초록 ▼

양봉산물을 이용한 집먼지진드기 항원 단백질의 중화활성 및 항바이러스활성을 탐색하기 위해 여러 종의 꿀, 화분, 프로폴리스를 확보하여 활성 검정에 이용하였다.
집먼지진드기의 알레르기 항원물질인 집먼지진드기 단백질의 확보를 위하여 본 실험실내에서 집먼지진드기의 사육법 확립 및 사육을 실시하였고 사육된 이들 집먼지진드기를 대상으로 기존의 곤충대상 충체 단백질 추출 기술을 활용하여 실험에 필요한 집먼지진드기 알레르기 항원 단백질을 추출하였다. 본 연구에서 보다 간편하고 신속하게 집먼지진드기의 항원단백질의 중화활성 여부를 확인하는 방법

양봉산물을 이용한 집먼지진드기 항원 단백질의 중화활성 및 항바이러스활성을 탐색하기 위해 여러 종의 꿀, 화분, 프로폴리스를 확보하여 활성 검정에 이용하였다.
집먼지진드기의 알레르기 항원물질인 집먼지진드기 단백질의 확보를 위하여 본 실험실내에서 집먼지진드기의 사육법 확립 및 사육을 실시하였고 사육된 이들 집먼지진드기를 대상으로 기존의 곤충대상 충체 단백질 추출 기술을 활용하여 실험에 필요한 집먼지진드기 알레르기 항원 단백질을 추출하였다. 본 연구에서 보다 간편하고 신속하게 집먼지진드기의 항원단백질의 중화활성 여부를 확인하는 방법으로 SDS-PAGE를 응용한 중화 활성 탐색법을 확립하였으며 이 방법은 SDS-PAGE상에 확인되는 집먼지진드기의 알레르기 항원 단백질 밴드의 존재와 사라짐을 통하여 항원 단백질의 중화여부를 판단하였다. 이를 통해 면역반응을 이용하는 것보다 손쉽고 신속하게 중화활성 여부를 판별 할 수 있어 본 연구의 중화활성 스크리닝 기법으로 활용하였다. 확립된 SDS-PAGE을 활용한 중화활성 탐색법을 이용하여 양봉산물의 집먼지진드기 알레르기 항원 단백질의 중화활성 화합물을 탐색하였고 같은 방법으로 프로폴리스 함유 물질에 대한 단백질 중화활성을 검정하였다. 활성물질의 분리 및 정제를 위하여 오픈컬럼 크로마토그라피를 이용하여 활성물질을 분리 및 정제를 실시하였고 HPLC, GC-MS, EI-MS 등을 거쳐 활성물질을 동정하였다.
양봉산물의 항라이노바이러스 활성 탐색 및 개발을 수행하기 위해 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank - KCLB)에서 사람의 자궁경부암 상피세포인 HeLa cell (KCLB 10002)을 분양받아 이를 라이노바이러스(Rhinovirus)의 기주세포로 사용하였다. 또한 미국미생물균주배양센터(American Type Culture Collection - ATCC)로부터 라이노바이러스 혈청형 100여가지 중 HRV-2,-3,-4를 구입하였다. 헬라셀(HeLa cell)의 배양과 라이노바이러스의 보관 및 배양을 위한 배양방법 역시 함께 확립하여 헬라셀에 대해 혈청형에 따른 효과를 보이는 활성물질을 규명하고자 하였다. 본 연구의 항바이러스활성 스크리닝 기법으로는 SRB(Surlforhodamine B) 검정법을 이용하였다. 이는 세포의 생존 및 사멸 여부에 따라 염색되는 정도가 달라짐에 근거한 실험법이다. 확립된 SRB 검정법을 통해 양봉산물과 활성물질 분획 층에 대한 세포독성 및 항바이러스성을 검정하였고 이에 대한 물질 분리 및 정제를 위해 MPLC, HPLC, GC-MS 등을 이용하였다. 또한 프로폴리스 내 구성물질에 대해서도 세포 독성 및 항바이러스성을 검정하였다.

Abstract ▼

The various kinds of honey, pollen, propolis were used to elucidate the denaturating and antiviral activity of the antigen protein of house dust mite. House dust mite was bred in the laboratory for getting the protein of house dust mite. Using the protein extraction technique, the allergic antigen p

The various kinds of honey, pollen, propolis were used to elucidate the denaturating and antiviral activity of the antigen protein of house dust mite. House dust mite was bred in the laboratory for getting the protein of house dust mite. Using the protein extraction technique, the allergic antigen protein of the house dust mite was extracted. In the study, the denaturating activity search applying SDS-PAGE was settled and it is a simple and quick method. This method is determined whether the antigen protein has been denatured or not through the existence and disappearance of the allergic antigen protein band on SDS-PAGE gel. Because it had good distinction comparing to using an immune reaction, this method was applied by the screening technique of denaturating activity. The compound that has denaturating activity against antigen protein of house dust mite was found by SDS-PAGE method. In the same way, the protein denaturing activity assay of the propolis products was carried out. Separation and purification of the active substance using open column chromatography were conducted. Also, it was identified through the HPLC, GC-MS and EL-MS. HeLa cell, the cervical cancer cell line from Korean Cell Line Bank(KCLB) was used as host cell of rhinovirus to find the antiviral activity of bee products. Among the serotype of rhinovirus, HRV-2, -3, -4 were purchased from the American Type Culture Collection(ATCC). It need to investigate the active substance which has effects of serotype on HeLa cell through establishing culture method of HeLa cell and rhinovirus. This study used the SRB(Surlforhodamine B) assay as antiviral screening techniques. This assay is based on the degree of staining depending on bioability of cell. Cytotoxicity and antiviral activity of fractions of bee product were investigated and the active material through established SRB assay and tried to identify the active substance using MPLC, HPLC and GC-MS. In addition, it is examined on cytotoxicity and antiviral activity of propolis constituents.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 3
• SUMMARY ... 7
• 제1장 서론 ... 11
• 제 1 절 연구개발의 목적 ... 11
• 제 2 절 연구개발의 필요성 ... 12
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 13
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 16
• 제 1 절 봉독과 꿀을 이용한 항생제 대체 가축적용 기술 확립(1년차) ... 16
• 제 2 절 국내산 벌꿀의 성분 분석 및 식의약용 소재개발(2,3년차) ... 24
• 제 3 절 프로폴리스의 수용성화 및 고항균성 물질 분리 ... 29
• 제 4 절 양봉산물을 이용한 집먼지진드기 단백질 중화제 개발 ... 36
• 제 5 절 양봉산물을 이용한 항라이노바이러스 활성 탐색 및 개발 ... 44
• 제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도 ... 57
• 제1절 목표대비 달성도 ... 57
• 제2절 정량적 성과 ... 59
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 65
• 제6장 중요 변동사항 ... 67
• 제7장 참고문헌 ... 68