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[학위논문] 우리나라 소에서 Brucella canis 동정 (Brucella canis found in cattle in Republic of Korea)

박미연 (전북대학교 대학원)
2009 , 29p , 전북대학교 대학원 , 국내석사

소 브루셀라병이 발생한 젖소 목장에서 혈청학적으로 음성인 소에서 20개의 림프절을 채취하여 혈액배지와 Brucella agar에 도말하여 배양하였고, 9개의 샘플에서 Brucella spp.의 특징적인 콜로니가 관찰되었다. 이들 균주에 대해 urease test, H2S test, monospecific sera A 와 M 에 대한 reaction test, phage typing (Weybridge, Tbilisi, Berkeley, Firenze, Izatnagar and R/C)을 실시한 바, 모두 Brucella genus에 양성 반응하였다. Genus와 species 단계에서의 Brucella를 확인, 입증하기 위해 Genus specific PCR, AMOS PCR, IS711 및 glk에 대한 Real time PCR을 실시하였다. 그 결과 1개는 B. canis strain, 나머지 8개는 B. abortus biotype 1 으로 동정되었다. 이 같은 우리나라 소에서의 B. canis 감염은 브루셀라병의 퇴치를 위한 중요한 정보가 될 것으로 사료된다.

[학위논문] Sprague-Dawley 흰쥐에 있어서 Brucella abortus의 감염과 방어 면역에 관한 연구 (EXPERIMENTAL INFECTION AND PROTECTIVE IMMUNITY OF SPRAGUE-DAELEY RATS WITH BRUCELLA ABORTUS)

씨딕라흐만 (전북대학교)
2003 , xviii, 138 p. , 전북대학교 , 국내박사

부루세라병은 한국의 젖소에서 번식 장애를 가져오는 중요한 인수공통질병의 하나이며, 이 질병의 박멸을 위한 연구가 광번위한 영역에 걸쳐서 절실히 요청되고 있는 실정이다. 본 연구자는 부루세라병에 감염된 소에서 분리된 Brucella abortus biotype 1을 Sprague-Dawley(SD) 흰쥐에게 인공 감염시킨 후, 임상병리학적 증세, 수직 전파 여부 그리고 혈청 면역학적 특징을 관찰하였으며, B. abortus strain RB51를 인공 접종하여 형성된 항체가 B. abortus biotype 1의 도전 감염에 대한 방어 능력을 관찰하였다. 흰쥐 암컷에게 B. abortus biotype 1 을 1.0×10^9 cfu/500 ㎕로 피하 접종하였으며, 인공 접종에 따른 감염 여부를 세균학적으로 규명하기 위하여 비장, 자궁, 림프절, 그리고 태반 조직 절편을 취하여 부루세라 배지에 배양한 후, AMOS PCR(B. abortus, B. melitenis, B. ovis, B. suis, Polymerase Chain Reaction)의 방법으로 균체를 확인하였다. B. abortus biotype 1을 인공 감염시킨 SD 흰쥐에서의 유·사산, 미성숙 태아 그리고 회귀열 증세를 관찰할 수 없었다. 인공 감염에 따른 체온은 38'c에 달하였다가 정상 체온으로 전환되었으며, 대조 군은 정상적인 체온을 유지하였다. 그렇지만 감염 흰쥐에서는 비장 종대, 자궁염, 림프절 종 그리고 태반염 등이 병리조직학적으로 관찰되었다. 부루세라병의 실험적 연구 동물 모델로서 SD 흰쥐에게 B. abortus biotype 1의 수직 전파 여부를 증명하기 위하여 1.0×10^9cfu/500㎕ 농도로 B. abortus biotype 1을 피하접종한 후, 체내 장기 조직 절편을 배양하여 얻은 가검물에서의 PCR 방법, 혈청학적 양성 전환 그리고 수컷의 고환과 암컷의 비장에서 세균 배양과 AMOS PCR로 균체의 감염을 확인할 수 있었다. 또한 Rose Bengal test와 평판응집반응 (PAT)에서 모두 1:800의 항체 역가가 접종 7일후부터 지속적으로 나타났으며, 분만 후에 있어서의 항체 역가는 1:1600로 증가되었다. 분만 후 1 개월령의 한배 새끼의 항체 역가는 RBT에서는 1:400 과 PAT에서는 1:200이었고, 어미 흰쥐에서는 RBT과 PAT 모두 1:800 이었다 인공 감염 암컷과 수컷 흰쥐는 Brucella를 수직과 수평으로 전파이동 시키고 있음을 입증할 수 있었으며, AMOS PCR방법으로는 임신 20일째의 태자 파쇄 조직으로부터 입증함으로서 Brucella species의 수직적 전파를 증명할 수 있었다. B. abortus biotype 1 만을 인공감염시킨 SD 흰쥐 혈액에서는 24주 이상 균체를 확인할 수 있었으나, B. abortus RB5l을 접종한 후, 도전 감염시킨 예에서는 4주 후에는 균체를 확인할 수 없었다. B. abortus strain 1119-3 whole cell 항원을 이용한 PAT, TAT, RBT, MET 와 B. abortus strain 1119-3 whole cell과 세포질성 단백질 항원을 이용한 ELISA는 방법들은 흰쥐에게 B. abortus biotype 1을 인공감염시 항체를 검출할 수 있었던 바, 앞으로 부루세라병을 진단과 야생 동물의 부루세라병 진단 방법으로 활용할 수 있을 것으로 사료되었다. 흰쥐에서 B. abortus strain RB5l 의 방어적인 면역 형성을 관찰하기 위하여 암컷 흰쥐에 B. abortus strain RB5l 를 1.0×107 cfu를 경구 투여한 후, B. abortus biotype 1 을 1.0×l0^9 cfu를 도전 감염을 시켰다. 도전시킨 흰쥐의 혈청은 B. abortus strain 1119-3 whole cell 항원으로 제조된 TAT, PAT 그리고 RBT방법으로 항체 역가를 측정하였으며, B. abortus strain RB5l과 B. abortus strain 1119-3을 사용하는 dot-blot assay, B. abortus strain 1119-3 whole cell 항원을 이용한 western blot 방법으로 항체 형성 pattern을 관찰하였던 바, 접종 4주 후부터 B. abortus strain RB5l을 사용한 dot-blot assay에서 가장 높은 항체반응이 나타났으며, Western blot 방법에서 있어서는 백신 접종된 흰쥐에게 도전 감염시킨 흰쥐에서는 강한 면역 반응을 가져왔었다. 즉, B. abortus strain RB5l를 접종한 흰쥐에게 B. abortu5 균주를 도전 흰쥐는 4주까지 일시적인 혈청 응집을 보였으며, 균체는 혈액에서는 1주일 그리고 기타 장기에서는 4주 후에 손실되었으나, B. aborts RB5l을 접종하지 않는 대조 흰쥐에서의 B. abortus 접종 시에는 접종 24 주까지 지속적으로 혈청응집 반응을 나타내는 지속적인 체액성 면역 반응이 진행되고 있었다 .이 같은 B. abortus RB5l의 흰쥐에서의 강한 면역 형성 유도는 우리나라에서처럼 지속적인 부루세라병이 자연 발생하고 있어 부루세라병의타 척추동물에게로의 감염을 차단 또는 전파를 억제시킬 수 있을 것으로 기대되었는 바, B. abortus strain RB5l을 야생동물에게 먹이를 이용한 경구 투여 방법은 이 질병의 자연감염 확산을 막는데 일익을 담당할 것으로 판단된다.

[해외논문] [Brucella keratoconjunctivitis] (Brucella-keratokonjunktivitis.)

van Rooyen, M M
South African medical journal = Suid-Afrikaanse tydskrif vir geneeskunde v.60 no.5 ,pp. 206 - 207 , 1981 , 0256-9574 , Medical Association of South Africa

A case is described in which the rubber cap of a vial containing Brucella abortus vaccine came off accidentally and some of the contents splashed in the eyes of a veterinarian. A uni-ocular keratoconjunctivitis developed. The other eye was similarly affected 1 week later. Brucella tests were negative. Two months later the Br. abortus titre was 1/640 and the Br. melitensis titre 1/320. Systemic treatment with tetracyclines, co-trimoxazole and streptomycin and local treatment with chloramphenicol and atropine had no effect. Two attacks of acute keratoconjunctivitis subsequently occurred within two hours of handling Brucella vaccine. In the right eye a corneal abscess developed, as well as uveitis and cataract. Extracapsular lens extraction was performed. Panophthalmitis followed and the eye was enucleated. The literature is reviewed and the possibility of a Brucella keratoconjunctivitis indistinguishable from viral keratoconjunctivitis is discussed.

[해외논문] COMPOSITION CHIMIQUE DES PAROIS DE BRUCELLA. GLYCOSAMINOPEPTIDE DE BRUCELLA ABORTUS ET BRUCELLA MELITENSIS. ([CHEMICAL COMPOSITION OF BRUCELLA WALLS. GLYCOSAMINOPEPTIDE FROM BRUCELLA ABORTUS AND BRUCELLA MELITENSIS.])

LACAVE, C , ROUX, J
Comptes rendus hebdomadaires des seances de l'Academie des sciences v.260 ,pp. 1514 - 1517 , 1965 , 0001-4036 , publics avec le concours du Centre national de la recherche scientifique par MM.les secretaires perpetuels ; Gauthier-Villars

[해외논문] Molecular typing of Brucella with cloned DNA probes (Typage moleculaire de Brucella avec des sondes ADN clonees)

Grimont, F. (Laboratoire de Pathologie infectieuse et Immunologie, INRA, 37380,, Nouzilly, France) , Verger, J.M. , Cornelis, P. , Limet, J. , Lefevre, M. , Grayon, M. , Regnault, B. , Van Broeck, J. , Grimont, P.A.D.
Research in microbiology v.143 no.1 ,pp. 55 - 65 , 1992 , 0923-2508 , Elsevier

Brucella constitutes a single genomic species (B. melitensis; however, for epidemiological studies, methods are needed for discriminating strains within this genomic species. DNA samples from 112 Brucella strains were cleaved by restriction endonucleases and the fragments separated by agarose gel electrophoresis and transferred to nylon membranes. When the DNA fragments on the membranes were probed with 32P-labelled 16 + 23 S rRNA from Escherichia coli, a single rRNA gene restriction pattern was obtained after cleavage with all endonucleases tested (Hindlll, EcoRI, Smal, and Xhol) except BamHl. This indicated high genomic homogeneity within the single Brucella species.Of 30 probes consisting of random Brucella DNA fragments cloned into γEMBL3, 20 yielded a single BamHl restriction pattern per probe when applied to 112 Brucella DNA tested. However, 7 probes yielded 3 to 12 different patterns among DNA tested. These patterns more-or-less correlated with the classification of strains into biogroups (Melitensis, Abortus, Suis, Neotomae, Ovis and Canis) and biovars (18 biovars represented). Probe A was capable of separating biogroup Melitensis from the other biogroups. Probe C separated the set of biogroups Melitensis-Abortus-Ovis from the other biogroups. By reference to the patterns obtained using 1 to 7 probes, the most frequently occurring biovars (Melitensis 1, Melitensis 3, Abortus 1, Abortus 3, Suis 2 and Ovis) could be distinguished from each other. Eight biovars showed more than one pattern with 1 to 7 probes.The proposed typing system should be useful for epidemiological subtyping and does not pose safety problems once the DNA has been extracted.

[학위논문] Erythritol Utilization of Brucella abortus

박봉규 (Oklahoma State University)
2001 , viii, 57p. , Oklahoma State University , 국외박사

Scope and Method of Study: The purpose of this study was to investigate the pathogenicity of Brucella abortus by identifying its differentially expressed genes inside bovine macrophages and genes induced in erythritol medium. The identification of the differentially expressed genes inside host cells and in erythritol medium will help us understand how B. abortus survives inside host cells and thereby cause disease in the hosts, and the possible role of erythritol in Brucella pathogenicity, respectively. In this study, while RNA fingerprinting by arbitrarily primed PCR (RAP-PCR) was used to identify the intracellularly induced genes, an arrayed genomic DNA library was used to isolate the erythritol-induced genes. Findings and Conclusions: By using the RAP-PCR, some of the possible candidates of intracellularly induced genes were identified. But in the later steps used to confirm the differential expression of the candidate RAP-PCR products, several problems have been found. First of all, each of the candidates was a mixture of several RAP-PCR products that were of the same size. Secondly, they were contaminated with host macrophage RNA. Recently, some novel methods capable of avoiding those problems, such as the usage of hybridization of the RAP-PCR products and genomic DNA to avoid the host cell RNA contamination or the genes of pathogen arrayed on solid supports have been introduced. In the identification of erythritol-induced genes, an arrayed B. abortus genomic DNA library was used. Multiple spots were shown to be induced and repressed, indicating the involvement of genes or operons other than the erythritol operon. After sequencing both ends of some of the induced and repressed spots, in the database search both ends of an induced spot had high sequence similarities to a known virulence gene, cyclic β(l-2) glucan synthetase, suggesting the possible role of erythritol-induced genes in Brucella pathogenicity, while the ends of the other spots have different matches or no significant similarities.

[학위논문] Brucella abortus의 유전자 재조합 항원을 이용한 브루셀라병의 혈청학적 진단과 항체분포조사 (Production of recombinant proteins of brucella abortus and use in the seroepidemiological studies)

어형진 (Graduate School, Yonsei University)
2001 , 50장 , Graduate School, Yonsei University , 국내석사

브루셀라병은 사람과 가축에 감염되는 대표적인 인수공통전염병이다. 최근 한국에서 증가되고 있는 브루셀라병은 가축과 접촉이 잦은 직업의 사람에서 감염에 대한 관심이 증가되고 있다. 사람에서 주요 감염세균인 Brucella abortus는 분리, 동정이 난해해서 브루셀라병의 감염이 의심되는 사람에서의 진단에는 혈청학적 진단에 의존하고 있다. 그러나 Brucella 균체를 이용하는 현재의 혈청학적 방법은 다른 그람 음성세균과의 교차반응이 존재하고, 현재 활동성 감염자와 과거병력자를 감별하는데 적절하지 못하다는 평가를 받고 있다. 본 연구에서는 Brucella 세균에 특이한 단백질 항원을 유전자재조합 기법으로 생산하여 혈청학적 진단에 이용하고, 단백질을 사용한 혈청학적 진단을 평가하고자 하였다. 그리고 제주지역의 주민을 상대로 유전자재조합 단백질에 대한 항체 분포를 파악하고 혈청학적 조사에 유용성을 조사하고자 하였다. 기존에 발표되었던 B. abortus 단백질 중에서 항원성과 특이성을 고려하여 세포외막단백 Omp16 인 16.5 kDa, 세포막주 단백인 26 kDa, 그리고 세포막 단백인 39 kDa을 선택하였다. 추가로 브루셀라균이 성장하는데 필요한 탄소를 얻는 주요 물질인 ERC 단백질을 포함하여 실험을 하였다. 각 각의 단백질 유전자를 pQE30 발현벡터에 클로닝하고 E. coli에서 발현을 시켰다. 정제된 유전자재조합 단백질인 r16.5 kDa, r26 kDa, r39 kDa, 그리고 rERC 단백질의 분자생물학적 특성을 SDS-PAGE 분석을 통해 규명하였고, Western blotting 분석을 통하여 면역원성을 확인하였다. 위의 유전자재조합 단백질들 모두 Western blotting 분석을 통하여 보면 mice에서 생성된 항체에 강한 면역반응을 보이는 것을 확인하였다. 더불어, 토끼에서 얻어진 항체에 대해서는 r16.5 kDa, r26 kDa, 그리고 r39 kDa의 단백질과 반응하는 것을 확인하였고 이 사실로 이들 유전자재조합 단백질들이 B. abortus이 단백질과 반응하는 항원으로서 역할을 한다는 사실을 간접적으로 증명하였다. 이들 유전자재조합 단백질들은 또한 ELISA를 통한 실험으로 시험관 응집반응에서 양성판정으로 브루셀라병에 자연감염판정을 받은 100두의 젖소들로부터 얻어진 혈청 내 항체를 찾는데도 효과적이었다. 위와 같은 유전자재조합 항원을 이용한 혈청학적 진단으로 제주지역 주민을 대표하는 거주자들의 혈청내의 항체존재 여부를 조사하였다. 모두 500명의 검사 혈청 중에서 r16.5 kDa 단백질과 r26 kDa 단백질에 대한 양성율은 7 검체로 1.4%였고, r39 kDa 단백질에 대해서는 11 검체로 2.2%였다. 흥미로운 사실은 4 검체에 해당하는 0.8%가 rERC 단백질과 Brucella 융해체에 대해 혈청학적인 양성을 보였다. 본 연구 결과는 위에서 제시되어진 4가지 유전자재조합 단백질이 B. abortus 의 단백질 항원에 대한 항체를 찾아내는데 유용하다는 것을 제시하고 있으며, 현재 사용되고 있는 여러 가지 응집 진단 방법과 함께 사용되어 질 수 있는 가능성을 시사하고 있다. 또한 이 연구에서는 제주지방에 거주하는 주민들 중 일부가 B. abortus에 노출되어 있음을 시사하는 여러 가지 결과를 제시하고 있다. 앞으로의 연구 진행방향은 브루셀라병이 확실한 개체에 대한 연구를 바탕으로 이 질병의 혈청학적 진단에 유전자재조합 단백질의 유용성을 증명해 내는 일이 절실히 요구될 것이다.

[해외논문] [The genus Brucella.] (Sobre o genero Brucella.)

PACHECO, G
Brazil-medico v.67 no.10/11 ,pp. 170 - 171 , 1953 , 0006-9205 ,

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