초록 ▼

본 인슈린 제조 개발연구의 2차년도 연구에서 사람 인슈린 유전자를 직접발현,oligopeptide-인슈린 유전자의 발현,β-gal'-인슈린유전자발현,β-gal"인슈린 유전자의 발현등으로 다각적인 fusion단백질을 제조하여 발현을 시도하였고,이를 위해 lac promoter,PL promoter등을 사용하여 transcription을 최적화 하였으며,이와 함께 IPTG의 유도물질에 의한 발현유도와 온도변화에 의한 발현유도를 시도하여 인슈린 유전자의 발현최적화를 도모하였다. 이중에서 β-gal"-인슈린 유전자를 tac promoter

본 인슈린 제조 개발연구의 2차년도 연구에서 사람 인슈린 유전자를 직접발현,oligopeptide-인슈린 유전자의 발현,β-gal'-인슈린유전자발현,β-gal"인슈린 유전자의 발현등으로 다각적인 fusion단백질을 제조하여 발현을 시도하였고,이를 위해 lac promoter,PL promoter등을 사용하여 transcription을 최적화 하였으며,이와 함께 IPTG의 유도물질에 의한 발현유도와 온도변화에 의한 발현유도를 시도하여 인슈린 유전자의 발현최적화를 도모하였다. 이중에서 β-gal"-인슈린 유전자를 tac promoter조절하에서 IPTG에 의해 발현유도를 하였을때에 가장좋은 결과가 나왔다. 앞으로 이를 이용하여 사람 인슈린제조에 이용할 수 있을 것으로 보며,또한 upstearm에서 새로운 실험전략과 계획하에서 계속 발현과 후속과정과의 연계 연구가 계속되어야 할 것이고,한편으로 본 연구에서 얻은 유전자 산물을 가지고 사람 인슈린 유전자 산물의 정제,인슈린 활성화,발효조건 최적화등의 과정을 통해 사람 인슈린 제조공정개발을 진행하여야 한다고 본다.

목차 Contents

• 제1장 서 론...9
• 제2장 실험재료 및 실험방법...12
• 1. 균주...12
• 2. 배지및 완충용액...12
• 3. 효소 및 생화합물...13
• 4. Oligonucleotide의 화학합성...13
• 5. Plasmid의 분리...13
• 6. Transformation...14
• 7. 서열분석...15
• 8. 발현...15
• 9. Radioimmunoassay...16
• 제3장 결과 및 고찰...17
• 제1절 인슈린유전자 발현...17
• 1. Reading frame의 조정...17
• 2. Reading frame의 확인...17
• 3. 인슈린 A와 B사슬의 유전자 발현...17
• 제2절 Oligopeptide-인슈린유전자 발현...22
• 1. Oligopeptide linker의 설계와 합성...22
• 2. 벡터의 재조합...22
• 3. Oligopeptide-인슈린유전자 발현...25
• 4. Radioimmunoassay...25
• 제3절 $\beta$-Galactosidase-인슈린 유전자들의 발현...33
• 1. PL Promoter에 의한 발현...33
• 가. 발현벡터조립...33
• 나. $\beta$-gal'-인슈린유전자 발현...36
• 2. tac promoter에 의한 발현...43
• 가. $\beta$-Gal'-인슈린유전자 발현...43
• 1) 발현벡터조립...43
• 2) $\beta$-gal'-인슈린유전자 발현...43
• 나. $\beta$-Gal''-인슈린유전자 발현...49
• 1) 발현벡터조립...49
• 2) $\beta$-Gal''-인슈린유전자 발현...49
• 제4장 결 론...53
• 참고문헌...54