심합성계획모델-반응표면분석법 (central composite design-response surface methodology, CCD-RSM) 을 적용하여 최적추출조건을 결정하였다[12]. 추출에 사용된 추출 용매로는 초순수와 95%-주정이고, 주정/초순수 부피비, 마이크로웨이브 조사 시간, 마이크로웨이브 조사세기 등을 변수로 설정하였다.
이때 반응치(response)로는 추출된 플라보노이드 성분의 추출수율과 플라보노이드 함량(total flavonoids)을선정하였다. 추출된 플라보노이드 성분의 수율은 냉동건조법(freeze drying method)을 이용하여 측정하였다. 레몬그라스로부터 추출된 플라보노이드 성분은 여과과정 거친 후 진공증류를 통해 농축하여 -10 ℃ 로 6 h 동안 1차 동결한다.

성능/효과

0 vol.% 증가할 때 24.13% 증가하고, 마이크로웨이브 조사세기가 10.0 W 증가할 때 플라보노이드 함량이 18.19% 증가하는 것을 의미한다. 또한 교호효과도인 (마이크로웨이브 조사시간 × 주정/초순수 부피비) : (마이크로웨이브 조사시간 × 마이크로웨이브조사세기) : (주정/초순수 부피비 × 마이크로웨이브 조사세기)의 비율은 -10.
주정/초순수의 부피비 80 vol.%의 조건에서 마이크로웨이브 조사세기가 증가함에 따라 추출용매의 온도는 증가하였으며, 마이크로웨이브 조사 세기에 관계없이 2.0~4.0 min에서 추출용매의 끓는점인 87 ℃에 도달하는 것을 알 수 있었다. 또한 마이크로웨이브 조사세기를 700.
2. CCD-RSM 분석 결과 최적조건인 주정/초순수 부피비(56.3 vol.%), 마이크로웨이브 조사시간(6.1 min), 마이크로웨이브 조사세기(574.6 W)에서 추출수율(17.2%)와 플라보노이드 함량(44.7 µg QE/mL dw) 의결과를 얻는 것으로 나타났다. 이때 종합만족도는 D = 0.
7 µg QE/mL dw으로 나타났다. CCD-RSM 분석 결과 본 연구에서의 종합만족도 D = 0.8562이고 그 유의성은 5% 이내에 수준에서 나타났다.
0 min에서 추출용매의 끓는점인 87 ℃에 도달하는 것을 알 수 있었다. 또한 마이크로웨이브 조사세기를 700.0 W로 일정하게 조사시키면서 주정/초순수의 부피비에 따른 추출용매의 온도변화를 실험한 결과 주정이 비율이 감소할수록 혼합용매의 끓는점인 87~97 ℃까지 상승하는 것을 알 수 있었다. 따라서 본 연구에서는 마이크로웨이브 조사시간 범위를 4.
마이크로웨이브 조사시간과 주정/초순수 부피비의 추출수율에 대한 영향 역시 두 인자 모두 중간 값을 가질 때 최대의 추출수율을 갖는 것으로 나타났다. 마이크로웨이브 조사세기를 고정한 경우, 마이크로웨이브 조사시간과 주정/초순수의 부피비가 증가할수록 추출 수율도 증가하였다.
주정/초순수의 부피비를 고정한 경우, 마이크로웨이브 조사시간에는 증가하였다가 감소하였으며 주정/초순수 부피비에는 마찬가지로 증가하였다가 감소하는 경향을 나타내었다. 마이크로웨이브 조사시간과 주정/초순수 부피비의 추출수율에 대한 영향 역시 두 인자 모두 중간 값을 가질 때 최대의 추출수율을 갖는 것으로 나타났다. 마이크로웨이브 조사세기를 고정한 경우, 마이크로웨이브 조사시간과 주정/초순수의 부피비가 증가할수록 추출 수율도 증가하였다.
반응표면법을 이용하여 얻은 회귀식을 이용하여 플라보노이드 함량에 따른 인자에 대한 영향을 3차원 그래프와 등고선 도를 통하여 Figure 3에 나타내었다. 마이크로웨이브 조사시간을 고정한 경우, 주정/초순수의 부피비에는 증가하였으며 마이크로웨이브 조사 세기에는 증가하다가 소폭 감소하는 경향을 보였다. 주정/초순수 부피 비를 고정한 경우에는 시간에 대해서는 계속해서 증가하였으며 반대로 마이크로웨이브 조사세기에는 반비례하는 경향을 보였다.
이러한 회귀방정식을 통해 변수의 주효과도, 교호효과도, 적합성 결여 등을 판단할 수 있다. 본 연구의 주효과도인 마이크로웨이브 조사시간, 주정/초순수의 부피비, 마이크로웨이브 조사세기가 반응치에 영향을 끼치는 정도를 수치화하면 마이크로웨이브 조사시간 : 주정/초순수의 부피비 : 마이크로웨이브 조사세기 = 43.62 : -10.43 : 1.0의 비율로 나타난다. 이는 마이크로웨이브 조사시간이 0.
CCD-RSM을 이용하여 얻은 회귀식을 이용하여 추출수율에 따른 인자에 대한 영향을 3차원 그래프와 등고선도를 통하여 Figure 2에 나타내었다. 시간을 일정한 값으로 고정한 경우, 일정한 마이크로웨이브 조사세기에 대해 주정/초순수의 부피가 증가할수록 추출수율은 감소하였다. 주정/에탄올의 부피 비와 마이크로웨이브 조사세기 모두 범위내의 중간값을 가질 때 추출 수율도 높은 것으로 나타났다.
002)으로 나타났다. 이 조건에서의 실제실험 결과 오차율은 5.0% 이하로 나타나 높은 유의수준의 결과를 얻을 수 있었다
주정/에탄올의 부피 비와 마이크로웨이브 조사세기 모두 범위내의 중간값을 가질 때 추출 수율도 높은 것으로 나타났다. 주정/초순수의 부피비를 고정한 경우, 마이크로웨이브 조사시간에는 증가하였다가 감소하였으며 주정/초순수 부피비에는 마찬가지로 증가하였다가 감소하는 경향을 나타내었다. 마이크로웨이브 조사시간과 주정/초순수 부피비의 추출수율에 대한 영향 역시 두 인자 모두 중간 값을 가질 때 최대의 추출수율을 갖는 것으로 나타났다.
0로 나타났다. 추출수율에 영향을 끼치는 주효과도와 교호 효과 도를 같이 고려하였을 때, 마이크로웨이브 조사시간이 추출 수율에 가장 큰 영향을 미치는 것을 알 수 있었다. CCD-RSM을 이용하여 얻은 회귀식을 이용하여 추출수율에 따른 인자에 대한 영향을 3차원 그래프와 등고선도를 통하여 Figure 2에 나타내었다.
추출에 사용된 추출용매는 초순수와 95%-주정을 이용하여 최적추출조건의 범위를 알아보았고, 추출된 플라보노이드 성분의 추출 수율을 측정하고, 플라보노이드 함량분석을 수행하였다. 추출수율에 영향을 끼치는 주효과도와 교호효과도를 같이 고려하였을 때, 추출 수율의 경우 마이크로웨이브 조사시간이 플라보노이드 함량의 경우에는 주정/초순수 부피비가 가장 큰 영향을 미치는 것을 알 수 있었다.
0으로 나타났다. 플라보노이드 함량의 경우 주효 과도와 교호효과도를 같이 고려하였을 경우, 추출수율과는 다르게 주정/초순수 부피비가 플라보노이드 함량에 가장 큰 영향을 끼치는 것을 알 수 있었다. 반응표면법을 이용하여 얻은 회귀식을 이용하여 플라보노이드 함량에 따른 인자에 대한 영향을 3차원 그래프와 등고선 도를 통하여 Figure 3에 나타내었다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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