초록 ▼

1. 현삼 및 치자추출물의 제조 및 성분분리
현삼 및 치자의 70% ethanol 추출물을 제조하여 분서과 효능검색을 위한 시료로 제공하였다. 한편, 산지별로 다른 약재의 추출물을 추가로 제조하였는데 현삼 5종과 치자 6종의 추출믈을 위ㅘ 동일한 방법으로 ㅊ출하여 표준시료로 제공하였다. 성분분리를 위하여 현삼 및 치자를 methanol로 위와 같은 방법으로 ㅊ출하여 출물을 제로한 다음, 표준 분획제조법에 따라 용매별 분획을 제조하엿으며 각 분획중의 성분을 각종 chromatography법 (C-18 colmn, silica g

1. 현삼 및 치자추출물의 제조 및 성분분리
현삼 및 치자의 70% ethanol 추출물을 제조하여 분서과 효능검색을 위한 시료로 제공하였다. 한편, 산지별로 다른 약재의 추출물을 추가로 제조하였는데 현삼 5종과 치자 6종의 추출믈을 위ㅘ 동일한 방법으로 ㅊ출하여 표준시료로 제공하였다. 성분분리를 위하여 현삼 및 치자를 methanol로 위와 같은 방법으로 ㅊ출하여 출물을 제로한 다음, 표준 분획제조법에 따라 용매별 분획을 제조하엿으며 각 분획중의 성분을 각종 chromatography법 (C-18 colmn, silica gel, alumina, sephadex, Diaion HP, XAD-II등 이용)으로 분리, 정제하여 모두 24종의 성분을 얻었다. 분리한 성분에 대하여 기기분석(NMR($^{1}H$, $^{13}C$), MS(ESI or FAB), FT-IR, UV)을 실시하여 현삼성분 10종 (E-harpogoside, harpagide,
8-O-E-p-methoxycinnamoylharpagide, aucubin, ferulic acid, p-coumaric acid, cinnamic acid, p-methoxycinnamic acid methyl ester, caffeic acid, (E)-p-methoxycinnamic acid))과 치자성분 14종 (geniposide, genipin, geniposidic acid, crocetin, crocin, genipin gentiobioside, chlorogenic acid, ursolic acid, rutin, stigmasterol, sitosterol. caffeic acid, quercetin, isoquercitrin)의 구조를 동정하였다. 분리한 현삼성분중에서 7종은 현재 구조확인중임.

2. 정량분석법 확립
현삼의 최적 분석방법은 Aglient Eclipse XDB C-18 (5 μm, 4.6×150 mm)를 고정상으로 하고 UV 296 nm를 검출기로, 유속은 0.8 ml/min로 하며 이동상으로는 A(1% HOAc in water), B(1% HOAc in MeCN)fmf 24.3→25.5% B for 2 min, 49.5→52.0% Bfor 15 min, 52.0%→100.0% B for 4 min와 같이 농도구배를 주었을 때 가장 분리능이 좋았음. 이 조건에서 UV chronophore를 갖는 (E,Z)-p-methoxycinnamic acid, (E,Z)-harpagoside, p-methoxycinnamic acid methyl ester 및 (E)-harpagoside를 동시에 정량할 수 있음. 본 분석법의 validation을 수행한 결과 범위는 0.1-10.0 μg/ml이며 $r^{2}$=0.99이상의 짓선성 및 0.3-2.8 μg/ml의 LOD와 1.1-7.2 μg/ml의 LOD를 나타 내었음. 또하나 면적빕에 대한 재현성 RSD는 0.78-2.7%, 머무름 시간에 대한 재현성 RSD는 0.10-1.26%내의 값이었고, 일간 및 일내 CV(%)는 0.26%-6.3%정도, accuracy(%)sms 92%-108.55%사이였음. Soxhlet, reflux, 초음파 등의 추출효과를 비교한 결과 환류추출이 가장 좋았음.
치자의 경우 최적 분석 방법은 고정상으로 Aglient XDB-C18 (4.6×350 mm, 5 μm), 검출기로서 UV 254 nm, 이동상으로 A (1% HOAc in water), B (1% HOAc in MeCN)를 10→15% B for 5 min, 15% B for 10 min, 15→16% B for 5 min, 16% B for 15 min, 16→20 for 5 min, 20→100 % B for 5 min와 같이 농도구배를 주었을 때 최상의 결과를 얻었으며, 이 조건에서 분석시 geniposidic acid, chlorogenic acid, geniposide, genipin을 검출할 수 있어다. 본 분석법의 validation을 수행한 결과 범위는 0.1-50 μg/ml이며 $r^{2}$=0.99이상의 직선성 및 0.5-2.7 μg/ml의 LOD와 2.1-7.5 μg/ml의 LOD를 나타내었으며 면적비에 대한 재현성 RSD는 0.3-1.8%, 머무름 시간에 대한 재현성 RSD는 0.5-1.1%내의 값이었음. 또한 일내 및 일간 CV(%)는 0.24%-5.72% 정도를 보였으며 accuracy(%)는 93.896%-105.263% 범위였음. 최적 추출방법은 환류추출이었으나 genoposide의 경우는 Soxhlet 추출이 효과가 가장 좋았음. 한편, 직교배열법에 의한 최적 추출 조건을 검토한 결과 지표성분의 추출은 치자 1g을 200ml 95% ethanol을 이용하여 1시간 동안 70${^{\circ}C}$에서 추출하는 것이 바람직한 것으로 나타났음

목차 Contents

• 용역연구사업 연차 실적.계획서 ...1
• 표지 ...2
• 제출문 ...4
• 목차 ...5
• □ 당해년도 연구개발사업 실적 ...6
• 1. 연구개발과제의 최종 연구개발목표와 당해년도 연구개발목표 ...6
• 2. 연구개발과제의 당해년도 연구개발내용 ...7
• 3. 연구개발과제의 당해년도 연구성과 ...45
• 4. 연구수행에 따른 문제점 및 대책 ...48
• 5. 실적요약문 ...49
• □ 차년도 연구개발사업 계획 ...58
• <총괄연구과제>...59
• 1. 요약문 ...59
• 2. 연구개발비 총괄표 ...60
• 3. 연구책임자 인적사항 및 연구개발실적 (변경된 경우만 작성) ...70
• 4. 참여연구원 편성표 ...72
• 5. 총괄연구과제의 차년도 연구개발목표 ...77
• 6. 총괄연구과제의 차년도 연구개발계획 ...78
• 7. 연차별 연구수행일정 ...82
• 8. 첨부서류 ...83
• <제1세부연구과제> ...84
• 1. 요약문 ...85
• 2. 차연도 연구개발비 총괄표 (세부과제) ...86
• 3. 제1세부연구과제의 차년도 연구개발목표 ...91
• 4. 제1세부연구과제의 차년도 연구개발계획 ...92
• 5. 첨부서류 ...97
• <제2세부연구과제> ...98
• 1. 요약문 ...99
• 2. 차연도 연구개발비 총괄표 (세부과제) ...100
• 3. 제2세부연구과제의 차년도 연구개발목표 ...105
• 4. 제2세부연구과제의 차년도 연구개발계획 ...105
• 5. 첨부서류 ...108