초록 ▼

o 면역진단기법을 이용하여 현장에서 손쉽게 분석 가능한 각종 진단 kit의 개발이 가능하여 식중독 발생을 사전에 방지
o 확보된 항체 개발기술을 바탕으로 국내에 발생빈도가 높은 식중독 균에 대한 항체개발과 ELISA법을 확립할 수 있는 기초를 마련
o workshop을 통하여 개발된 ELISA kit을 소개 및 소비자 반응 조사하여 개선점을 도출하고 실제 현장에 도입함으로서 식중독 원인균의 신속한 모니터링으로 이들의 위해평가와 대책 수립이 가능
o Listeria monocytogenes등 주요 식중독 원인 세균들의

o 면역진단기법을 이용하여 현장에서 손쉽게 분석 가능한 각종 진단 kit의 개발이 가능하여 식중독 발생을 사전에 방지
o 확보된 항체 개발기술을 바탕으로 국내에 발생빈도가 높은 식중독 균에 대한 항체개발과 ELISA법을 확립할 수 있는 기초를 마련
o workshop을 통하여 개발된 ELISA kit을 소개 및 소비자 반응 조사하여 개선점을 도출하고 실제 현장에 도입함으로서 식중독 원인균의 신속한 모니터링으로 이들의 위해평가와 대책 수립이 가능
o Listeria monocytogenes등 주요 식중독 원인 세균들의 염기서열 특성에 기초한 PCR 기법을 사용하여 동시진단 가능한 분자생물학적 기술을 개발함
o 총 10종의 식중독균 동시 검출용 올리고 마이크로어레이 칩을 제작하였으며, 이 중 7종 이상을 검출 하였으며, Clostridium perfringens과 E. coli는 지금까지 보고된 것 중 가장 고감도의 검출을 실현함
o L. monocytogenes균의 야채류 중 초기 오염 수준 조사, broth와 야채류에서의 예측미생물모델(predictive microbial mode) 개발, 전이율 예측을 통한 노출량 예측, 식중독균의 용량-반응평가 등을 통한 미생물위해평가(MRA)를 실시, 위해관리 방안 마련

Abstract ▼

I. BACKGROUND AND PURPOSE Of THE RESEARCH
- Development of speedy and simultaneous qualitative and quantitative methods for detection of foodborne pathogenic bacteria at the field are required and those can be used in microbiological risk assessment and policy decision in government
II. SCOPE

I. BACKGROUND AND PURPOSE Of THE RESEARCH
- Development of speedy and simultaneous qualitative and quantitative methods for detection of foodborne pathogenic bacteria at the field are required and those can be used in microbiological risk assessment and policy decision in government
II. SCOPE AND CONTENTS OF RESEARCH
- Development of immunoassays, including ELISA, test strip, and an effective immunomagnetic bead separation system using the developed antibodies against Listeria monocytogenes and Clostridium perfringens
- Optimization of PCR reaction conditions for major food-born pathogenic bacteria such as L. monocytogenes and determination of banding patterns of PCR amplicons
- Fabrication oligonucleotide microarray for parallel detection of 10 food-borne pathogens
- Development of predictive microbial model and implementation of Microbiological Risk Assessment(MRA)
III. RESULTS OF THE PROJECT
[The 1 st sub-project]
- Development of Terasaki plate kit and Test-strip for rapid detection of L. monocytogenes and C. perfrignes, immunomagnetic bead separation system for isolation of L. monocytogenes and C. perfrigens, and simultaneous detection methods for detection two pathogenic bacteria
- The detection methods developed in this subject were compared with commercial kit and we confirmed the superiority of our detection methods. In addition, the screening of L. monocytogenes and C. perfringens in real samples was performed by various immunoassays
- Analysis of pre-culture conditions to sample the food-borne pathogens contaminating the food, analysis of isolation condition using IMS method, efficiency improvement of IMS method through the pre-treatment using Percoll
- Application of sampling method developed by microorganism hazard evaluation is developed in another project
[The 2nd sub-project]
- Optimization of PCR reaction conditions for major food-born pathogenic bacteria such as L. monocytogenes and determination of banding patterns of PCR amplicons
- Optimization of simultaneous diagnostic PCR reaction conditions for intergenus, interspecies, or intraspecies differentiations of major food-born pathogenic bacteria
- Simultaneous identification experiments of causative bacteria from fields or model systems using Optimized simultaneous diagnostic PCR methods
- Comparative evaluation of the optimized simultaneous diagnostic PCR methods with other domestic or foreign PCR methods
- Comparative evaluation of the optimized simultaneous diagnostic PCR methods with new immunologicall detection methods
[The 3rd sub-project]
- Fabrication oligo-nucleotide microarray for parallel detection of 10 food-borne pathogens
- We highly increased the sensitivity of the direct detection of 16s rRNA
- We also detected food-borne pathogens based on antibody and PCR by collaboration with our teams
[The 4th sub-project]
- Development of predictive microbial model in both broth and vegetables by temp., time etc.
- Implementation of Microbiological Risk Assessment(MRA) with hazard identification, initial contamination level of LMO and analysis of the effective factors on marketing, storage(temp.5-3 $0^{\circ}C$) and consuming stages, and transferring rate by washing experiment
- Characterized Risks and proposed the risk management policy
IV. THE APPLICATION PLAN OF RESEARCH RESULTS
- Accumulation of techniques for development of monoclonal antibody and immuno-globulin yolk, and development of ELISA kit using the developed antibodies that can replace the commercial kit imported from a foreign country
- Application of PCR methods themselves or in combination with the detection methods developed by other sub-projects for simultaneous detections of major food-born pathogenic bacteria in our country to identify pathogenic bacteria in contaminated foods
- Application of PCR methods in combination with the immunological detection methods for simultaneous detections of food-born pathogens

목차 Contents

• II. 총괄연구과제 연구결과...25
• 1. 연구개발과제의 배경 및 필요성...27
• 2. 국내외 기술개발 현황...32
• 3. 연구개발과제의 추진체계...44
• 4. 연구개발수행 내용 및 결과...47
• 5. 목표달성도 및 관련분야 기여도...115
• 6. 향후 연구성과 추진계획...120
• 7. 연구개발결과의 파급효과...121
• 8. 연구개발결과의 활용계획...122
• 9. 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보...125
• III. 제 1 세부연구과제 연구결과...127
• 1. 연구개발과제의 목표...129
• 2. 연구개발과제의 추진체계...132
• 3. 연구개발과제의 내용 및 결과...133
• 4. 참고문헌...182
• III. 제 2 세부연구과제 연구결과...185
• 1 . 연구개발과제의 목표...187
• 2. 연구개발과제의 추진체계...192
• 3. 연구개발과제의 내용 및 결과...194
• 4. 참고문헌...246
• III. 제 3 세부연구과제 연구결과...251
• 1. 연구개발과제의 목표...253
• 2. 연구개발과제의 추진체계...253
• 3. 연구개발과제의 내용 및 결과...254
• 4. 참고문헌...282
• III. 제 4 세부연구과제 연구결과...285
• 1. 연구개발과제의 목표...287
• 2. 연구개발과제의 추진체계...295
• 3. 연구개발과제의 내용 및 결과...296
• 4. 참고문헌...342
• IV. 첨부서류...347
• 1. 자체평가의견서...349
• 2. 연구성과 실적 증빙서류...355