[논문]작은구슬산호말 (Corallina pilulifera)의 Methanol 추출물로부터 항적조물질 분리

진형주; 김미정; 홍용기

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진형주 (부경대학교 생물공학과) , 김미정 (부경대학교 생물공학) , 홍용기 (부경대학교 생물공학과)

적조에 대한 대책으로서 가장 많이 이용되는 황토법은 적조생물을 침전시키므로써 제거하지만, 황토의 침전에 의한 2차적인 오염의 가능성이 있다 (Na et al., 1996). 황산구리, 과산화수소와 Triosyn에 의한 적조 살조효과가 있지만 이러한 화학물질은 모든 생물에 대한 살조효과가 있으므로 현상에 사용하기는 힘들다. 생물학적 방제에는 바이러스, 박테리아의 방법이 강구되고 있지만, 산소고갈 등의 2차적인 부작용이 야기된다. (중략)

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문제 정의

, 2000). 본 연구는 적조에 강한 활성을 가진 작은구슬산호말 (C. pilulifera) methanol 추출물로부터 적조살조물질을 분리하고자 한다.

제안 방법

96 well-plate 한 well당 PES배 지에 접종하고 추출물을 첨가하여 하루 후에 현미경 하에서 세포수를 계측하였다. 상대성장비는 추출물을 포함하여 배양한 세포수를 추출물을 포함하지 않은 배양세포수로 나누어 계산하였다.
작은구슬산호말 methanol 추출물은 해조체 20 g당 methanol 1 L 비율로 첨가하여 추출하였다. methanol 추출물을 분액깔대기에 붓고, 동량의 n-hexane, Ethyl ether로 분획을 하였다. 나누어진 분획에서 활성있는 층을 TLQ SUica g이 column chromatography, Sephadex LH-20 gel filtration column를 이용하여 조정제하였다.
methanol 추출물을 분액깔대기에 붓고, 동량의 n-hexane, Ethyl ether로 분획을 하였다. 나누어진 분획에서 활성있는 층을 TLQ SUica g이 column chromatography, Sephadex LH-20 gel filtration column를 이용하여 조정제하였다. 조정제 추출물은 HPLC C₈ reversed-phase column (Unisil Q, 10.
96 well-plate 한 well당 PES배 지에 접종하고 추출물을 첨가하여 하루 후에 현미경 하에서 세포수를 계측하였다. 상대성장비는 추출물을 포함하여 배양한 세포수를 추출물을 포함하지 않은 배양세포수로 나누어 계산하였다.
작은구슬산호말 methanol 추출물은 해조체 20 g당 methanol 1 L 비율로 첨가하여 추출하였다. methanol 추출물을 분액깔대기에 붓고, 동량의 n-hexane, Ethyl ether로 분획을 하였다.
나누어진 분획에서 활성있는 층을 TLQ SUica g이 column chromatography, Sephadex LH-20 gel filtration column를 이용하여 조정제하였다. 조정제 추출물은 HPLC C₈ reversed-phase column (Unisil Q, 10.7 X 250mm), HPLC Cis reversed-phase column (μ Bondapak, 3.9 X 300mm), Superdex peptide HR10/30 (10 x 300 mm) gel-filtration을 행하여 순수분리하였다.

대상 데이터

그런 후 coffee grinder를 이용하여 powder로 만들어 사용하였다. 그리고, 적조생물은 국립수산진흥원에서 분양받았다. 분양 받은 적조생물은 항생물질이 포함된 Provasoli's enriched seawater배지 (PES, Provasoli, 1968)에 무균적으로 유지하였다.

성능/효과

9 X 300mm)에 적용한 결과 39% acetonitrile에 활성이 보였으며, 마지막으로 Superdex peptide HR10/30 (10 X 300 mm) gel- filtratiorv올 행하여 순수분리를 하였다. Fraction Ⅱ (CP2)은 Sephadex LH-20에 적용한 결과 fraction 32-43에서 강한 활성을 나타내었다. 이 조정제 fraction을 농축하여 HPLC에 적용하였다.
이 조정제 fraction을 농축하여 HPLC에 적용하였다. HPLC C₁₈ reversed-phase column (μ Bondapak, 3.9 X 300mm)에 적용한 결과 3 % acetordriUe에 활성이 보였다. 조정제된 CP1 과 CF2를 적조에 적용한 결과 scrippsiella trichoidea를 제외한 나머지 적조생물에 대해서는 강한 살조효과가 나타났다.
34-45에서 강한 활성을 나타내었다. 이 조정제 fraction을 HPLC C₈ reversed- phase column (Unisil Q 10.7 X 250mm)에 적용한 결과 39% acetonitrile에서 활성이 나왔고, 이 활성부위를 HPLC C₁₈ reversed-phase column (μ Bondapak, 3.9 X 300mm)에 적용한 결과 39% acetonitrile에 활성이 보였으며, 마지막으로 Superdex peptide HR10/30 (10 X 300 mm) gel- filtratiorv올 행하여 순수분리를 하였다. Fraction Ⅱ (CP2)은 Sephadex LH-20에 적용한 결과 fraction 32-43에서 강한 활성을 나타내었다.
9 X 300mm)에 적용한 결과 3 % acetordriUe에 활성이 보였다. 조정제된 CP1 과 CF2를 적조에 적용한 결과 scrippsiella trichoidea를 제외한 나머지 적조생물에 대해서는 강한 살조효과가 나타났다.
hexane증은 Silical gel chromatography에 적용하여, 한 fraction당 50 mL로 하여 추출하였다. 추출결과 fraction Ⅰ , fraction Ⅱ, fraction Ⅲ, fraction Ⅳ, fraction Ⅴ로 나누었고, fraction Ⅰ, Ⅱ Ⅵ에서 활성이 나타났으며, 활성이 가장 강하게 나타난 fraction Ⅰ (CP1)을 먼저 Sephadex LH-20에 적용하여 활성실험을 한 결과 fraction No. 34-45에서 강한 활성을 나타내었다. 이 조정제 fraction을 HPLC C₈ reversed- phase column (Unisil Q 10.

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