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당뇨병성 족부궤양 유전자 치료를 위한 새로운 Epidermal Growth Factor (EGF) 플라스미드 클로닝
Cloning of Novel Epidermal Growth Factor (EGF) Plasmid for Gene Therapy on Diabetic Foot Ulcer

Korean diabetes journal : kdj, v.32 no.2 = no.106, 2008년, pp.131 - 140  

정혜숙 (백인제 임상의학연구소 분자치료 실험실) ,  윤창신 (백인제 임상의학연구소 분자치료 실험실) ,  권민정 (백인제 임상의학연구소 분자치료 실험실) ,  김미경 (백인제 임상의학연구소 분자치료 실험실) ,  이순희 (백인제 임상의학연구소 분자치료 실험실) ,  고경수 (인제대학교 의과대학 내분비대사내과) ,  이병두 (인제대학교 의과대학 내분비대사내과) ,  박정현 (백인제 임상의학연구소 분자치료 실험실)

초록
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연구배경: EGF는 혈관생성이나 종양생성, 전이 등으로 암을 악화시킬 수 있는 유전자이지만 비정상적으로 EGF 수용체의 활성이 떨어져 있는 당뇨병환자에게는 표피의 재생성을 유도하여 피부상처회복을 촉진시켜주는 중요한 성장인자이다. 현재 판매되고 있는 Peptide EGF는 당뇨병성 족부궤양 상처치료에 유용하게 사용되고 있지만 가격이 매우 비싸고 임상치료에 있어 효율성이 떨어진다. 또한 매일 도포해야 하는 불편함으로 임상에서 사용하기에는 불편하다. EGF 유전자 치료는 이러한 단점들을 극복하여 한 번의 투여로 상처의 회복을 기대할 수 있다. 방법: 각각의 EGF 유전자를 만들기 위해 PCR 방법을 통해 생성, 증폭시켰으며 pβ-vactor에 클로닝하기 위해 제한효소 EcoRⅠ과 NotⅠ을 사용하였다. 클로닝된 유전자들은 여러 종류의 세포주에 BPEI polymer를 이용하여 transfection을 하고 Human EGF ELISA kit로 단백질 양을 측정하였다. 그리고 Western blotting을 통하여 EGF의 생물학적 기능을 관찰하였다. 결과: $EGF^{159}$$EGF^{828}$를 pβ-vector에 클로닝하여 만들었으며 ELISA 실험을 통해 단백질 생성을 확인하였다. 그 결과 $EGF^{159}$는 세포 안에서만 발현이 되지만 $EGF^{828}$은 발현된 단백질이 세포 밖으로까지 배출되었으며 furin cleavage site를 포함한 EGF 유전자는 포함하지 않은 EGF 유전자보다 그 발현율이 2배 이상 차이가 나는 것을 볼 수 있었다. 또한 배지 속으로 배출된 EGF 단백질은 EGF 수용체의 하계 신호전달물질인 PI3K와 GSK3β의 인산화를 Western blotting 실험을 통하여 관찰함으로써 생물학적 기능을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 결론: pβ-furin $EGF^{828}$은 생물학적으로 활성이 있는 EGF의 발현 효율을 높여 당뇨병성 족부 궤양의 비바이러스 유전자 치료에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

Abstract AI-Helper 아이콘AI-Helper

Background: Epidermal Growth Factor (EGF) is one of the important growth factors involved in the epithelialization during cutaneous wound healing. Peptide EGF has been used for the treatment of diabetic foot ulcer. But the inferiority of cost-effectiveness and the inconvenience of daily application ...

주제어

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