초록 ▼

${\circ}$ 주요양식어류로부터 총 10개의 유용유전자를 분리, 확보한다.
* 성장호르몬 cDNA 유전자 분리 : 주요양식어류(조피볼락, 붉바리, 능성어, 돌돔, 넙치류, 참복, 뱀장어, 쏘가리)중 4종으로부터 분리
* Insulin-like growth factor (IGF-1) : 8종의 주요양식어류(조피볼락, 붉바리, 능성어, 돌돔, 농어, 참복, 뱀장어, 쏘가리) 중 3종으로부터 분리
* Zebrafish로부터 내병성관련 cDNA 유전자인 transferrin과 thioredoxin 유

${\circ}$ 주요양식어류로부터 총 10개의 유용유전자를 분리, 확보한다.
* 성장호르몬 cDNA 유전자 분리 : 주요양식어류(조피볼락, 붉바리, 능성어, 돌돔, 넙치류, 참복, 뱀장어, 쏘가리)중 4종으로부터 분리
* Insulin-like growth factor (IGF-1) : 8종의 주요양식어류(조피볼락, 붉바리, 능성어, 돌돔, 농어, 참복, 뱀장어, 쏘가리) 중 3종으로부터 분리
* Zebrafish로부터 내병성관련 cDNA 유전자인 transferrin과 thioredoxin 유전자 분리
* 백터 개발을 위한 promoter로서 대상어류의 $\beta-actin$ 유전자 분리
- 연구대상 어류의 재조합 성장호르몬 단백질 생산한다.
- 재조합 단백질을 급이하거나 벡터 주입 실험을 통하여 성장효과를 검증한다.
- 연구대상 어류의 속성장 형질전환어류를 생산한다.
- 모델어류를 이용하여 내병성 유전자로 형질전환시킨 후 감염실험을 통해 효과를 검증한다.
- 연구대상 어류의 세포배양법 확립한다.
- 형질전환어류 및 재조합성장호르몬 급이 어류의 식품으로서의 안전성을 검증한다.

Abstract ▼

${\circ}$ Separation of total 10 useful genes from major hatchery fishes.
* Separation of the growth hormone cDNA genes from 4 out of 8 fishe species (black rock fish, red grouper, seven banded grouper, rock bream, flatfishes, purple puffer, eel, mandarin fish).
* Separation of the

${\circ}$ Separation of total 10 useful genes from major hatchery fishes.
* Separation of the growth hormone cDNA genes from 4 out of 8 fishe species (black rock fish, red grouper, seven banded grouper, rock bream, flatfishes, purple puffer, eel, mandarin fish).
* Separation of the Insulin-like growth factor (IGF-1) from 3 out of 8 fish species (black rock fish, red grouper, seven banded grouper, rock bream, sea bass, purple puffer, eel, mandarin fish).
* Separation of cDNAS of transferrin and thioredoxin from the zebrafish.
* Separation of $\beta-actin$ gene to be used as a promoter in the expression vector.
- Production of recombinant growth hormone from a selected fish.
- Growth effects are verified by either the administration of recombinant proteins or microinjection of the constructed vector.
- Production of a fast-growing transgenic fish.
- Grow effects are verified with the disease resistant transgenic zebrafish through a challenge test.
- Establishment of cell culture method of the olive flounder.
- Safety verification of transgenic fishes and the fishes provided recombinant growth hormone as food fishes.

목차 Contents

• 제 1 장 연구개발과제의 개요...20
• 제 1 절 연구개발 목적 및 필요성...20
• 1. 기술적 측면...20
• 2. 경제.산업적 측면...23
• 3. 사회.문화적 측면...24
• 제 2 절 연구개발 범위...25
• 1. 연차별 연구목표 및 범위...25
• 2. 최종 연구목표 및 범위...26
• 제 2 장 국내외 기술개발 현황...27
• 제 1 절 국외 기술현황...27
• 제 2 절 국내 기술현황...29
• 제 3 절 문제점...30
• 제 4 절 앞으로의 전망...31
• 제 3 장 연구개발 수행 내용 및 결과...32
• 제 1 절 연구방법...32
• 1. 성장과 내병성 관련 유전자의 cloning 및 염기서열 결정...32
• 2. 재조합 성장호르몬의 생산...36
• 3. 형질전환 어류생산...39
• 4. 유용유전자 단백질의 경구 투여에 의한 성장효과...41
• 5. Transgenic fish의 유전자 이식 및 발현 확인...42
• 6. 어류병원성 세균 균주 확보 및 감염시험을 통한 내병성 검정...42
• 7. 어류세포의 배양법 확립...45
• 제 2 절 연구내용 및 결과...47
• 1. 유용유전자 분리...47
• 가. 성장호르몬 유전자...47
• 나. 베타액틴 유전자...85
• 다. Insulin-like growth factor...111
• 라. Natural killer cell enhancement factor (NKEF) 유전자...113
• 마. 내병성관련 유전자인 zebrafish의 transferrin 유전자 분리...113
• 바. 주요 양식대상어종의 transferrin 유전자 단편 분리...115
• 2. 재조합 성장호르몬의 생산...116
• 가. 서론...116
• 나. pET expression system을 이용한 돌돔 성장호르몬의 발현 및 분리...117
• 다. 돌돔 재조합 성장호르몬의 급이에 의한 성장효과 검정실험...122
• 3. 분리된 베타액틴 유전자를 이용한 이식벡터개발...126
• 가. 유전자 이식 백터 개발...126
• 나. 형질전환 어류생산 조건의 최적화와 생잔율의 비교...128
• 다. 모델 어류 내에서의 재조합 형질전환 백터(pFV4aEGF-GH)의 발현 양상...128
• 4. 분리 병원균의 병원성 시험...134
• 5. 순환여과수조에서 수정란 확보를 위한 감성돔 친어관리 및 산란 유도...139
• 가. 서론...139
• 나. 친어의 확보와 사육...140
• 다. 산란유도...141
• 라. 난 침강률 측정...143
• 마. 난 부화율 측정...144
• 바. 치어의 생존율 측정...145
• 사. 고찰...146
• 6. 해산어류 세포의 계대배양기술개발 및 재조합 단백질의 식품 안전성...149
• 가. 어류세포의 분리 및 배양조건 확립...149
• 나. 쥐의 재조합 성장호르몬의 급성독성 검정...156
• 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도...160
• 제 5 장 연구개발 결과의 활용계획...161
• 제 6 장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...162
• 제 7 장 참고문헌...173