초록 ▼

수질 환경오염의 가장 큰 비중을 차지하고 있는 합성세제의 여러 문제를 해결하기 위하여, 새로운 무공해 효소세제의 개발은 매우 중요하다. 특히 의류에서 유기오염물의 14 ∼ 40%인 단백질을 분해시키기 위하여 사용되는 효소세제는 증가되고 있으나, 전량 수입에만 의존하여 국내에 공급되고 있다. 세제는 10∼12정도의 높은 pH와, Na?, K?과 같은 고농도 무기염때문에 세제로써 사용되는 효소는 높은 pH와 고농도의 무기염 존재하에서 안정하여야 한다. 이와같은 조건을 고려하여 충남대학교 농과대학 식품미생물학실험실에서 분리한

수질 환경오염의 가장 큰 비중을 차지하고 있는 합성세제의 여러 문제를 해결하기 위하여, 새로운 무공해 효소세제의 개발은 매우 중요하다. 특히 의류에서 유기오염물의 14 ∼ 40%인 단백질을 분해시키기 위하여 사용되는 효소세제는 증가되고 있으나, 전량 수입에만 의존하여 국내에 공급되고 있다. 세제는 10∼12정도의 높은 pH와, Na?, K?과 같은 고농도 무기염때문에 세제로써 사용되는 효소는 높은 pH와 고농도의 무기염 존재하에서 안정하여야 한다. 이와같은 조건을 고려하여 충남대학교 농과대학 식품미생물학실험실에서 분리한 Halomonas sp. ES10과 Alteromonas sp. CN301균주를 이용하여 알카리성 protease를 생산하였다. Protease 조효소를 무수 황산염 등으로 coating한후 효소세제의 pH,온도, 안정성 등과 builders, actives, fillers, adjuvant와 같은 각종 첨가제의 처리에 의한 효소역가의 변화와 첨가제의 최적농도를 조사하였다. 조효소를 이용하여 세제를 제조한 Halomonas sp. ES10과 Alteromonas sp. CN301의 알카리성 protease의 특성을 보다 구체적으로 연구하기 위하여 이 효소를 정제하고 그 정제효소의 효소학적 및 생화학적 특성을 조사하여 보고하는 바이다.

Abstract ▼

Development of pollution-free enzyme detergent is very significant in order to solve various problem of synthethic detergent, which is presently the major cause of water environmental pollution. Utilization of enzyme detergent to decompose protein that 14∼40% of the organic pollutant in clothes is

Development of pollution-free enzyme detergent is very significant in order to solve various problem of synthethic detergent, which is presently the major cause of water environmental pollution. Utilization of enzyme detergent to decompose protein that 14∼40% of the organic pollutant in clothes is increased, but all the enzyme detergent us known to be entirely imported from foreign countries. Because detergent solution is a strong base in the range of pH 10∼12 and high ionic concentration due to the presence of Na, K, enzyme used for detergent must be stable in those conditions. By considering those enzymatic characters as a detergent, crude alkaline protease from both strain Halomonas sp. ES10 and Alteromonas sp. CN301, which was isolated from food microbioloby Lab., College of Agriculture, Chungnam National University, were produced in the optimum culture conditions. After coating with anhydrous sodium sulfate, etc., stabilities from various pH and temperatures, enzyme activities after treated with such additives as builder, actives, filler, and adjuvent, and the best concentration of additives were investigated. Alkaline protease from Halomonas sp. ES10 and Alteromonas sp. CN301 were homogeneously purified and purified alkaline proteases from both strains were enzymetically and biochemicaly further characterized.

목차 Contents

• 1. 서 론...14
• 2. 자료 및 방법...15
• 1. 균주...15
• 2. 배지...15
• 3. 조효소의 생산...15
• 4. 조효소의 coating...16
• 5. 조효소의 세척력 측정...16
• 6. Savinase 6.OT와의 세척력 비교...17
• 7. 각종 세제 첨가성분의 검토...17
• 1) Bilders...17
• 2) Actives...17
• 3) Fillers...17
• 4) Adjuvants...17
• 8. 세척 조건 검토...18
• 1) 최적 온도...18
• 2) pH...18
• 3) 작용 시간...18
• 4) 효소 농도...18
• 5) 유효 기간...18
• 10. $\alpha$-amylase 및 lipase 의 활성...18
• 11. 단백 분해 효소의 정제...18
• 1) Alteromonas sp. CN301의 정제...18
• (1) Ammonium sulfate 침전...18
• (2) DEAE sephadex A-50 chromatography...19
• (3) Sephadex G-150 culumn Chromatography...19
• 2) Haomonas sp.ES10 균주가 생산하는 alkaline protease의 정제...19
• (1) Methanol에 의한 침전...19
• (2) 겔 여과...19
• (3) 이온 교환 크로마토그라피...19
• 12. 정제 효소의 특성...20
• 1) Alteromonas sp. CN301 균주가 생산하는 alkaline proteas의 특성...20
• (1) 순도...20
• (2) Michaelis 정수...20
• (3) 최적 온도 및 pH...20
• (4) 온도 및 pH 안정성...20
• (5) 분자량...21
• (6) 금속 이온의 영향...21
• (7) 계면 활성제의 영향...21
• (8) Inhibitor의 엉향...21
• 2) Haomonas sp.ES10 균주가 생산하는 alkaline proteas의 특성...21
• (1) 순도...21
• 1. PAGE...21
• 2. HPLC에 의한 순도 시험...22
• (2) Activity 염색...22
• (3) Periodic Acid Schiff (PAS) 염색...22
• (4) 분자량 측정...22
• (5) 등전점 측정...23
• (6) 아미노산 조성...23
• (7) N-말단 아미노산의 분석...23
• (8) 금속 이온의 분석...24
• (9) 최적 온도와 pH...24
• (10) 온도 및 pH 안정성...24
• (11) Michaelis 정수...24
• (12) 염화나트륨 농도에 의한 영향...24
• (13) 금속이온의 영향...25
• (14) 계면활성제의 영향...25
• (15) 저해제의 영향...25
• (I6) 기질 특이성...25
• 3. 결과 및 고찰...26
• 1. 조효소의 생산...26
• 2. coationg 한 조효소의 세척력...26
• 3. Savinase 6.OT와의 세척력 비교...27
• 4. 세제 조성의 검토...28
• 1) Bilders...28
• 2) Actives...29
• 3) Fillers...31
• 4) Adjuvants...33
• 5. 세척 조건의 영향...34
• 1) 세척 온도...34
• 2) 세척액의 pH...35
• 3) 작용 시간...36
• 4) 효소 첨가 농도...37
• 6. 효소의 유효 기간...37
• 7. Halomonas sp.ES10과 Alteromonas sp. CN301의 $\alpha$-amylase 및 lipase의활성...38
• 8. 효소의 정제...38
• 9. 정제 효소의 특성...41
• 4. 결 론...73
• 5. Reference...76