초록 ▼

현재까지 환자 가검물(혈액, 뇌척수액 등)을 이용하여 프리온을 검출할 수 있는 실험실 확인 진단방법이 개발되어 있지 않으며, CJD를 진단하는데 사용되고 있는 뇌척수액의 14-3-3 protein 검출은 다른 뇌질환 환자에서도 발현되는 지표로 특이도가 떨어진다. 그러므로 뇌척수액 등의 가검물에서 프리온을 검출할 수 있는 실험실 확인 진단방법 개발이 시급하다. 이에 사람 검체에서 프리온 검출 가능성이 높은 뇌척수액을 이용하고 동물 프리온 혈액진단용으로 개발되어 있는 MDS(Multimer Detection System) 방법을 적용하

현재까지 환자 가검물(혈액, 뇌척수액 등)을 이용하여 프리온을 검출할 수 있는 실험실 확인 진단방법이 개발되어 있지 않으며, CJD를 진단하는데 사용되고 있는 뇌척수액의 14-3-3 protein 검출은 다른 뇌질환 환자에서도 발현되는 지표로 특이도가 떨어진다. 그러므로 뇌척수액 등의 가검물에서 프리온을 검출할 수 있는 실험실 확인 진단방법 개발이 시급하다. 이에 사람 검체에서 프리온 검출 가능성이 높은 뇌척수액을 이용하고 동물 프리온 혈액진단용으로 개발되어 있는 MDS(Multimer Detection System) 방법을 적용하여 진단법을 개발하고자 한다. MDS 기술은 항원의 같은 부위에 반응하는 항체들을 포획(capturing)과 검출(detection)항체로 동시에 사용하여 모노머와 멀티머를 구분할 수 있는 새로운 개념의 진단 시스템으로 모노머(단량체) 상태에서는 질병을 유발하지 않으나, 멀티머(다량체) 상태에서는 질병을 유발하는 단백질에 대하여 MDS는 그 단백질이 모노머인지 멀티머 인지를 판별함으로써 질병의 감염여부를 판단한다.
뇌척수액(CSF, Cerebrospinal fluid)을 이용한 CJD 진단기술 개발 중 2차년도에는 1차년도에 확보한 CJD 의심환자의 뇌척수액(CSF)을 이용하여 CJD의 발병원인인 변성 프리온에 최적화된 MDS 진단기술을 개발하였고 소규모 테스트 결과 민감도-55.6%, 특이도-85.7%를 나타냈으며 다른 퇴행성뇌질환(Alzheimer's disease, Parkinson's disease 등) 뇌척수액과의 비교시험을 통해 특이도가 92.3% 임을 확인하였다. 현재 CJD 실험실 진단법에 사용되고 있는 CSF의 14-3-3 protein 검출의 특이도가 50% 이하이고 민감도는 더 낮은 상황인 것을 고려할 때 민감도와 특이도 모두 긍정적인 결과가 도출된 것으로 판단되며 CJD 진단을 보다 정확하게 cross-check할 수 있는 보강(confirmatory) 또는 진단기술로 활용 가능할 것으로 사료된다. 그러나, pCJD 뇌척수액 샘플의 제한성으로 인한 샘플부족으로 테스트된 샘플의 숫자가 통계적으로 유의하지 못한 부분이 있기에 pCJD 샘플을 추가 확보하여 빠른 시일 내 시제품 개발을 완료할 계획이며 PMCA장비의 추가지원이 있을 경우,증폭기술 적용에 따른 영향도 함께 조사할 예정이다.

Abstract ▼

The diagnostic method of detecting rogue prion from bodily fluids(blood, CSF etc.) has not been developed and detection of 14-3-3 protein from CSF in diagnosis for CJD lacks specificity because it's used as indexes in other brain diseases as well. This indicates the necessity for the developmen

The diagnostic method of detecting rogue prion from bodily fluids(blood, CSF etc.) has not been developed and detection of 14-3-3 protein from CSF in diagnosis for CJD lacks specificity because it's used as indexes in other brain diseases as well. This indicates the necessity for the development of a laboratory diagnostic method of detecting rogue prion from bodily fluids. Hereby, we have developed a diagnostic method of detecting rogue prion protein from human CSF by using Multimer Detection System (MDS) technology, which was originally developed for blood screening test for scrapie in sheep. MDS is a platform technology, which can differentiate only multimers from monomers by creating competition between capturing and detection antibodies for the overlapping epitope. MDS discriminates infectiousness of disease by detecting only multimeric feature of rogue prion protein(PrPSc) in contrast to monomeric form of cellular prion protein. During the second year of the project, we optimized the MDS using CSF samples that we obtained during the first year of development. Then, we performed the comparison test between CJD infected CSF samples and non-CJD CSF controls. The result of the small scale evaluation test was 55.6% of sensitivity and 85.7% of specificity. When performed against other neurodegenerative disease samples, MDS showed 92.3% specificity. When we think of around 50% specificity and even lower sensitivity of 14-3-3 CSF test, the MDS result was considered as positive, so that it can be used as diagnostic technology for CJD or confirmatory tools to improve accuracy of overall diagnosis. However, since we couldn't obtain enough statistically meaningful data due to the sample limitation, we plan to finalize the kit prototyping by testing more pCJD samples. In so doing, we plan to check the effects of PMCA combining with MDS test.

목차 Contents

• 학술연구용역사업 결과보고서 ... 1
• 목 차 ... 2
• Ⅰ. 연구개발결과 요약문 ... 3
• 최종결과보고서 요약문 ... 3
• Summary ... 4
• Ⅱ. 학술연구용역사업 연구결과 ... 5
• 제1장 최종 연구개발 목표 ... 5
• 제2장 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 9
• 제3장 최종 연구개발 결과 ... 14
• 제4장 연구결과 고찰 및 결론 ... 36
• 제5장 연구성과 ... 37
• 제6장 기타 중요변경사항 ... 38
• 제7장 참고문헌 ... 39
• 제8장 첨부서류 ... 41
• 끝페이지 ... 41