초록 ▼

수산동물은 사후 효소의 작용에 의한 자가 소화가 빨리 일어나며 미생물의 작용에 의한 부패 또한 육상동물에 비하여 빨리 일어난다. 그래서 수산동물이 장기조직중에 분포하고 있는 단백질 분해효소를 정제하고 그 특성을 조사함과 동시에 이들 수산동물에 내재하여 있는세균중에서 단백질분해능이 제일 강한 균주를 선정하여 이 균이 생산하는 효소의 특성을 밝히는 것은 수산물의 선도유지 및 효소이용방안을 강구하는데, 꼭 필요하다. 본 실험에서는 수산동물중 낙지, 전복, 소라, 군소, 해삼, 개불, 말쥐치, 두톱상어, 먹장어, 고등어, 정어리 등의

수산동물은 사후 효소의 작용에 의한 자가 소화가 빨리 일어나며 미생물의 작용에 의한 부패 또한 육상동물에 비하여 빨리 일어난다. 그래서 수산동물이 장기조직중에 분포하고 있는 단백질 분해효소를 정제하고 그 특성을 조사함과 동시에 이들 수산동물에 내재하여 있는세균중에서 단백질분해능이 제일 강한 균주를 선정하여 이 균이 생산하는 효소의 특성을 밝히는 것은 수산물의 선도유지 및 효소이용방안을 강구하는데, 꼭 필요하다. 본 실험에서는 수산동물중 낙지, 전복, 소라, 군소, 해삼, 개불, 말쥐치, 두톱상어, 먹장어, 고등어, 정어리 등의 소화관, 근육 장기조직을 구분하여 단백질 분해효소를 축출하여 그 활성을 측정한 결과 고등어 유문수에서 활성이 강한 세종류의 알칼리성 단백질 분해효소를 분리 정제하였는데, 이들 효소의 활성 최적조건, 기질친화성 분자량등을 규명하였다. 또 시료동물에서 분리된 세균중 단백질분해능이 제일 강한 Pseudomonas Fu 101 균을 찾아내어 이 균이 생산한 균체외 단백질 분해효소의 특성을 규명하였는데 앞으로 이 균이 생산한 효소의 활용방법을 규명하기 위한 좋은 자료를 얻었음.

Abstract ▼

Proteolytic activity of the tissue extracts from the octopus (Octopus variabilis), abalone (Haliotis discus),top shell (Turbo cornutus), sea hare (Aplysia kurodai), sea cucumber (Stichopus japonicus), echiurid (Urechis unicinctus), file fish (Navodon modestus), cat shark (Scillion hinus tarazame), h

Proteolytic activity of the tissue extracts from the octopus (Octopus variabilis), abalone (Haliotis discus),top shell (Turbo cornutus), sea hare (Aplysia kurodai), sea cucumber (Stichopus japonicus), echiurid (Urechis unicinctus), file fish (Navodon modestus), cat shark (Scillion hinus tarazame), hag fish (Eptatretus burgeri), mackerel (Scomber japonicus) and sardine (Sardinops melanosdicta) was compared to develope a useful enzyme.
The strongest proteolytic bacterium among the isolated strains from the samples submitted, then the proteolytic exoenzyme produced by the selected bacterium was also characterized.
Among the tissue enzymeextracts, the proteolytic enzymes from the pyloric caeca of mackerel and pancreas of sardine were estimated as strong alkaline proteinases. The optimum pH and temperature of the crude enzyme extracted with 1% NaCl from the pyloric caeca of mackerel and pancreas of sardine was pH 9.4, 9.8 and 50℃, 45℃, respectively. Specific activity of the former enzyme was 275 nM-Tyr. eq/mg-protein/min and that of later one was 360 nM-Tyr. eq/mg-protein/min.
Three kinds of alkaline proteases were isolated from the pyloric caeca of mackerel, we named those enzymes as enzyme A,B and C. Molecular weight of enzyme A,B and C determined by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and Sephadex G-100 gel filtration method was to be 27,500, 20,500 and 15,250, respectively. Km value of enzyme A,B and C by the method of Lineweaver and Burk was determined to be 5.0x10?? %, 1.0x10 % and 3.3x10?? %, respectively, for 2% casein solution as a substrate.
According to the analytical results, these three enzymes were observed to be composed of monomeric polypeptide. The enzyme B and C were supposed to be a serine protease because of these enzymes were remarkbly inhibited by soybean trypsin inhibitor.
Pseudomonas spp. (named pseudomonas FU 101) was identified as the strongest proteolytic bacterium among the isolated straius whicll grew best at 25℃, pH 7.5.
It is observed that addition of 0.2% CaCl? and0.5% NaCl in the culture medium was benefitted for the production of protease by Pseudomonas FU 101. The extracellular protease produced by the strain was supposed to be a kind of metal chelator sensitive neutral protease,and it stlowed maximum activity at 35℃, pH 7.0, 29,000 in molecular weight by gel filtration.
As a conclusion, bacterial protease produced by Pseudomonas FU 101 was more benefit than the mackerel tissue enzyme for inclustrial use, because it is easy to control the bacterial growth, while it is very difficult to supply continuously a lots of pyloric caeca of mackerel for enzyme extraction.

목차 Contents

• 서론...9
• 재료 및 방법...10
• 1. 재료...10
• 2. 방법...12
• 2.1 효소의 추출 및 정제...12
• 2.2 효소반응 기질의 조제...15
• 2.3 효소반응...16
• 2.4 미생물 생산효소의 추출과 활성도...17
• 결과 및 고찰...22
• 1. 각동물 종별 단백질 분해조효소의 활성비교...22
• 1.1 연체동물...22
• 1.2 어류...22
• 2. 고등어 유문수 조직으로 부터 알카리성 단백질분해 효소의 정제...29
• 3. 세균이 생산한 단백분해효소의 정제...38
• 3.1 세균의 효소생산...38
• 3.2 세균효소의 정제...38
• 3.3 세균효소의 특징...39
• 참고문헌...47