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인슈린 제조 기술 개발(Ⅲ)
A Study for Human Insulin Production (III) 원문보기

보고서 정보
주관연구기관 한국과학기술연구원
Korea Institute Of Science and Technology
연구책임자 이대실
참여연구자 권석태 , 박병철 , 고석훈 , 고정헌 , 유계진
발행국가대한민국
언어 한국어
발행년월1989-08
주관부처 과학기술부
사업 관리 기관 한국생명공학연구원
Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology
등록번호 TRKO200200001878
DB 구축일자 2013-04-18
키워드 클로닝.발현.봉입체.재조립.Cloning.Expression.Inclusion Body.Reconstitution.

초록 ▼

현재 당뇨병(Diabetes Meuitus)치료에 쓰이는 인슈린이 주로 돼지의 췌장에서 분리한 것으로서 면역 부작용과 공급의 한계성으로 인하여 새로운 제조방법이 요청되던 바 유전공학기술의 도입이 필요하게 되었다. 본 연구는 1차로 사람 인슈린을 화학합성과 생화학조립을 통해 만든 다음 대장균 내로 도입하고 확인하였다(Cloning). 이어 미생물에 도입된 사람 인슈린 유전자를 적절하게 발현시켰으며(Expression), Inclusion Body형태의 발현 생성물을 분히하고, 시안화 브롬으로 개열한 다음 각 사슬의 정제를 시도하였다.

목차 Contents

  • 제 1 장 서론...10
  • 제 2 장 실험재료 및 방법...13
  • 제 1 절 실험재료 및 기기...13
  • 1. 균주...13
  • 2. 배지 및 완충용액...13
  • 3. 효소 및 생화합물...14
  • 4. 기기...15
  • 제 2 절 시험방법...15
  • 1. Oligonucleotide의 화학합성...16
  • 2. Plasmid의 분리 및 transformation...16
  • 3. 서열분석...16
  • 4. 발현...17
  • 5. SDS-PAGE...17
  • 제 3 장 발현의 최적화와 융합 단백질의 정제...18
  • 제 1 절 인슈린 유전자의 발현...18
  • 1. 벡터의 재조합...18
  • 2. $\beta-Gal'$-인슈린 유전자의 발현...18
  • 제 2 절 Proinsulin의 Cloning과 발현...23
  • 1. Proinsulin gene construction과 Cloning...24
  • 2. Proinsulin의 발현...24
  • 제 3 절 융합 단백질의 정제...24
  • 1. Cell extract의 정제...29
  • 2. Column chromatography를 이용한 inclusion body의 정제...29
  • 1) DEAE-Sephacel anion-exchange chromatography...29
  • 2) Sepharose-6B gel filtration chromatography...33
  • 3) DEAE-Sepharose C1/6B column chromatography...33
  • 3. Urea를 이용한 Solubilization (용해)...38
  • 제 4 장 시안화 브롬의 처리 및 각 사슬의 정제...40
  • 1. 반응의 조건...40
  • 2. 각 사슬의 정제...43
  • 제 5 장 Sulfitolysis...46
  • 제 6 장 인슈린의 재조합...50
  • 제 1 절 이론적 배경...50
  • 제 2 절 실험방법...52
  • 제 7 장 결론...55
  • 제 8 장 참고문헌...57

참고문헌 (25)

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