초록 ▼

정밀화학분야의 신물질 창출의 필요성이 누차 강조된바, 중추신경계, 심장순환계, 항생제, 항바이러스제, 항암제및 면역조절제 등 의약분야에서 신규의약품 개발에 필수적인 기본적인 약효스크리닝 기술을 개발하고자 하였다. 이를위해 기존의 약보다 우수한 약재개발이 요청되는 주요 영역에서 문헌조사, 연구원의 해외파견및 전문가자문을 통해 다양한방법을 확립하였다. 중추신경계 : 진통및 소염진통, 수용체결합반응, 독성및 행동관찰 ` 순환계 : 강심제개발을 위해 수용체결합반응, 항혈전제개발을 위해 항혈소판응집실험, 항고혈압제개발을 위해 개 생체실험법

정밀화학분야의 신물질 창출의 필요성이 누차 강조된바, 중추신경계, 심장순환계, 항생제, 항바이러스제, 항암제및 면역조절제 등 의약분야에서 신규의약품 개발에 필수적인 기본적인 약효스크리닝 기술을 개발하고자 하였다. 이를위해 기존의 약보다 우수한 약재개발이 요청되는 주요 영역에서 문헌조사, 연구원의 해외파견및 전문가자문을 통해 다양한방법을 확립하였다. 중추신경계 : 진통및 소염진통, 수용체결합반응, 독성및 행동관찰 ` 순환계 : 강심제개발을 위해 수용체결합반응, 항혈전제개발을 위해 항혈소판응집실험, 항고혈압제개발을 위해 개 생체실험법 ` 항생제 ` MIC 측정을 위해 수백종의 임상균주확보, 효소분석법및 조직분포측정법 ` 항바이러스제 : 다양한 간염바이러스확보및 활성검색법, 효소검색법및 치료계수 산출법 ` 항암제 : 인체및 생쥐암세포 다종 확보및 검색법의 개선 ` 면역조절제 : 약물과 면역계와의 상호작용 검색법등을 확립하였다. 본 연구결과 70여종의 스크리닝방법이 확립되어 년 2000종의 시료에 대한 검색이 가능케 되어 신의약품 창출에 크게 기여할 것으로 보인다.

Abstract ▼

The forth year of the project was performed with the scope and area of the study as follows.
1) Screening of drug activity on the central nerve system
2) Screening of cardiovascular drugs
3) Screening of microbiological activity of antibiotics in vivo and in vitro
4) Screening of antivir

The forth year of the project was performed with the scope and area of the study as follows.
1) Screening of drug activity on the central nerve system
2) Screening of cardiovascular drugs
3) Screening of microbiological activity of antibiotics in vivo and in vitro
4) Screening of antiviral and anticancer activities of the compounds
5) Screening of immumomodulating compunds

목차 Contents

• 제1장 중추신경계 약물의 약효평가 연구...59
• 제1절 서론...59
• 제2절 진동 및 소염진통 약물을 개발하기 위한 약효평가 방법 연구...60
• 1. 실험재료...60
• 가. 기계 및 기기...60
• 나. 시약...61
• 다. 동물...63
• 2. 실험방법...63
• 가. Analgesic activity 시험...63
• (1) Acetic acid-induced writhing...63
• (2) Randall and Selittos...64
• 나. Antiinflammatory activity 시험...65
• (1) Carrageenine edema...65
• 다. Narcotic antagonistic Study...65
• 라. Opiate receptor binding...66
• (1) 실험재료 및 방법...68
• A. 실험재료...68
• ⅰ) 동물...68
• ⅱ) 약물 및 시약...68
• B. Membrane Preparation...69
• C. Binding assay 방법...72
• 마. Time-response...77
• 바. Acute toxicity...77
• 사. Spontaneous locomotor activity...77
• 아. Gross-behavior...77
• 자. Local antiinflammatory activity...79
• 제3절 실험결과...79
• 1. Analgesic activity...79
• 1) Acetic acid-induced writhing...79
• 2) Randall and Selittos...82
• 2. Antiinflammatory activity...91
• (1) Carrageenine edema...91
• 3. Narcotic antagonistic activity...92
• 4. Opiate-receptor binding...92
• 5. Spontaneous locomotor activity...95
• 6. Time-response...100
• 7. Acute toxicity...103
• 8. Gross-behavior...111
• 9. Local antiinflammatory activity...113
• 제4절 결론 및 고찰...116
• 제5절 참고문헌...117
• 제6절 부록...118
• 제2장 심장순환계 약물 약효평가 기술(Ⅲ) 개발연구...128
• 서론...128
• Ⅰ. $\beta$-Receptor for Binding Assay에 대한 연구...130
• 제1절 서론...130
• 제2절 실험재료 및 방법...131
• 가. 실험재료...131
• (1) 기기 및 소도구...131
• (2) 시약...132
• (3) 실험동물 및 조직...133
• (4) membrance...133
• (5) Hot ligand...133
• (6) Co ligand...133
• (7) 시험 약물...133
• 나. 실험원리...133
• (1) Saturation 실험...133
• (2) Competition 실험...134
• 다. 실험 방법...134
• (1) membrane preparation...134
• (2) Saturation 실험...135
• (3) Competition 실험...136
• 제3절. 실험결과 및 고찰...136
• 가. Saturation 실험...136
• 나. Competition 실험...138
• 제4절 결론...140
• 제5절 참고문헌...142
• Ⅱ. 새로운 phosphodiesterase 억제제에 대한 항 혈소판 효과 연구...143
• 제1절 서론...143
• 제2절 실험재료 및 방법...145
• 가. 실험재료...145
• (1) 기기 및 소도구...145
• (2) 시약...145
• (3) 실험 동물...146
• 나. 실험 방법...146
• (1) Preparation of platelet rich plasma(PRP)...146
• (2) In vitro aggregometry...146
• (3) Ex vivo aggregometry...147
• 제3절 실험결과 및 고찰...148
• 가. Solvent (용매) 및 응집 inducer의 농도 결정...148
• 나. In vitro aggregometry...151
• 다. Ex vivo aggregometry...151
• 제4절 참고문헌...160
• Ⅲ. 마취 dog에 대한 새로운 강심제의 hemodynamic 효과...162
• 제1절 서론...162
• 제2절 실험재료 및 기기...163
• (1) 표준약물 및 시약...163
• (2) 시험물질...163
• (3) 실험동물...164
• (4) 사용기기...164
• 제3절 실험방법...164
• 제4절 실험결과 및 고찰...169
• 제5절 참고문헌...189
• Ⅳ. 부록...191
• A. 새로운 강심제의 Phosphodiesterase (PDE)에 대한 억제 효과 연구...191
• 1. Crude PDE에 대한 억제 효과 연구...191
• 1) 실험재료 및 방법...191
• 가. 실험재료...191
• (1) 실험동물 및 조직...191
• (2) 효소...191
• (3) 기질...191
• (4) 약물...191
• 나. 실험방법...191
• 2) 실험결과 및 고찰...192
• 2. PDEⅠ, Ⅱ, Ⅲ 각 isozyme에 대한 억제효과 연구...201
• 1) 실험재료 및 방법...201
• 가. 실험재료...201
• (1) 실험동물 및 조직...201
• (2) 효소...201
• (3) 기질...201
• (4) 약물...201
• 나. 실험방법...201
• (1) Enzyme Preparation...201
• (2) Enzyme 역가 및 약물효과 측정...201
• 2) 실험결과 및 고찰...202
• 가. PDE isozymes의 Chromatograohic profile 및 Kinetic Parameters...202
• 나. PDE 각 isozymes에 대한 약물의 억제효과...204
• B. 적출 장기 실험...215
• 1. 적출 좌심방과 우심방에 대한 inotropic & chronotropic effect 검색...215
• 1) 실험방법...215
• 2) 실험결과...216
• 2. 소 관상동맥 (Bovine coronary artery)에 대한 이완작용 검색...216
• 1) 실험방법...216
• 2) 실험결과...216
• 3.Guinea-Pig Langendorff 적출심장에 대한 작용 검색...217
• 1) 실험방법...217
• 2) 실험결과...217
• C. 선천성 고혈압쥐 (SHR)의 혈압 및 심박동수에 대한 새로운 강심제의 효과...232
• 1) 실험방법...232
• 2) 실험결과...232
• 제3장 항생물질의 약효평가 연구...237
• 제1절 서론...237
• 제2절 실험재료 및 방법...242
• 1. In vitro test...242
• 1) Clinically isolated 균주 대한 MIC test...242
• 가. 실험재료...242
• 나. 실험방법...243
• 2) $\beta$-lactamase assay...253
• 가. 실험재료...253
• 나. $\beta$-lactamase의 분리...253
• 다. $\beta$-lactamase에 의한 가수분해...254
• 라. PADAC assay...254
• 3) Gyrase assay...254
• 가. 실험재료...254
• 나. Gyrase 분리...257
• 다. Gyrase의 Supercoiling assay...258
• a. Topoisomerase Ⅰ 처리...258
• b. Supercoiling assay...258
• 2. In vivo test...259
• 1) Systemic infection model 의 조건설정...259
• 가. 실험재료...259
• 나. 실험방법...261
• 2) Systemic infection 후의 항생제에 대한 치료 효과...261
• 가. 실험재료...261
• 나. 실험방법...261
• 3) 항생제의 조직내 분포...262
• 가. 실험재료...262
• 나. 실험방법...262
• 제3절 결과 및 고찰...265
• 1. In vitro test...265
• 1) Clinically isolated 균주 대한 MIC test...265
• 2) $\beta$-lactamase assay...266
• 3) Gyrase assay...282
• 2. In vivo test...283
• 1) Systemic infection model 의 조건 설정...283
• 2) Systemic infection 후의 항생물질의 항균 효과...286
• 3) 항생제의 조직내 분포...287
• 제4절 결론...289
• 제5절 참고문헌...290
• 제6절 부록...292
• 제4장 항 Virus약물 약효검색 기술 개발 연구(Ⅲ)...293
• 제1절 서론...293
• 제2절 실험재료 및 방법...297
• 1. 실험재료...297
• 2. 실험방법...300
• 제3절 결과 및 고찰...304
• 1. 시험약물의 항 Virus 역가시험...304
• 2. 시험 Virus의 다양화...305
• 3. 약물의 세포독성 검사와 therapeutic index 산출...306
• 4. Reverse transcriptase inhibition assay...310
• 제4절 결론...314
• 제4절 참고문헌...315
• 제5장 항암제 Screening 기술개발에 관한 연구(Ⅱ)...318
• 제1절 서론...318
• 제2절 In Vitro screening 기술개발...320
• 1. 약효 평가 기술...320
• 2. Human Tumor Cell line panel in NCI...325
• 제3절 실험재료 및 방법...328
• 1. 세포 배양...328
• 가. 실험재료...328
• 나. 실험방법...330
• 2. Dye Exclusion Assay...331
• 가. 실험재료...331
• 나. 실험방법...331
• 3. SRB Assay...332
• 가. 실험재료...332
• 나. 실험방법...333
• 다. 결과계산...335
• 제4절 결과 및 고찰...336
• 1. Dye Exclusion Assay...336
• 2. SRB Assay...341
• 제5절 결론...347
• 제6절 참고문헌...348
• 제6장 면역조절제의 약효평가 연구...351
• 제1절 서론...351
• 제2절 실험재료 및 방법...353
• 1. In vitro법...353
• 1) 실험동물...353
• 2) 세포배양액...353
• 3) Cell lines...353
• 4) 비장세포의 조제...354
• 5) mitogenic effect test...354
• 6) Con A 및 LPS와의 상관반응 실험...355
• 7) mixed lymphocyte reactions...355
• 8) Colony forming Unit per Culture(cfu-c) assay...356
• 2. In vivo 법...357
• 1) Direct plaque forming cell assay...357
• 가) 실험재료 및 기구...357
• 나) 실험방법...359
• 2) Indirect plaque forming cell assay...359
• 가) 실험재료 및 기구...359
• 나) 실험방법...359
• 3) Graft vs Host Reaction test...359
• 가) 실험재료 및 기구...359
• 나) 실험방법...360
• 4) Delayed type hypersensitivity test...361
• 가) 실험재료 및 기구...361
• 나) 실험방법...361
• 5) Systemic infection에 대한 약물효과...362
• 가) 실험재료...362
• 나) 실험방법...362
• 제3절 결과 및 고찰...363
• 1. In Vitro법...363
• 1) Mitogenic effect test...363
• 2)Con A 및 LPS와의 상관 반응 실험...363
• 3) mixed lymphocyte rection...366
• 4)Colony forming Unit per culture assay...369
• 2. In vivo 법...373
• 1) Direct plaque forming cell assay...373
• 2) Indirect plaque forming cell assay...375
• 3) Graft vs Host reaction...375
• 4) Delayed type hypersensitivity test...379
• 5) Systemic infection에 대한 약물의 효과...379
• 제4절 결론...381
• 제5절 참고문헌...382