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제안 방법
- 5 ml 용량의 straw를 액체질소증기(-76C)에 의해 천천히 1차 냉동한 다음, 신속히 액체질소(-196C)에서 넣어 2차 냉동하였다. 각 실험에서 냉동된 정자는 액체질소 탱크에 1주일간 저장한 후 30± 1℃의 항온수조에서 해동시켜 운동성과 생존율을 평가하였다.
- 냉동 보존에 적합한 동해 방지제의 종류와 농도를 결정하기 위하여, 동해 방지제인 DMSO, ethylene glycol, glycerol, methanol 및 1, 2-propanedioI을 최종 농도가 각각 5, 10, 15, 20% 되도록 첨가하여 냉동하였다. 그리고 보존효과가 가장 좋았던 희석액을 이용하여 정액을 1, 3, 5, 10, 20 및 40배로 희석하여 냉동 보존한 다음 해동시켜 정자의 활성을 분석함으로써, 냉동 보존을 위한 적정 희석 배율을 구명하였다. 한편 정자를 냉동할 때, 액체질소 표면으로부터 straw까지의 간격을 각각 3, 5, 7, 9 및 11 cm로 설정하여 냉동한 다음 해동시켜 정자활성을 분석함으로써, 1차 냉동온도가 정자보존에 미치는 영향을 구명하였다.
- 정자의 냉동 보존에 적합한 희석액을 결정하기 위하여 11가지 희석액을 정액과 5:1의 비율로 섞은 후, 10% ethylene glycol을 첨가하여 냉동시켰다. 냉동 보존에 적합한 동해 방지제의 종류와 농도를 결정하기 위하여, 동해 방지제인 DMSO, ethylene glycol, glycerol, methanol 및 1, 2-propanedioI을 최종 농도가 각각 5, 10, 15, 20% 되도록 첨가하여 냉동하였다. 그리고 보존효과가 가장 좋았던 희석액을 이용하여 정액을 1, 3, 5, 10, 20 및 40배로 희석하여 냉동 보존한 다음 해동시켜 정자의 활성을 분석함으로써, 냉동 보존을 위한 적정 희석 배율을 구명하였다.
- 따라서 이 연구에서는 넙치 정액의 냉동 보존을 위한 적정 조건을 구명하였으며, 냉동 정액을 이용하여 알과 인공수정시켜 생산된 치어의 성장과 형태를 비냉동 정액으로 생산된 치어의 것과 비교하였다.
- 해동온도와 해동시간이 보존에 미치는 영향을 구명하기 위해, 냉동 보존된 정자를 10℃, 20℃, 30℃, 40℃ 및 50℃에서 해동시켜 정자의 활성을 분석하였고, 이후 가장 효과가 좋았던 해동온도에서 해동시간을 5, 10, 20, 30 및 60초로 하여 해동하여 정자의 활성을 조사하였다. 적정 조건으로 냉동된 정액을 이용하여 알과 인공수정시켜 생산된 치어의 성장과 형태를 비냉동 정액으로 생산된 치어의 것과 비교하였다.
- 정자의 냉동 보존에 적합한 희석액을 결정하기 위하여 11가지 희석액을 정액과 5:1의 비율로 섞은 후, 10% ethylene glycol을 첨가하여 냉동시켰다. 냉동 보존에 적합한 동해 방지제의 종류와 농도를 결정하기 위하여, 동해 방지제인 DMSO, ethylene glycol, glycerol, methanol 및 1, 2-propanedioI을 최종 농도가 각각 5, 10, 15, 20% 되도록 첨가하여 냉동하였다.
- 그리고 보존효과가 가장 좋았던 희석액을 이용하여 정액을 1, 3, 5, 10, 20 및 40배로 희석하여 냉동 보존한 다음 해동시켜 정자의 활성을 분석함으로써, 냉동 보존을 위한 적정 희석 배율을 구명하였다. 한편 정자를 냉동할 때, 액체질소 표면으로부터 straw까지의 간격을 각각 3, 5, 7, 9 및 11 cm로 설정하여 냉동한 다음 해동시켜 정자활성을 분석함으로써, 1차 냉동온도가 정자보존에 미치는 영향을 구명하였다. 해동온도와 해동시간이 보존에 미치는 영향을 구명하기 위해, 냉동 보존된 정자를 10℃, 20℃, 30℃, 40℃ 및 50℃에서 해동시켜 정자의 활성을 분석하였고, 이후 가장 효과가 좋았던 해동온도에서 해동시간을 5, 10, 20, 30 및 60초로 하여 해동하여 정자의 활성을 조사하였다.
- 한편 정자를 냉동할 때, 액체질소 표면으로부터 straw까지의 간격을 각각 3, 5, 7, 9 및 11 cm로 설정하여 냉동한 다음 해동시켜 정자활성을 분석함으로써, 1차 냉동온도가 정자보존에 미치는 영향을 구명하였다. 해동온도와 해동시간이 보존에 미치는 영향을 구명하기 위해, 냉동 보존된 정자를 10℃, 20℃, 30℃, 40℃ 및 50℃에서 해동시켜 정자의 활성을 분석하였고, 이후 가장 효과가 좋았던 해동온도에서 해동시간을 5, 10, 20, 30 및 60초로 하여 해동하여 정자의 활성을 조사하였다. 적정 조건으로 냉동된 정액을 이용하여 알과 인공수정시켜 생산된 치어의 성장과 형태를 비냉동 정액으로 생산된 치어의 것과 비교하였다.
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