초록 ▼

숙주가 본래 갖고 있지 않는 RNA 폴리머라아제에 의해 인식될 수 있고, 목적 유전자의 발현을 제어하는 프로모터 서열과 외래인자에 의한 유도하에서 카피수를 증가시키는 복제 오리진을 갖는 것을 특징으로 하는 플라스미드 벡터; 이 벡터를 이용한 목적 유전자의 발현 및 단리 방법; AccIII 제한효소의 활성을 갖는 폴리펩티드; 및 폴리펩티드를 코딩하는 DNA. 본 발명은 숙주에 치명적이거나 해로운 단백질을 코딩하는 외래 목적 유전자를 숙주에 도입할 수 있는 플라스미드 벡터, 이 벡터를 이용하여 단백질을 효율적으로 발현시키는 방법 및

숙주가 본래 갖고 있지 않는 RNA 폴리머라아제에 의해 인식될 수 있고, 목적 유전자의 발현을 제어하는 프로모터 서열과 외래인자에 의한 유도하에서 카피수를 증가시키는 복제 오리진을 갖는 것을 특징으로 하는 플라스미드 벡터; 이 벡터를 이용한 목적 유전자의 발현 및 단리 방법; AccIII 제한효소의 활성을 갖는 폴리펩티드; 및 폴리펩티드를 코딩하는 DNA. 본 발명은 숙주에 치명적이거나 해로운 단백질을 코딩하는 외래 목적 유전자를 숙주에 도입할 수 있는 플라스미드 벡터, 이 벡터를 이용하여 단백질을 효율적으로 발현시키는 방법 및 또한 종래 기술에서는 어려웠던, 수식효소 유전자의 부재하에서조차 제한-수식 시스템을 구성하는 제한효소 유전자가 단리되도록 하는 방법을 제공한다.

대표청구항 ▼

숙주가 본래 갖고 있지 않는 RNA 폴리머라아제에 의해 인식되는, 목적 유전자의 발현을 제어하는 프로모터 서열 및 외래인자에 의해 유도됨으로 카피수를 증가시키는 복제 오리진을 갖는 것을 특징으로 하는 플라스미드 벡터.제 1 항에 있어서, 프로모터 서열은 박테리오파아지 유래의 RNA 폴리머라아제에 의해 인식되는 플라스미드 벡터.제 2 항에 있어서, 프로모터 서열은 SP6 파이지 유래의 RNA 폴리머라아제에 의해 인식되는 플라스미드 벡터.제 3 항에 있어서, 프로모터 서열은 서열목록에 나타낸 SEQ ID NO : 30의 염기서열을 포함

숙주가 본래 갖고 있지 않는 RNA 폴리머라아제에 의해 인식되는, 목적 유전자의 발현을 제어하는 프로모터 서열 및 외래인자에 의해 유도됨으로 카피수를 증가시키는 복제 오리진을 갖는 것을 특징으로 하는 플라스미드 벡터.제 1 항에 있어서, 프로모터 서열은 박테리오파아지 유래의 RNA 폴리머라아제에 의해 인식되는 플라스미드 벡터.제 2 항에 있어서, 프로모터 서열은 SP6 파이지 유래의 RNA 폴리머라아제에 의해 인식되는 플라스미드 벡터.제 3 항에 있어서, 프로모터 서열은 서열목록에 나타낸 SEQ ID NO : 30의 염기서열을 포함하는 플라스미드 벡터.제 1 내지 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 오리진은 프로모터 제어하에 있는 플라스미드 벡터.제 1 내지 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 복제 오리진은 lac 프로모터의 제어하에 있는 플라스미드 벡터.제 1 내지 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 선택 마커로서 약제내성 유전자를 포함하는 플라스미드 벡터.제 7 항에 있어서, pACE601, pACE611, pACE701 및 pACE702 으로부터 선택되는 플라스미드 벡터.발현시킬 목적 유전자 제 1 내지 8 항 중 어느 한 항에 기재된 플라스미드 벡터에 통합되어 있는 플라스미드 벡터.제 1 내지 8 항 중 어느 한 항에 기재된 플라스미드 벡터에 목적 유전자가 통합된 플라스미드 벡터와 이 플라스미드 벡터내 프로모터 서열을 인식하는 RNA 폴리머라아제 유전자를 숙주에 도입하고, 외래 인자를 이용하여 상기 플라스미드 벡터의 카피수의 증가의 유도 및 상기 RNA 폴리머라아제의 발현을 유도하여 목적 유전자를 전사 및 번역하는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 발현 방법.제 10 항에 있어서, 플라스미드 벡터의 카피수의 증가 및 RNA 폴리머라아제의 발현은 각각의 외래인자에 의해 유도되는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 발현 방법.제 10 항에 있어서, 플라스미드 벡터의 카피수의 증가 및 RNA 폴리머라아제의 발현은 동일한 외래인자에 의해 유도되는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 발현 방법.제 10 내지 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 플라스미드 벡터의 카피수의 증가를 유도하는 외래인자가 이소프로필-β-D-티오갈락토시드(IPTG)의 첨가, 락토오스의 첨가, 갈락토오스의 첨가, 아라비노오스의 첨가, 트립토판농도의 감소 및 형질전환체 배양온도의 조정으로 구성된 군에서 선택한 1종 이상인 것인 목적 유전자의 발현 방법.제 10 내지 12 항 중 어느 한 항에 있어서, RNA 폴리머라아제의 발현을 유도하는 외래인자가 이소프로필-β-D-티오갈락토시드(IPTG)의 첨가, 락토오스의 첨가, 갈락토오스의 첨가, 아라비노오스의 첨가, 트립토판농도의 감소 및 형질전환체 배양온도의 조정으로 구성된 군에서 선택한 1종 이상인 것인 목적 유전자의 발현 방법.제 10 항에 있어서, RNA 폴리머라아제 유전자는 기타의 플라스미드 벡터 또는 파아지 벡터에 의해 숙주에 도입되는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 발현 방법.제 10 항에 있어서, RNA 폴리머라아제 유전자는 숙주의 염색체에 통합되는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 발현 방법.제 15 항 또는 제 16 항에 있어서, RNA 폴리머라아제 유전자는 SP6 파이지로부터 유래하는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 발현 방법.제 10 내지 17 항 중 어느 한 항에 있어서, 목적 유전자가 숙주에 대하여 치명적인 또는 해로운 단백질을 코딩하는 목적 유전자의 발현 방법.제 10 내지 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 대장균을 숙주로 사용하는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 발현 방법.제 1 내지 8 항 중 어느 한 항에 따른 플라스미드 벡터를 목적 유전자의 단리방법에 사용되는 것을 특징으로 하는 목적 유전자의 단리 방법.제 20 항에 있어서, 목적 유전자가 숙주에 치명적이거나 해로운 단백질을 코딩하는 목적 유전자의 단리 방법.제 21 항에 있어서, 숙주에 치명적이거나 해로운 단백질을 코딩하는 유전자는 제한효소(restriction eddonuclease) 유전자인 목적 유전자의 단리 방법.서열 목록내 SEQ ID NO : 1에 나타낸 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함하고, AccIII 제한효소의 활성을 갖는 폴리펩티드.서열 목록내 SEQ ID NO : 1에 나타낸 아미노산 서열 또는 이의 일부에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 결실, 첨가, 삽입 또는 치환중의 하나 이상에 의해 생성되는 아미노산 서열을 갖고, AccIII 제한효소의 활성을 갖는 폴리펩티드.서열 목록내 SEQ ID NO : 1에 나타낸 아미노산 서열의 전부 또는 일부를 포함하고, AccIII 제한효소의 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA.서열 목록내 SEQ ID NO : 2에 나타낸 DNA의 전부 또는 일부를 함유하는 DNA이며, 이 DNA의 발현산물이 AccIII 제한효소 활성을 갖는 DNA.서열 목록내 SEQ ID NO : 1에 나타낸 아미노산 서열 또는 이의 일부에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 결질, 첨가, 삽입 또는 치환중의 하나 이상에 의해 생성되고, AccIII 제한효소의 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA.제 25 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 따른 DNA를 혼성화될 수 있고, AccIII 제한효소의 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA.