초록 ▼

1. 10종의 마우스 유래 CTL epitope을 함유하는 융합 단백질 발현
□ 연구수행방법(이론적·실험적 접근방법)CMB-Mal fusion proteins
○ Construction of expression vector encoding fusion proteins
○ Expression in bacterial system
○ SOS PAGE ＆ Western Blot
○ Purification with Ni column
□ 구체적인 방법malaria의 다양한 stage에서 발현되

1. 10종의 마우스 유래 CTL epitope을 함유하는 융합 단백질 발현
□ 연구수행방법(이론적·실험적 접근방법)CMB-Mal fusion proteins
○ Construction of expression vector encoding fusion proteins
○ Expression in bacterial system
○ SOS PAGE ＆ Western Blot
○ Purification with Ni column
□ 구체적인 방법malaria의 다양한 stage에서 발현되는 protein 유래 CTL epitope을 다양한 set로 CTB와 fision을
시킨 융합단백질의 DNA를 cloning하고 이를bacterial expression system을 이용하여 발현하고, anti-histag mAb
를 이용하여 확인을 한 후 Ni-column을 이용하여 purification을 하였다

2. CTL epitope 검증
□ 연구수행방법(이론적·실험적 접근방법)malaria mouse epitope
○ In virto Binding Assay with RMA/S
□ 구체적인 내용1차년도에 선정한 CTL epitope의 MHC mulecule class 1에 대한 binding affinity를 확인하기 위하
여 in vitro 상에서 H-2K/sup b/에 합성한peptide를 binding 시킨 뒤 이를 FACS를 이용하여 분석하였다

3. Protein-based vaccine을 이용한 동물실험
□ 연구수행방법(이론적·실험적 접근방법)
○ Immunization with proteins
○ Analysis of CD8 T cells/CD4 T cells Ratio- Preparation of splenocytes- FACS analysis
○ CTL activity assay- Preparation of splenocytes- IFN-γ based ELISPOT
○ Analysis of activated CTL- Preparation of splenocytes- FACS analysis
□ 구체적인 내용CTB와 malaria mouse epitope으로 구성된 fusion protein을 C57BL/6 mice에 immunization을 한
뒤 splenocyte를 얻었다. 이를 가지고protein vaccine에 의하여 CTL이 induction되고 expansion을 하였는지 그
것들이 protein에 포함된 epitope에 specific한 CTL인지를 IFN-γbased ELISPOT을 수행하여 알아보았다

4. CTB의 Adjuvant 효과 확인
□ 연구수행방법(이론적·실험적 접근방법)
○ Immunization with CTB protein
□ 구체적인 내용CTB protein만을 mice에 주입하여 그것으로 인한 splenocyte. 특히 CTL의 양적 변화와 질적 변화
를 FACS와 IFN-γ based ELISPOT을 통하여 알아보았다

목차 Contents

• I. 2 차년도 실적...3
• II. 계 획...10
• 1. 국내외 관련분야의 환경변화...10
• 2. 연구개발 목표 및 내용...11
• 3. 연구추진내용...12
• 4. 연구 평가시 착안점 및 척도...12
• 5. 참여연구원 현황...13
• 6. 기타 주요 변경사항...13
• 7. 연구비 소요명세서...14