초록 ▼

경기.인천 연안 지역 중 육로로 사람들의 접근이 쉽고 주변에서 어.패류의 구입이 용이하여 사람들이 많이 찾는 곳 가운데 송도, 연안부두, 월미도, 영종도, 소래, 강화 및 대부도 등 총 7지역을 선정하여 매월 중순경 해수를 채취하고 인근에서 어패류를 구입하여 장염비브리오균의 분포도를 모니터링하였다. 이때 어류는 우리나라 근해에서 양식되어 횟감으로 사용되는 종류를 주로 하였고, 패류는 인천 근해 어장에서 채집된 것을 구입하였다. 평판배지법으로 API20E kit와 일반 PCR법을 이용하여 1차 년도에는 총 300개의 검체에서 분리된

경기.인천 연안 지역 중 육로로 사람들의 접근이 쉽고 주변에서 어.패류의 구입이 용이하여 사람들이 많이 찾는 곳 가운데 송도, 연안부두, 월미도, 영종도, 소래, 강화 및 대부도 등 총 7지역을 선정하여 매월 중순경 해수를 채취하고 인근에서 어패류를 구입하여 장염비브리오균의 분포도를 모니터링하였다. 이때 어류는 우리나라 근해에서 양식되어 횟감으로 사용되는 종류를 주로 하였고, 패류는 인천 근해 어장에서 채집된 것을 구입하였다. 평판배지법으로 API20E kit와 일반 PCR법을 이용하여 1차 년도에는 총 300개의 검체에서 분리된 1066개 초록색 균주를 동정하였으며. 장염비브리오의 검출빈도는 분석한 시료 중 장염비브리오가 검출된 비율로 나타냈을 때 5월 0%, 6월 40%, 7월 47.9%, 8월 61.7%, 9월 45.3%, 10월 16.9%로 7-9월에 분포도가 높은 것으로 나타났다. 장염비브리오의 검출빈도는 해수 57.5%, 어패류 22.5%이었고 전체적으로는 35.7%였다. 이러한 결과는 장염비브리오가 검출되는 검체비율만 나타낼 뿐 실제로 얼마나 많은 장염비브리오균이 검체에 존재하는지는 파악되지 않기 때문에 정량적인 검색법 개발을 위해서 real-time (RT) PCR 검색법을 개발하였다.
장염비브리오균에만 특이적인 toxR유전자를 이용하여 probe를 개발하였고 다른 유사 병원균에 대한 비특이적 반응을 일으키지 않는 것으로 확인되었고 이 probe를 사용했을 때 10 pg의 DNA까지 검색되는 민감도를 갖는 것으로 나타났다. 2차년도에 RT-PCR법으로 모니터링한 결과는 3월 24.7%, 4월 25.3%, 5월 0%, 6월 42.2%, 7월 63.9%, 8월 62.2%, 9월 25.6%, 10월 53.5%로 나타나 역시 7월과 8월에 검출빈도가 가장 높았으며 9월에는 현저히 감소하였으나 10월에 다시 증가하는 양상을 보였다. 이는 2006년의 10월 중의 이상고온으로 인한 것으로 사료되었다. 이 중 해수의 검출빈도가 34.5%, 어패류 38.2%이었으며 전체적으로는 37.2%였다. 이는 $CHROMagar^{TM}$를 사용했을 때 해수 69.6%, 어패류 48.2%로 총 53.6%로 검출된 결과와는 다른 결과였으며 16S rRNA 염기서열을 통해 이는 $CHROMagar^{TM}$에 장염비브리오균과 유사한 균들이 같은 표현형으로 검출되기 때인 것으로 분석되었다. 전체적으로 장염비브리오균은 해수의 온도가 상승함에 따라 해수에서는 완만하게 증가하는 양상을 보였으나, 어패류의 경우에는 해수나 기온에 따른 증가보다는 개체에 따른 편차가 상당히 크게 나타났다. 2차 년도에는 1차 년도에 비해 생선살에서 장염비브리오균이 많이 검출되었는데 총97건의 생선살 시료 중에서 RT-PCR법에 의해 35건의 시료에서, 그리고 평판배지법에 의해 52건의 시료에서 장염비브리오균이 검출되었다. 특히 RT-PCR에 의해 장염비브리오균이 검출된 35건의 시료 중 12건은 1g 당 10,000개 이상의 장염비브리오균을 갖고 있었으며 9월 E 지점에서 채취한 광어의 경우는 1g 당 1억 개에 가까운 세균을 갖고 있는 것으로 분석되었다. 장염비브리오균이 검출된 검체에 한해 같은 상점에서 동일어종을 구입하여 실험실에서 생선살을 채취했을 경우 장염비브리오균이 검출이 되지 않았다. 따라서 회감에서의 장염비브리오균 오염은 어육에서의 검출이 아닌 상점에서 도마, 칼 및 다루는 사람의 손 등에 의한 2차 감염으로 판단된다. 장염비브리오균은 ${60^{\circ}C}$ 이상의 온도나 pH3.0 정도의 산도, 레몬즙 및 세제로 효과적으로 제어될 수 있으며 칼, 도마, 행주 등에서도 생장이 지속될 수 있어 2차감염의 통로가 되는 것으로 나타났다. 이러한 자료를 토대로 장염비브리오 식중독 저감화를 위한 홍보자료를 작성하였다.

Abstract ▼

Seven regions in the coastal area of Kyunggi Province and Incheon, which are easy for people to approach by car and purchase seafood, were selected for sampling seawater and marine product monthly as an effort to monitor distribution of Vibrio parahaemolyticus, a causative agent of gastroenteritis.

Seven regions in the coastal area of Kyunggi Province and Incheon, which are easy for people to approach by car and purchase seafood, were selected for sampling seawater and marine product monthly as an effort to monitor distribution of Vibrio parahaemolyticus, a causative agent of gastroenteritis. Among the samples, fishes were those cultured and clams were those collected in the near fishing grounds. During the 1st year, 1,066 green colonies on TCBS plates isolated from 300 samples were identified using API20E kit and general multiplex PCR.
Detection rate of V. parahaemlyticus shown as the ratio of the samples contaminated with the species to the total samples in May was 0%, June 40%, July 47.9%, August 61.7%, September 45.3%, and October 16.9%, indicating higher distribution between July and September. The detection rate among the samples of seawater was 57.5%, fishes and clams 22.5% with overall detection rate of 35.7%. However, the results do not show quantitative distribution of the pathogen, bu only the frequency. As an effort to develop a method for quantitative detection of V. parahaemolyticus, a real time (RT)-PCR procedure was established using primers and a probe derived from the toxR gene. The primers were specific to the pathogen and sensitive to detect DNA as low as 10 pg which corresponds to about 10 cells. During the 2nd year, the monitoring was carried out using the RT-PCR method and the results indicated that the detection rate was 24.7% in March, 25.3% in April, 0% in May, 42.2% in Jung, 63.9% in July, 25.6% in September, 53.5% in October. Again the distribution was higher during the monthsof July and August. The reason why the detection rate during October was high could probably due to unusual high temperature during the month. The detection rate among the samples of seawater was 34.5%, fishes and clams 38.2% with overall detection rate of 37.2%. The results were somewhat different from those obtained using $CHROMagar^{TM}$, which were 69.6% in seawater, 48.2% in fishes and clams, and overall 53.6%. This could be due to growth of Vibrio species closely related to V. parahaemlyticus on $CHROMagar^{TM}$ plates. The detection rate appeared to increase as the temperature increased. However, the relationship was not clear for seafoods due to significant variations among individual samples. Remarkably more V. parahaemolyticus was detected from the fresh of fishes with 35 positive out of 97 samples. Twelve out of the positive (11.2%) were contaminated with more than 10,000 cells/g, which is the standard for safety and one sample from E spot had about 100 million cells/g. Contaminated fish fresh was detected from all the sampling sites with the most frequency in E spot. Growth of the pathogen could be controlled most efficiently by heat over ${60^{\circ}C}$, acidic conditions about pH 3, lemon juice, or detergent. The pathogen could grow on knives, cutting boards, and towels used in the kitchen for several hours, making them the souces for secondary contamination. Based on these data, materials for public education were prepared as an effort to decrease the incidence of food poisoning by V. parahaemolyticus.

목차 Contents

• 용역연구사업 연구결과보고서...1
• 제출문...4
• 목차...5
• I. 연구개발결과 요약문...9
• 연구결과보고서 요약문 ...9
• Summary ...10
• II. 연구개발과제 연구결과...11
• 제1장 연구개발과제의 최종 연구개발 목표...11
• 1.1 총괄연구개발과제의 목표...11
• 1.2 총괄연구개발과제의 목표달성도...14
• 1.3 국내.외 기술개발 현황...14
• 제2장 연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법...16
• 2.1 시료채취 및 처리...16
• 2.2 표준균주 혹은 비교 시험균주의 확보...18
• 2.3 기온 및 해수 온도 모니터링...18
• 2.4 RT-PCR...19
• 2.5 장염비브리오 식중독에 대한 저감화 방법 설정 및 식중독 예방 홍보자료 작성...21
• 제3장 연구개발과제의 최종 연구개발 결과...23
• 3.1 시료 채취 지역의 수온과 기온 변화...23
• 3.2 평판배지법에 의한 장염비브리오균 검색...25
• 3.3 RT-PCR법에 의한 장염비브리오균의 검색...38
• 3.4 장염비브리오 식중독 예방과 저감화를 위한 홍보자료...79
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론...86
• 제5장 연구개발과제의 연구 성과...90
• 5.1 활용성과...90
• 5.2 활용계획...91
• 제6장 기타 중요변경사항...91
• 제7장 참고문헌...91
• 제8장 첨부서류 : 홍보자료 제작물...93