60종의 자생약용식물과 식용작물을 대상으로 항산화활성, 항종양활성 등의 생리할성을 조사함으로써 약용식물과 식용작물의 유용적인 측면의 확인뿐만 아니라 나아가서 새로운 생리활성물질 탐색의 가능성을 검토하기 위해서 실험하였으며 그 결과는 다음과 같다.자생약용식물 및 식용작물에 대한 80% EtOH 추출물을 사용하여 TBA법, DPPH법,SOD법으로 항산화 효과를 그리고, PKC법, PLC법, p-338 cell line을 이용한 MTT법으로항종양효과를 검색한 결과 실험에 사용된 모든 추출물에서 항산화력 및 항종양활성을 보였으며
60종의 자생약용식물과 식용작물을 대상으로 항산화활성, 항종양활성 등의 생리할성을 조사함으로써 약용식물과 식용작물의 유용적인 측면의 확인뿐만 아니라 나아가서 새로운 생리활성물질 탐색의 가능성을 검토하기 위해서 실험하였으며 그 결과는 다음과 같다.자생약용식물 및 식용작물에 대한 80% EtOH 추출물을 사용하여 TBA법, DPPH법,SOD법으로 항산화 효과를 그리고, PKC법, PLC법, p-338 cell line을 이용한 MTT법으로항종양효과를 검색한 결과 실험에 사용된 모든 추출물에서 항산화력 및 항종양활성을 보였으며 항산화효과는 TBA법과 DPPH법에 방법간에 차이는 있으나 TBA법과 SOD법에서는검정콩(87.3%와 53.5%), DPPH법에서는 까마중(80.6%)이 가장 강한 활성을 보였으며 결명자, 달맞이꽃, 박하, 복숭아, 상추, 음양곽, 주목, 포도, 푸른콩 추출물은 두 가지 검정에서 공통적으로 산화억제력을 강하게 보여 주었다. 항종양효과를 보면 PKC법에서는 명아주(73.5%) 및 bleb형성억제력과 PLC법에서는 검정콩(81%, 91.9%), MTT법에서는 50%의 억제력을 나타내는 농도(IC50)가 검정콩과 쑥의 경우 각각 4.7㎍/㎖을 보였다.이상의 여러 가지 활성검정의 결과를 통계 분석한 결과 검정콩 종실에 존재하는 여러가지 물질중 항산화 및 항종양활성과 밀접한 관련이 있는 것으로 알려진 saponin인 DDMPsaponin βg을 종실로부터 HPLC을 이용하여 분리하여 그 화학적구조를 Mp, UV, IR,NMR, FAB-MS등 분광확적방법으로 확인한 결과 분자량 1068, 분자식 C54H84O21인 물질로서 동정되었으며 산가수분해에 의해서 얻어진 당의 TLC분석에 의해서도 당의 존재를 알수 있었다. HPLC에 의한 순도는 99.7%를 보였으며, 표준 검량선 방정식은y=161.0+79.350X (r=0.996)이었다. 검정콩에 대해서 정량 분석한 결과 6.2㎎/g(0.62%)을 함유하고 있는 것으로 나타났다. TLC분석결과는 품종에 따라 차이가 있으나 DDMPsaponin이외 다른 종의 saponin의 존재가능성을 보였으며 순수분리 정제된 DDMP saponinβg을 이용하여 TBA법 DPPH법에의한 인위적인 항산화제인 BHA와의 비교 실험에서도 농도에 따라 차이는 있었으나 산화억제 효과가 우수하였으며 N18-RE-105 neuronal cell line을 이용한 glutamate에 의한 세포독성억제 실험에서도 효과가 인정되었으며 ames test에서는 사용된 균주에 따라서는 반응이 다르기는 하나 거의 100% 억제력을 보였고, MTTassay에 의한 IC50 value는 2.7㎍/㎖에서 억제활성을 보여 세포계에서도 억제활성이 있다는것을 확인 할 수 있었다.이러한 일련의 실험 결과는 앞으로 검정콩에 대한 saponin 고함유 우량품종 육성효율을 증진 시키는데 크게 기여 할 것으로 생각되며 또한 본 실험을 통해서 얻어진 정보을 근거로 saponin에 대한 분리, 동정 기술을 연구기관에 기술이전함과 더불어 순수 분리 동정된 콩 saponin을 이미 보급시킨 적도 있어 앞으로 콩 saponin에 대한 연구가 매우 활성화될 것으로 믿으며 실제로 연구기관에서도 본 연구자가 보급시킨 콩 saponin에 대한 연구가매우 활발하게 진행되고 있다. 일본에서도 이 콩 saponin에 대한 연구가 매우 광범위하고심도있게 진행되고 있어 우리도 이에 대한 연구를 좀 더 체계적으로 광범위하게 수행해야할것으로 생각된다.
Abstract▼
This project objective was to screen for antioxidant andantitumoral activity test by in vitro bioassay method among 60 Korea native medicinaland food crops and was to separate and identify the bioactive compound from selectedplants showing strong activity from screening test.The 80% EtOH ext
This project objective was to screen for antioxidant andantitumoral activity test by in vitro bioassay method among 60 Korea native medicinaland food crops and was to separate and identify the bioactive compound from selectedplants showing strong activity from screening test.The 80% EtOH extracts of sixty medicinal and food plants which were originatedin Korea were screened for antioxidant and antitumoral activity test. Antioxidant andantitumoral activity test was applied by the TBA, DPPH, SOD and PKC and blebformation inhibition, PLC, MTT methods. In the antioxidant test, black Glycinemax(87.3%) and Solanum nigrum(80.6%) exhibited the highest antioxidant activity byTBA and DPPH method, respectively. The SOD characteristics on black Glycine maxshowed the highest SOD activity(53.5%) and exhibited four major SODs twoCu/ZnSODs and two FeSODs. In the antitumoral activity test, Chenopodiumalbum(73.5) and black Glycine max(81%) showed against PKC by antibleb-formingassay and PKC enzyme assay on human chronic leukemia K562 cell and black Glycinemax(91.2%) was highest in the PLC method. Also, black Glycine max(4.7μg/ml)showed the lowest IC50 value by MTT method against P-338 cell line. In the effectof the concentration treatment on antioxidant and antitumoral test, as the concentrationincrease the activity value increased.To separate bioactive compound from the black Glycine max seed which wasshowed the highest inhibition percentage in the antioxidant and antitumoral activity testswas applied by chromatographic techniques and HPLC method. DDMP saponin βg,one of the the most available components, was identified by the basis of theirphysio-chemical properties and spectroscopic data like MP, UV, IR, NMR and FAB-MS.The compound molecular weight was 1068 (C54H84O21). Purity and equation of theregression coefficients for DDMP saponin βg were 99.7% and y=161.0+79.350x (r=0.996).Quantitative analysis was done by HPLC to determine DDMP saponin βg content was6.2mg/g (0.62%). The result of TLC analysis exhibited the possibility of anothersaponin existence. The DDMP saponin βg had the strong effect on antioxidantsactivity in the TBA, DPPH methods comparing with BHA and against glutamateinduced cytotoxicity in the N18-RE-105 neuronal cell line and MTT which IC50 was 2.7μg/mL and Ames assay in the antitumoral activity test showed very effective on tumorcontrol.This research study contribute to the establishment of international competitionsability and to the income increase through the efficiency of breeding high qualitysoybean variety having especially saponin content, DDMP saponin βg, among bioactivecompounds soybean We have established the very useful technique in mass analysissystem and transferred the technique other research institute and school. In the futurewe will focus on the possibility of medicinal usage for this compound.
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