초록 ▼

주요 세균들에 대해 감수성 시험하여 연도별로 각 항균제에 대한 내성의 변화를 규명한다. 16환계 마크로라이드 항생물질이 14환계 마크로라이드 항생물질보다 강한 내성유도인자로 작용하는 특이한 임상분리 enterococci 균주들의 MLS 내성 유전자 ermAM(ermB)를 분석한다. 또한 ermB의 조절부위를 인위적으로 mutation시켜 조절부위의 염기 서열 변이와 16환계 또는 14환계 마크로라이드의 유도능과의 관계를 연구한다. ermB의 정확한 조절기전에 대해 연구한다. 한편 다른 종류의 MLS 내성유전자인 ermC와 ermK의

주요 세균들에 대해 감수성 시험하여 연도별로 각 항균제에 대한 내성의 변화를 규명한다. 16환계 마크로라이드 항생물질이 14환계 마크로라이드 항생물질보다 강한 내성유도인자로 작용하는 특이한 임상분리 enterococci 균주들의 MLS 내성 유전자 ermAM(ermB)를 분석한다. 또한 ermB의 조절부위를 인위적으로 mutation시켜 조절부위의 염기 서열 변이와 16환계 또는 14환계 마크로라이드의 유도능과의 관계를 연구한다. ermB의 정확한 조절기전에 대해 연구한다. 한편 다른 종류의 MLS 내성유전자인 ermC와 ermK의 leader부분 염기서열의 변화와 항생제 내성 유도능과의 상관 관계에 대해 연구한다. 한편, 일부 베타락탐계 항생제에 의해 유도되는 AmpC $\beta$-lactamase와 extended-spectrum $\beta$-lactamase (ESBL)의 일종인 새로운 TEM 주요 세균들에 대해 감수성 시험하여 연도별로 각 항균제에 대한 내성의 변화를
규명한다. 16환계 마크로라이드 항생물질이 14환계 마크로라이드 항생물질보다 강한
내성유도인자로 작용하는 특이한 임상분리 enterococci 균주들의 MLS 내성 유전자
ermAM(ermB)를 분석한다. 또한 ermB의 조절부위를 인위적으로 mutation시켜
조절부위의 염기 서열 변이와 16환계 또는 14환계 마크로라이드의 유도능과의 관계를
연구한다. ermB의 정확한 조절기전에 대해 연구한다. 한편 다른 종류의 MLS
내성유전자인 ermC와 ermK의 leader부분 염기서열의 변화와 항생제 내성
유도능과의 상관 관계에 대해 연구한다. 한편, 일부 베타락탐계 항생제에 의해
유도되는 AmpC $\beta$-lactamase와 extended-spectrum $\beta$-lactamase (ESBL)의 일종인
새로운 TEM β-lactamase에 대해 연구한다. 그리고 퀴놀론에 대한 내성의 가장
중요한 요인인 gyrase 유전자 (gyrA, gyrB) 및 DNA topoisomerse IV (parC,
parE)유전자를 새로운 임상 균주로부터 클로닝하여 기존의 변이주와 비교 분석하고,
염기서열의 변화와 내성의 강도와의 상관 관계 및 내성의 빈도 등에 대해 연구한다.
세가지 중요 항생물질인 beta lactam, MLS, quinolone 항생제의 유효성(감수성),무
효성(내성) 여부를 확인하고, 그 원인 즉 내성 기전을 보다 깊게 규명하였다. 유효성
을 회복 또는 유지하기 위해 효율적인 항생제의 사용과 내성 감시의 필요성이 제안되
었다. 규명된 기전과 내성 균주는 새 항생물질을 고안, 탐색,합성하는데 이용될 것이
다. MLS 내성율은 지역에 관계없이 3차 의료 병원의 경우 70% 이상으로 매우 높
고, 1,2차 병원의 경우도 50%이상으로 높아 무효성이다. 16환 M이 14환 M보다 강한
내성유도인자로 작용하는 enterococci 임상 균주에서 그 원인은 내성 유전자 ermB의
조절 부위 leader peptide 부분의 염기 치환에 있음을 규명하였다. 이러한 기전은
ermB의 조절 부위 leader peptide 부분의 염기를 in vitro mutation시킨 실험계에서도
확인되었다. ermB의 내성 유도 조절 기전은 translational attenuation임을 밝혔으며,
ermK의 유도특이성을 결정하는 부분은 leader peptide의4-7 codon임을 규명하였다.
베타 락탐계 내성 기전중 가장 문제가 되고 있는 AmpC $\beta$-lactamase(CMY-1) 생
성 E. coli와 K. pneumoniae를 보다 정밀히 확인할 수 있는 cefoxitin disc이용 검출법
을 개발하였다. 이방법으로 내성 전달 transconjugant 에서 CMY-1a 생성균주보다
ceftazidime 고도내성인 plasmid 매개성 CMY-1b 생성균주가 대부분을 차지함을 규
명하였다. 그리고 K. pneumoniae 두 균주로부터 새로운 TEM $\beta$-lactamase을 분리하
였다. 한편 S. pneumoniae에서 퀴놀론항균제에 대한 세균의 내성의 획득에 있어서
고도내성 균주에서는 GyrA와 ParC의 아미노산 변이에 더하여 efflux pump 기전이 관여함을 규명하였다. 그리고 Methicillin-resistant S. aureus 균주에서 신 퀴놀론 DW-286에 의해 선별된 mutant에서 새로운 위치 mutation을 다수 확인하였다.-lactamase에 대해 연구한다. 그리고 퀴놀론에 대한 내성의 가장 중요한 요인인 gyrase 유전자 (gyrA, gyrB) 및 DNA topoisomerse IV (parC, parE)유전자를 새로운 임상 균주로부터 클로닝하여 기존의 변이주와 비교 분석하고, 염기서열의 변화와 내성의 강도와의 상관 관계 및 내성의 빈도 등에 대해 연구한다.
세가지 중요 항생물질인 beta lactam, MLS, quinolone 항생제의 유효성(감수성),무효성(내성) 여부를 확인하고, 그 원인 즉 내성 기전을 보다 깊게 규명하였다. 유효성을 회복 또는 유지하기 위해 효율적인 항생제의 사용과 내성 감시의 필요성이 제안되었다. 규명된 기전과 내성 균주는 새 항생물질을 고안, 탐색,합성하는데 이용될 것이다. MLS 내성율은 지역에 관계없이 3차 의료 병원의 경우 70% 이상으로 매우 높고, 1,2차 병원의 경우도 50%이상으로 높아 무효성이다. 16환 M이 14환 M보다 강한 내성유도인자로 작용하는 enterococci 임상 균주에서 그 원인은 내성 유전자 ermB의
조절 부위 leader peptide 부분의 염기 치환에 있음을 규명하였다. 이러한 기전은 ermB의 조절 부위 leader peptide 부분의 염기를 in vitro mutation시킨 실험계에서도 확인되었다. ermB의 내성 유도 조절 기전은 translational attenuation임을 밝혔으며,ermK의 유도특이성을 결정하는 부분은 leader peptide의4-7 codon임을 규명하였다.
베타 락탐계 내성 기전중 가장 문제가 되고 있는 AmpC $\beta$-lactamase(CMY-1) 생성 E. coli와 K. pneumoniae를 보다 정밀히 확인할 수 있는 cefoxitin disc이용 검출법
을 개발하였다. 이방법으로 내성 전달 transconjugant 에서 CMY-1a 생성균주보다 ceftazidime 고도내성인 plasmid 매개성 CMY-1b 생성균주가 대부분을 차지함을 규명하였다. 그리고 K. pneumoniae 두 균주로부터 새로운 TEM $\beta$-lactamase을 분리하였다. 한편 S. pneumoniae에서 퀴놀론항균제에 대한 세균의 내성의 획득에 있어서
고도내성 균주에서는 GyrA와 ParC의 아미노산 변이에 더하여 efflux pump 기전이 관여함을 규명하였다. 그리고 Methicillin-resistant S. aureus 균주에서 신 퀴놀론 DW-286에 의해 선별된 mutant에서 새로운 위치 mutation을 다수 확인하였다.

Abstract ▼

We tested susceptibility of clinical isolates against MLS antibiotics. The mutations of MLS resistance gene, ermB (ermAM) from enterococci, which were induced more strongly by 16-membered ring macrolide than 14-membered ring macrolide were analysed. Relationship between the changes in nucleotide seq

We tested susceptibility of clinical isolates against MLS antibiotics. The mutations of MLS resistance gene, ermB (ermAM) from enterococci, which were induced more strongly by 16-membered ring macrolide than 14-membered ring macrolide were analysed. Relationship between the changes in nucleotide sequence of regulatory region of ermB and the inducibility of 14- and 16-membered ring macrolide was studied by site-directed mutagenesis of regulatory region. Regulation mechanism of ermB was studied to determine whether ermB is regulated by translational attenuation or not. AmpC $\beta$-lactamase, which is induced by some beta-lactam antibiotis, and a new TEM beta-lactamase, ESBL was studied. DNA gyrase genes (gyrA, gyrB) and DNA topoisomerase IV genes (parC, parE) were cloned from new clinical isolates, and then the DNA sequences of these gene was compared to those
of the present mutant strains. And the relationship between the changes of the DNA sequence and the strength of the resistance was studied. Effectiveness of three major antibiotics, beta lactam, MLS and quinolone antibiotics
were evaluated. The mechanisms of resistance to them in the clinical isolates were clarified. It is suggested that the programmed use of these antibiotics and the continuing surveillance of resistance are necessary for the life-long usefulness of the antibiotics. The results will be useful for the development of new antibiotics. The resistance rates of MLS were over 70%. These high resistance rate mean the loss of
usefulness of these antibiotics in our country. The substitution with specific codon in the leader peptide sequence of ermB made 16 membered macrolide stronger inducer
of its expression. This phenomenon was also conformed in vitro system. The resistance induction in ermB was found to be controlled by translational attenuation.
It was also clarified that 4-7 codon of the leader peptide sequence of ermK were important for its specificity of resistance induction. For effective screening of
CMY-1 producing E. coli and K. pneumoniae, the Hodge test was modified by using a cefoxitin disk and the performance was successfully evaluated. It was found that most of them were plasmid-mediated CMY-1b $\beta$-lactamase producing strains which were resistant to ceftazidime. From two K. pneumoniae strains new TEM $\beta$
-lactamases were isolated and characterized. In S. pneumoniae the resistance to the quinolones was resulted from the accumulation of mutations in the QRDR region of DNA gyrase and DNA topoisomerase IV. Especially, the highly resistant mutants showed the possibility of existence of a efflux pump. It was confirmed some new mutation sites in methicillin-resistant S. aureus strains selected by DW286, a new
fluoroquinolone.

목차 Contents

• Ⅰ. 연구계획 요약문...3
• 1. 국문요약문 ...3
• Ⅱ. 연구결과 요약문...4
• 1. 국문요약문 ...4
• 2. 영문요약문 ...5
• Ⅲ. 연구내용...6
• 1. 서론 ...6
• 2. 연구방법 및 이론 ...12
• 3. 결과 및 고찰 ...22
• 4. 결론 ...80
• 5. 인용문헌 ...86