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문제 정의
- 본 연구에서 사용된 Motierlla G/pis속의 균주는 곰팡이라는 특성상 배양시간이 증가할수록 점도가 증가하어 고농도의 균체를 생산하기가 어렵다는 단점을 가지고 있으며, ARA가 균체 내의 intracellular molec니es 이라는 점에서 고농도의 균체를 베양하는 것이 ARA의 생산성과 수율의 향상에 필연적이라고 하겠다. 따라서 본 연구에서는 배양 중 morphology type에 영향을 주는 것으로 알려져있는 MnSO와 KHzPOd의 영향을 알아보고자 회분식 배양올 통하여 살피보았다. 또한 유가식 베양에서는 고농도의 균체 생성을 위하여 intermittent feeding method사용하여 당을 공급하였으며, 부가적인 질소원의 공급과 배양 중 균체의 생육에 효과가 있는 pH인 5.
제안 방법
- 4). FBC-IV에서는 초반에 공급되h 20 g/L의 glucose와 10 g/L의 CSP 이외에 부가직인 CSP 의 공급의 공급이 없이, 네양올 하있는데, 부가직인 질소원의 양은 14 % 암모니아만을 사용하여 pH가 5.5이하로 떨어지면 암모니아가 공급이 되도록 하였다(Fig. 5). 균체량은 미|양 168시간까지 지속직으로 상승하여 균체량 41.
- 이는 과량의 질소원의 공급으로 인하여 지질의합성과 불포화지방산의 합성이 저해된 것으로 사료된다. FBCTII에서는 회분식 배양에서의 C/N ratio를 맞추어 초반에는 20 g/L의 glucose오卜 10 g/七의 CSP를 사용하고 배양을 하다가 당이 5-10 g/L가 되었을 때 당과 함께 나머지 CSP를 첨가하였으며, 이후로는 당만을 공급하이 주었다. 또한 FBC-I 과 FBC-H 와 달리 5 N NaOH만을 사용하여 균체 성 장에 유리한 pH인 5.
- 33의 방범을 이 용하였고. GC는 HP 5890 series III (USA)를 이용하여 총 지질중 ARA 의 함량을 측정하였다.
- 따라서 본 연구에서는 배양 중 morphology type에 영향을 주는 것으로 알려져있는 MnSO와 KHzPOd의 영향을 알아보고자 회분식 배양올 통하여 살피보았다. 또한 유가식 베양에서는 고농도의 균체 생성을 위하여 intermittent feeding method사용하여 당을 공급하였으며, 부가적인 질소원의 공급과 배양 중 균체의 생육에 효과가 있는 pH인 5.5-6.0 사이로 유지하기 위하여 5 N NaOH 또는 14-28 % 암모니아용액을 사용하였다.
이론/모형
- 0사이를 유지하게끔 하였다 Glucose 농도는 Glucose analyze/ YSI1500. USA )를 사용하여 분석하였고, Folch 방법을이 용하여 총 지 질함냥을 측정하였다. 균체에 서 추출한 지 방산의 methylation은 AOAC 965.
- USA )를 사용하여 분석하였고, Folch 방법을이 용하여 총 지 질함냥을 측정하였다. 균체에 서 추출한 지 방산의 methylation은 AOAC 965.33의 방범을 이 용하였고. GC는 HP 5890 series III (USA)를 이용하여 총 지질중 ARA 의 함량을 측정하였다.
성능/효과
- 그 이상의 농도에서는 pellet의 크기가 커져 2-3 mm 이상의 큰 pellt이 형성되어 균체량 및 총지질 함량이 감소하였다. 2.5 L jar-fermenter에서 Mn의 농도를 50-100 mg/L로 하여 확인을 하였는데, 균체량에는 차이 가 없었고 총지 길의 함량과 ARA의 함량이 약간 증가하였다(Table 1). 그러나 pellet의 형성이 메우 작고 단단하고 점도가 낮아 교반에 어려움이 없었으므로 고농도의 균체 생성을 위한 유가식 배양공정으로 적용가능성을 확인하였다.
- 그러나 pellet의 형성이 메우 작고 단단하고 점도가 낮아 교반에 어려움이 없었으므로 고농도의 균체 생성을 위한 유가식 배양공정으로 적용가능성을 확인하였다. KHzPQi의 영향의 대한 실험은 첨가되는 KHaPQ의 농도가 1 g/L일 때 균체량과 총지질 함량이 증가하였고, 2 g/L일 때에는 총지질 함량이 감소하였다 (Table 2). 또한 총 지질내의 ARA의 함량은 KHzPQ가 첨가량이 증가할수록 감소하였는더), 이는 KHjPCM게 첨 가에 의하여 균체의 성장은 좋아졌으나, 베양후반기로 갈수록 점도의 증가로 산소의 전달이 용이치 않은 것에 의한 것으로 사료된다.
- MnSO의 영향에 관한 실험은 MnS6 7HaO를 2 mg/L~ 1, 000 mg/L로 첨가하여 ARA의 함량과 moiphology type에 미치는 영향을 살펴본 걸과에서, 100-200 mg/L의 첨가농도까지 총지질 함량과 ARA는 증가하였고 500 mg/L이 상의 침 가농도에서는 총지질의 함량과 균 체량이 감소하였다(Fig. 1). 또한 비지 내에 첨가되는 Mn의 농도가 증가할수록 풀어진 균사체에서 pellet으로 형태가 바뀌었으며.
- Motierella alpina DSA-12의 회분식 발효에서 MnSO」첨가로 작은 pell하을 형성하게 하여 유가식 베양으로의 적용 가능성을 보았으나, KHzPO의 경우에는 균체증식에는 효과가 있었지만 균체가 풀어겨 자라 점도가 증가하여 ARAB] 합성이 억제되었다. 유가식 배양에 14 % 암모니아 용액을 사용할 때 균체증식과 총지질의 함량에 영향이 있음을 확인했으며, 62.
- 5). 균체량은 미|양 168시간까지 지속직으로 상승하여 균체량 41.4 g/七룔 얻을 수 있었고. 총지질의 함량도 크게 증가하여 20.
- 5사이에 당을 공급하였다. 균체성 장과 총지질의 함량은 배 양 244시 간까지 증가하여 최 대 균체량 62.1 g/L고卜 총지질 40.0 g/L를 얻을 수 있었다(Fig. 6). 총지 질니의 ARA함량은 FBC-IV와 마찬가지로 30.
- 5 L jar-fermenter에서 Mn의 농도를 50-100 mg/L로 하여 확인을 하였는데, 균체량에는 차이 가 없었고 총지 길의 함량과 ARA의 함량이 약간 증가하였다(Table 1). 그러나 pellet의 형성이 메우 작고 단단하고 점도가 낮아 교반에 어려움이 없었으므로 고농도의 균체 생성을 위한 유가식 배양공정으로 적용가능성을 확인하였다. KHzPQi의 영향의 대한 실험은 첨가되는 KHaPQ의 농도가 1 g/L일 때 균체량과 총지질 함량이 증가하였고, 2 g/L일 때에는 총지질 함량이 감소하였다 (Table 2).
- KHzPQi의 영향의 대한 실험은 첨가되는 KHaPQ의 농도가 1 g/L일 때 균체량과 총지질 함량이 증가하였고, 2 g/L일 때에는 총지질 함량이 감소하였다 (Table 2). 또한 총 지질내의 ARA의 함량은 KHzPQ가 첨가량이 증가할수록 감소하였는더), 이는 KHjPCM게 첨 가에 의하여 균체의 성장은 좋아졌으나, 베양후반기로 갈수록 점도의 증가로 산소의 전달이 용이치 않은 것에 의한 것으로 사료된다. KHzPO」의 첨가량이 증가할수록 균체의 형태가 풀어진 균사체로 자라 배양 후반기로 갈수록 교반이 어려졌으므로, 균체증식에는 효과가 있으나, 점도의 증가로 인하여 ARA의 생성에는 효과적이지는 못했다.
- 20:4)로서 표유동물에서는 직접 합성되지 않고, 단지 식물성 식품올 통하여 섭취된 필수 지방산인 lincolcic aied을 전구체로 하여 합성되는 중요한 생체내의 지방산이다. 본 연구에서 사용된 Motierlla G/pis속의 균주는 곰팡이라는 특성상 배양시간이 증가할수록 점도가 증가하어 고농도의 균체를 생산하기가 어렵다는 단점을 가지고 있으며, ARA가 균체 내의 intracellular molec니es 이라는 점에서 고농도의 균체를 베양하는 것이 ARA의 생산성과 수율의 향상에 필연적이라고 하겠다. 따라서 본 연구에서는 배양 중 morphology type에 영향을 주는 것으로 알려져있는 MnSO와 KHzPOd의 영향을 알아보고자 회분식 배양올 통하여 살피보았다.
- 균체가 풀어겨 자라 점도가 증가하여 ARAB] 합성이 억제되었다. 유가식 배양에 14 % 암모니아 용액을 사용할 때 균체증식과 총지질의 함량에 영향이 있음을 확인했으며, 62.1 g/L의 균체량에 60%이상의 지질 함량으로 12.0 g/L의 아라키돈산을 생산할 수 있었다.
- KHzPO」의 첨가량이 증가할수록 균체의 형태가 풀어진 균사체로 자라 배양 후반기로 갈수록 교반이 어려졌으므로, 균체증식에는 효과가 있으나, 점도의 증가로 인하여 ARA의 생성에는 효과적이지는 못했다. 유가식 배양에 서 14 % 암모니아를 사용한 FBCT 에서는 배 양 6일째에 총지 질 중에 ARA의함량이 39.3%으로 5.9 g/J을 얻을 수 있었으며, 이 때의 균체량은 최 대 30.5 g/J을 얻었다 (Fig. 2). 그러나 FBC-1 의 총지질의 함량과 ARA의 함량에 비하여 균체량이 낮았고, 이는 질소원의 양이 부족하여 생긴 것으로 사료되어 FBC-II 에서는 28 % 암모니아를 사용하였 匸卜.
- 6). 총지 질니의 ARA함량은 FBC-IV와 마찬가지로 30.0-35 %로 회분식 배양에 비하여 낮은 편이지만, 최종적으로 12.0 g/L의 아라키돈산을 얻을 수 있었으며 유가식 배양 연구에서 가장 좋은 결과를 나타내었匸卜.
- 4 g/七룔 얻을 수 있었고. 총지질의 함량도 크게 증가하여 20.6 g/L을 읻을 수 있었지만, 총 지질니의 ARA의 양은 회분식 베양에 비하여 35 %로 약간 감소하이 7.0 g/L을 얻을 수 있었匸h 균체 증식에서 볼 때 암모니아가 질소원으로서 이용이 충분하게 이루이 졌음을 알 수기- 있었디..
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