초록 ▼

엑소좀(exosome)은 여러 종류의 세포들로부터 분비되는 막 구조의 소낭체로서, 강력한 항종양 면역반응을 유도함이 알려져 있음. 본 연구는 종양 특이 항원을 발현하는 암 세포주 유래 엑소좀을 면역원으로 주입하여 생체 내에서 종양의 성장을 효과적으로 억제할 수 있는지를 확인하고 살해 T-림프구의 활성과 증가 등 세포성 면역을 최대한 증강시킬 수 있는 방법들을 다양하게 시도함으로 엑소좀 백신이 암 치료백신으로 임상적용이 가능하도록 개량함을 목표로 함.
종양 유래 엑소좀을 개량하여, 그 면역능을 향상시키고자 하는 전략으로서, (1

엑소좀(exosome)은 여러 종류의 세포들로부터 분비되는 막 구조의 소낭체로서, 강력한 항종양 면역반응을 유도함이 알려져 있음. 본 연구는 종양 특이 항원을 발현하는 암 세포주 유래 엑소좀을 면역원으로 주입하여 생체 내에서 종양의 성장을 효과적으로 억제할 수 있는지를 확인하고 살해 T-림프구의 활성과 증가 등 세포성 면역을 최대한 증강시킬 수 있는 방법들을 다양하게 시도함으로 엑소좀 백신이 암 치료백신으로 임상적용이 가능하도록 개량함을 목표로 함.
종양 유래 엑소좀을 개량하여, 그 면역능을 향상시키고자 하는 전략으로서, (1) 엑소좀 내 열 충격 단백질 발현 증강 (2) 엑소좀과 산화 마난(mannan)과의 융합 (3) 2군 주조직 적합체 활성제 유전자 도입을 통한 엑소좀내 2 군 주조직 적합체 (MHC class II)의 발현 유도등을 시도하였음.
마우스 종양 세포주인 CT26 또는 B16을 이용하여 열 충격 또는 2군 주조직 적합체 활성제 유전자 도입 등의 조작을 가하였고, 그로부터 엑소좀을 분리하였음. 분리한 엑소좀은 유세포분석기 (FACS), 웨스턴 블랏(western blot) 및 ELISA 등의 방법으로 생화학적 특성을 분석하였음. 확인된 엑소좀은 항원제시세포에 처리해주고, 그 때 항원제시세포의 활성화를 유세포분석기, RT-PCR 및 ELISA 둥으로 확인하였음. 종양을 가진 마우스 또는 정상 마우스에 엑소좀을 주입한 후, 종양의 크기 측정 및 항체 생산량, 면역세포의 활성화 등을 ELISA 및 유세포분석을 통하여 측정하였음.
(1),(2),(3)번 전략으로 조작한 엑소좀은 항원 제시 세포의 활성화를 증가시키고, 주사한 마우스 내에서의 체액성 및 세포성 면역 반응을 효과적으로 유도하며, 종양 성장을 억제시키는 항 종양 효과가 탁월함을 확인하였음.

Abstract ▼

Exosomes are small membrane vesicles which are known to induce strong anti-tumor immune responses. In this study, we used tumor-derived exosomes which express tumor-specific antigens. We attempted genetic or epigenetic ways to modify tumor cells or tumor-derived exosomes, which enable tumor-derived

Exosomes are small membrane vesicles which are known to induce strong anti-tumor immune responses. In this study, we used tumor-derived exosomes which express tumor-specific antigens. We attempted genetic or epigenetic ways to modify tumor cells or tumor-derived exosomes, which enable tumor-derived exosomes applicable in clinical trials as an efficient cancer therapeutic vaccine.
As strategies to improve immunogenicity of tumor-derived exosomes, we tried to (1) increase of heat-shock proteins in exosomes (2) conjugate with oxidized mannan (3) induce MHC class II molecules on erosome by introduction of CIITA gene.
Exosomes were extracted from mouse cancer cell line CT26 or B16 which was heat-shocked, or transduced with CIITA (MHC class II transactivator), followed by biochemical analysis using FACS, western blot and ELISA. The exosomes were added to antigen-presenting cells, activation were measured by FACS, RT-PCR or ELISA. Tumor-bering mice or normal mice were injected with the exosomes, and the anti-tumor effects of the exosomes were evaluated by measurement of tumor size, antibody productibility, and activation of immune cells using ELISA and FACS, etc.
The modified tumor-derived exosomes described above were revealed to exert enhanced effects in activation of antigen-presenting cells, induction of humoral and cellular anti-tumor immune responses, and tumor regression.

목차 Contents

• 표지...6
• 제출문...8
• 목차...9
• I. 연구개발결과 요약문...10
• (한글) 종양 유래 엑소좀을 이용한 암백신 개발...10
• (영문) Development of cancer vaccing using exosomes purified from tumor lines...11
• II. 연구개발과제 연구결과...12
• 1. 연구개발과제의 최종 연구개발 목표...12
• 2. 연구개발과제의 연구대상 및 방법...12
• 3. 연구개발과제의 연구개발결과...14
• 4. 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...28
• 5. 연구개발과제의 연구성과 및 목표달성도...29
• 6. 연구개발과제의 활용계획...32
• 7. 참고문헌...33
• 8. 첨부서류...34