[논문]수온의 변화가 넙치, Paralichthys olivaceus의 면역 반응과 VHSV 감염에 미치는 영향

김은전; 김수미; 박수일

수온의 변화가 넙치, Paralichthys olivaceus의 면역 반응과 VHSV 감염에 미치는 영향 원문보기

김은전 (부경대학교 수산생명의학과) , 김수미 (부경대학교 수산생명의학과) , 박수일 (부경대학교 수산생명의학과)

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문제 정의

본 연구의 목적은 겨울철에 발생하는 양식 넙치의 질병 원인체인 VHSV 감염에 의한 질병 발생과 관련하여 수온이 끼치는 영향을 파악하고자 하였다. VH玷V의 병원성과 수온의 관계, 넙치와 수온과의 관계를 다양한 면역 인자를 통해 알아보고자 하였다.
NCCs는 차넬메기, 자리돔, 무지개송어와 잉어를 포함한 여러 어종에서 보고된 바 있다. 본 연구의 목적은 겨울철에 발생하는 양식 넙치의 질병 원인체인 VHSV 감염에 의한 질병 발생과 관련하여 수온이 끼치는 영향을 파악하고자 하였다. VH玷V의 병원성과 수온의 관계, 넙치와 수온과의 관계를 다양한 면역 인자를 통해 알아보고자 하였다.

제안 방법

VHSV의 온도 감수성 : in vitro 와 in vivo 에서 다양한 온도 (4~30℃)에 실험하였다.
은 L1210을 사용하였다. lactate dehydrogenase (LDH) activity의 검출에 기초한 cytotoxic detection Kit (Promega)를 사용하여 시행했다.
온도별 넙치의 면역인자 발현 조사 : 12℃와 20℃의 수온에 순치한 넙치의 두신을 이용하여 비특이면역과 특이면역 유전자의 발현을 RT-PCR를 통해 발현을 확인하였다

대상 데이터

Cytotoxicity 측정 : effector cell 은 넙치 두신 비부착 세포를 사용하였고 target cell 은 L1210을 사용하였다. lactate dehydrogenase (LDH) activity의 검출에 기초한 cytotoxic detection Kit (Promega)를 사용하여 시행했다.
시험어 : 포항의 육상 수조식 양어장으로부터 질병에 감염된 병력이 없는 건강한 넙치(평균 체중 35±7.5 g)를 실험에 사용하였다. 1주일간 수온은 18~20°5서순치를 하였으며 실험온도에서 4주간 순치하였다.

성능/효과

Target cell과 conjugation을 일으키는 effector celle lymphocyte-like cell로 넙치의 NCCs가 lymphocyte-like cell로 여겨진다. 바이러스 감염 시 넙치의 비특이 면역 중 cytotoxic activity?} effector : target cell ratio가 100:1일 때 20℃ 시험구에서 15.29±6.12%이며 12℃ 시험구는 4.8±2.23%이며 12℃보다 20℃가 유의적으로 증가하였다 이상의 결과를 종합해 보면, 우리나라 VHSV 감염증은 저수온기 (10I2℃)에 강한 병원성을 나타내며, 이와는 달리 넙치는 비특이적 면역능이 약해지는 것이 겨울철 넙치의 VHSV 감염증 발생과 관련이 깊을 것으로 생각하였다.
VHSV의 수온에 따른 해수 내의 생존 기간을 조사한 결과 4~20℃에서 생존하며 25℃이상의 해수에서는 접종 후에 급격하게 비리온이 감소하였으나 약하게 활성을 나타냈다. 넙치에 감염을 일으키는 VHSV가 15℃ 이하의 수온에서는 감염력이 강하지만 18℃에서는 감염력이 나타나지 않았으며 바이러스도 검출되지 않았다. 수온별 어체내 생존 기간 조사시험 결과, 20℃에서는 3일째 이후로 CPE가 관찰되지 않았으며, 12℃에서는 1일째부터 CPE가 나타나 3일째는 접종 역가보다 높은 TCIDso을 나타내며 어체내에서 7 일째 이후까지 높은 virus titer를 나타냈다.
넙치에 감염을 일으키는 VHSV가 15℃ 이하의 수온에서는 감염력이 강하지만 18℃에서는 감염력이 나타나지 않았으며 바이러스도 검출되지 않았다. 수온별 어체내 생존 기간 조사시험 결과, 20℃에서는 3일째 이후로 CPE가 관찰되지 않았으며, 12℃에서는 1일째부터 CPE가 나타나 3일째는 접종 역가보다 높은 TCIDso을 나타내며 어체내에서 7 일째 이후까지 높은 virus titer를 나타냈다. Poly I:C를 주사했을 때 항바이러스면역 유전자의 발현이 12℃보다 20℃가 높았다.

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