초록 ▼

본 연구의 4개의 세부과제 수행으로 임신중 유해물질노출에 의한 후세대에 미치는 영향을 평가할 수 있었다. 제 1세부과제에서는 총236명의 임신부가 본 연구에 참여하였다. 알코올노출력 평가에서 임신 중 음주를 1회 이상했던 임신부는 31.2%(82/263)이었다. 습관적 의존적 음주자는 24.7%이었으며, 태변의 알코올대사물질인 FAEEs를 측정방법을 개발하여 외국문헌에 게재하였다. 알코올대사 유전자중 ADH1B는 알코올 대사율이 느린*1/*1이 높은 비율을 차지하고, ADH1C의 경우 알코올 대사율이 빠른 *1/*1의 빈도가 높고,

본 연구의 4개의 세부과제 수행으로 임신중 유해물질노출에 의한 후세대에 미치는 영향을 평가할 수 있었다. 제 1세부과제에서는 총236명의 임신부가 본 연구에 참여하였다. 알코올노출력 평가에서 임신 중 음주를 1회 이상했던 임신부는 31.2%(82/263)이었다. 습관적 의존적 음주자는 24.7%이었으며, 태변의 알코올대사물질인 FAEEs를 측정방법을 개발하여 외국문헌에 게재하였다. 알코올대사 유전자중 ADH1B는 알코올 대사율이 느린*1/*1이 높은 비율을 차지하고, ADH1C의 경우 알코올 대사율이 빠른 *1/*1의 빈도가 높고, ALDH2의 경우 알코올의 대사율이 중간 정도인 *1/*2가 많아서 유전자의 조합에 따라서 임신부가 음주를 하는 경우 태아가 알코올증후군이 될 감수성이 높은 고위험 군이 될 수 있다. 한편, 기존 알코올연구코호트에서 출산한 10개월 이상이 된 영아 106명에서 발달검사(BSID-III)및 이학적 검사에서는 임신 초기 알코올에 노출되었던 16개월 여아 1례가 발달검사 및 이학적 검사에서 낮은 점수를 나타내고 다른 유전질환이 동반되지 않아 FASD로 진단되었다. 따라서 FASD의 유병률은 0.94%(1/106)이었다.
제 2세부과제에서는 알코올과 약물은 유의하게 엽산 농도를 감소시키고, 호모시스테인 농도를 증가시켰다. 엽산대사에 관여하는 효소 유전자 중 MTHFR 677 TT형은 그 빈도가 22.7%로 상당한 부분을 차지하고, 엽산 농도감소와 호모시스테인 농도 상승에 감수성이 있었다. 또한 엽산이 함유된 비타민 복용 시에는 이런 감수성이 없어지고, 반대로 임신 초기 엽산이나 비타민을 복용하지 않은 여성은 유전자형에 관계없이 유산과 비정상 임신의 위험률이 2.5배 정도로 상승하였다. 임신 1분기에만 엽산과 비타민을 복용하는 임신부보다 임신 2,3분기에 엽산과 비타민을 복용하는 임신부의 출산 주수와 신생아 체중이 더 증가하는 경향이 있었다. 제3세부과제 연구신청자 320명 중 256명이 기초설문과 피부반응검사를 완료하였다. 한편, 기존 아토피연구코호트를 이용한 아토피피부염 발생률 평가 결과는 170명중 36명으로 21.2%의 발생률을 나타냈다. 태아의 면역발달과 아토피 피부염과의 연관성을 보기위해 제대혈의 Th1-type의 사이토카인 INF-γ와 Th2-type의 사이토카인 IL4를 측정하여 아토피피부염 발생이 태아의 면역발달과 관련이 있음을 보았다. 감작된 군 69명과 비감작군 91명씩 S2554X와 3321delA 의 DNA 변이를 살펴 본 결과 두 군 사이에 유전자 변이에 대한 유의성 있는 결과는 관찰되지 않았다. 정상인과 아토피피부염환자 각각 15명의 구강점막을 면봉으로 swab하여 real time RT-PCR방법을 이용하여 filaggrin gene의 발현을 측정한 결과 이전의 예비실험에서 아토피피부염 환아의 구강점막에서 filaggrin의 발현이 저하된 것과는 달리 오히려 발현이 증가하는 환자가 많은 것으로 나타났다. 제 4세부과제는 탈락된 자궁내막조직을 이용한 연구모델을 확립하였고, 탈락된 자궁내막조직으로부터 배양된 세포에 nonylphenol을 처리한 후 유전자 발현의 변화를 microarray를 이용하여 분석하였다. 분석된 약 24,000개의 유전자들 중에서 78개의 유전자가 nonylphenol을 처리하지 않은 세포와 비교하여 발현이 통계학적으로 유의하게(p<0.05) 감소하였고, 80개의 유전자의 발현이 통계학적으로 유의하게 (p<0.05) 증가하였다. 발현이 유의하게 변화된 유전자들의 생물학적 의미를 파악하고자 Gene Ontology (GO) 분석을 통하여 197개의 GO functional category가 nonylphenol의 영향을 받을 수 있는 것으로 분석되었다. 또한 생물학적 경로 분석을 실시하여 ECM-receptor pathway, Lysosome pathway, Focal adhesion pathway 등 28개의 생물학적 경로에서 발현이 유의하게 변화된 유전자들이 많이 나타나는 것으로 분석되었다. 총괄적 결론은 임신 중 유해물질노출로 알코올, 카페인, 약물 등이 태아알코올스펙트럼장애, 유산 등의 불량한 임신결과와 아토피피부염 발생과의 상관성을 파악할 수 있었고, 이들 유해물질 대사와 관련된 유전자들의 유전형에 따른 감수성을 평가할 수 있었다. 한편, 불임의 원인인 자궁내막증의 발생과 관련되는 nonylphenol을 처리한 자궁내막조직에서 유전자발현 양상을 microarray를 이용하여 평가 하였다. 또한, 이번 후세대 영향을 연구를 통해서 향후에 관련하여 추가연구를 할 수 있는 임상연구 자료를 다량 확보할 수 있었다.

Abstract ▼

The research for evaluation of post-generational effects secondary to potentially harmful exposures during pregnancy was performed by 4 programs. In the 1st program related to early diagnosis of fetal alcohol spectrum disorder. Total 236 pregnant woman participated in the research. The overall rate

The research for evaluation of post-generational effects secondary to potentially harmful exposures during pregnancy was performed by 4 programs. In the 1st program related to early diagnosis of fetal alcohol spectrum disorder. Total 236 pregnant woman participated in the research. The overall rate of alcohol drinking more than once during pregnancy was 31.2%(82/263). Tendency dependence drinker was 24.7%. Our method for measuring FAEEs levels in meconium is published in J of Chromatography B. In alcohol metabolic genes, ADH1B1 *1/*1, slower metabolizer of alcohol, is the most prevalent, ADH1C *1/*1, faster metabolizer, is the most prevalent and ALDH2 *1/*2, moderate metabolizer, is the most prevalent. So the fetus is to be susceptible according to the combination of the genotypes of the genes. On the other hands, 106 babies who over 10month of age were performed the physical examination BSID-lll by using previous alcohol exposure cohort. A 16month baby girl who exposed to alcohol in the early pregnancy was diagnosed to FASD. The child has CCAM, 2 percentile of cognition, 3 percentile of language, 5~10percentile of palpebral fissure length, 3 grade of philtrum, no genetic disorder. The prevalence of FASD is 0.94%(1/106). In the 2nd program, alcohol and medication caused decreased levels of folate and elevated levels of homocysteine. The frequency of genetic polymorphism of the MTHFR C677T is 22.7%. Also when ingest to vitamin which contain folic, decrease about sensitivity contrary to the woman who doesn't take vitamin or folic in the early pregnancy increase 2.5 fold to miscarriage and abnormal pregnancy outcome. In the 3rd program, skin tests for 12 antigens were performed. The positive rate was 39% for dust mites. Prevalence of atopic dermatitis was evaluated by using previous cohort for studying atopic dermatitis. Prevalence of atopic dermatitis is 21.2%(36/170). Evaluation of Th1-type cytokine and Th2-type cytokine suggests that the development of fetal immune system is affected by in utero exposure to potential allergens. In the 4th program, we obtained blood samples, genomic DNA, and follicular fluid of ovary in infertile women. In addition, we analyzed association between gene expression related endometriosis and nonylphenol by microarray. In the result, we found that nonylphenol influenced gene expression of various pathway for genesis of endometriosis.
In conclusion, we found that there is asociation between post-generation effects including FASD, adverse pregnancy outcome and atopic dermatitis and toxicants exposure during pregnancy. In addition, we found significant expression types of genes related to endometriosis in endometrial tissue treated nonylphenol with microarray. The clinical research cohort is established to study of post-generation effects by potential toxicants exposure during pregnancy.

목차 Contents

• 용역연구개발과제 최종보고서...1
• 제출문...3
• 목차...5
• I. 총괄연구개발과제 요약문...9
• 국문요약문...9
• Summary...11
• II. 총괄연구개발과제 연구결과...13
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성...13
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법...40
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰...47
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과...72
• 제5장 총괄주요연구 변경사항...76
• 제6장 총괄참고문헌...77
• 제7장 총괄첨부서류...94
• III. 제(1)세부연구개발과제 연구결과:태아알코올스펙트럼장애 조기진단 연구...95
• 제(1)세부 연구개발과제 요약문...97
• 제2장 세부연구개발과제의 목적...100
• 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법...115
• 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰...130
• 제5장 세부참고문헌...204
• [부록 1] 태아알코올 스펙트럼장애 조기진단 연구를 위한 리플렛...209
• [부록 2] 설문지...211
• IV. 제(2)세부연구개발과제 연구결과:임신부의 유해물질 노출과 엽산 및 호모시스테인 농도, 유전자 다형성이 임신 결과에 미치는 영향...217
• 제(2)세부 연구개발과제 요약문...219
• 제2장 세부연구개발과제의 목적...222
• 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법...229
• 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰...238
• 제5장 세부참고문헌...272
• 별첨 1. 임신부 설문지...281
• 별첨 2. 임신부 설문지...285
• 별첨 3. Non-supplement of folate/vitamin in periconceptional period and increased risk for spontaneous abortion...289
• 별첨 4. Association between Polymorphisms in Genes Involved in Folate Metabolism and Chromosomal Aneuploidy in Women with Spontaneous Abortion...290
• 별첨 5. Polymorphisms of genes involved in folate metabolism in women with spontaneous abortion...291
• V. 제(3)세부연구개발과제 연구결과:산전 항원노출이 태아의 면역 발달과 아토피피부염 발생에 미치는 영향...303
• 제(3)세부 연구개발과제 요약문...305
• 제2장 세부연구개발과제의 목적...309
• 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법...323
• 제4장 세부 연구 개발과제의 결과 및 고찰...330
• 제5장 세부 참고 문헌...362
• 부록 1. 설문지...367
• 부록 2. 식품섭취 조사표...370
• VI. 제(4)세부연구개발과제 연구결과:여성의 생식기능 대한 환경독성물질의 영향...383
• 제(4)세부 연구개발과제 요약문...385
• 제2장 세부연구개발과제의 목적...388
• 제3장 세부연구개발과제의 내용 및 방법...393
• 제4장 세부연구개발과제의 결과 및 고찰...398
• 제5장 세부참고문헌...436
• 별첨 1. “후세대영향연구를 위한 임상시스템 구축 (2009)” 연구결과 중 세포생존성 검사 결과...439
• 별첨 2. Effect of nonylphenol and octylphenol on gene expression of endometrial cells cultured from shed endomtrium...442
• 총괄 첨부서류...443
• 부록 1. 연구를 위한 윤리위원회 승인서...443
• 부록 3. 2009 생식발생 독성연구 및 마더리스크 프로그램의 최신동향...449