초록 ▼

II. 연구결과 요약
유용 수산생물 배우자 및 발생 배의 동결(장기)보존은 양식생물의 인공종묘 생산 시 여러 가지 장점을 제공할 뿐만 아니라, 희귀종이나 재래종의 종 보존 방법을 간소화시킬 수 있으며, 우량종의 gene pool을 조성할 수 있게 한다. 더욱이 최근 주목받고 있는 종자 산업을 발전시키기 위해서도 동결보존 기술은 매우 필요한 기반기술 요소 중의 하나이다. 따라서 본 연구는 유용 양식생물의 수정란 및 발생 배의 반영구적 보존 및 복원 방법을 개발하고자 유용 양식 어류 중 자바리 정자와 넙치 발생 배, 그리고 유용

II. 연구결과 요약
유용 수산생물 배우자 및 발생 배의 동결(장기)보존은 양식생물의 인공종묘 생산 시 여러 가지 장점을 제공할 뿐만 아니라, 희귀종이나 재래종의 종 보존 방법을 간소화시킬 수 있으며, 우량종의 gene pool을 조성할 수 있게 한다. 더욱이 최근 주목받고 있는 종자 산업을 발전시키기 위해서도 동결보존 기술은 매우 필요한 기반기술 요소 중의 하나이다. 따라서 본 연구는 유용 양식생물의 수정란 및 발생 배의 반영구적 보존 및 복원 방법을 개발하고자 유용 양식 어류 중 자바리 정자와 넙치 발생 배, 그리고 유용 양식 패류 중 참굴과 전복의 수정란 및 유생에 대한 동결보존 연구를 수행하였다.
주요 연구 내용은 동결보존에 가장 큰 영향을 미치는 동해방지제(CPA)에 대한 독성 파악을 우선적으로 실시하였다. 그 다음 평행시간, 동결속도 및 동결방법, 유리화방법 등 각 요인별로 적합한 방법을 조사한 후 최종적으로 이들 요인을 조합하여 최적의 동결방법을 파악하고자 하였다.
자바리 정자의 경우 1년간 동결보존한 정자와 24시간 동결보존한 정자의 운동성이 차이를 보이지 않았으며, DNA 손상도 없었다. 넙치 발생 배의 경우 dimethyl sulfoxide (DMSO)와 ethylene glycol (EG)을 CPA로 사용하여 급속동결을 위한 유리화 용액을 제작하여 동결하였을때 해동 후 부화율이 3.7%로 가장 좋은 결과를 얻었다.
참굴의 경우 D형 유생의 적정 CPA 농도는 DMSO 22%, 24%와 EG 26%이며, 평형시간은 각 각 60분, 10분, 90분으로 나타났다. D형 유생의 동결실험에서는 0.2 M sucrose와 2.0 M EG에 침지하여 protocol Ⅰ로 동결한 결과, 해동 후 생존율이 42.8%였다. 전복 담륜자 유생의 경우 EG가 효과적이었으나, 동결 후 해동한 유생의 생존율은 0%였다.
양식분야에서 동결보존 기술이 확립되어 상용화 된다면, 우량종, 재래종 및 멸종 위기종에 대한 효과적이고 안전한 종 보존 방법을 제시할 것이다. 또한 양식생물의 종묘생산 과정이 계획화, 과학화 및 간편화되어 예측 가능한 양식생산을 할 수 있을 것이다. 나아가 수산생물의 배우자 및 종자은행 구축에 활용할 수 있어 국가 수산생물자원의 이용과 관리에 기여할 것이다.

Abstract ▼

II. Research results
Developing cryopreservation(long-term preservation) of useful marine organism's gamete and embryo presents a variety of strong points for artificial seed production and simplifies the preservation procedure of rare and native species as well as formulates a gene pool of good

II. Research results
Developing cryopreservation(long-term preservation) of useful marine organism's gamete and embryo presents a variety of strong points for artificial seed production and simplifies the preservation procedure of rare and native species as well as formulates a gene pool of good breed. In particular, it is a prerequisite for the development of recently emerging breeding industry. In this sense, this study focused on cryopreservation research of useful cultured organisms―the sperm of kelp bass and the embryo of olive flounder for cultured fish; the fertilized egg and larva of pacific oyster and abalone for cultured shellfish―for the development of semi-permanent preservation and restoration of useful cultured organism's fertilized egg and embryo.
The study started by understanding of CPA toxicity which is the most influential factor in cryopreservation. In the second place, the suitable method by equilibration time, speed and method of freezing, and vitrification was investigated and then found out the best
cryopreservation method based on prior tests.
In case of kelp bass, there was no difference of sperm movement between 1 year-frozen and 24 hours-frozen sperm, plus no DNA damage. Whereas the highest fertilization was obtained when the embryo of olive flounder was frozen for quick freezing with vitrification
solution made by using dimethyl sulfoxide (DMSO) and ethylene glycol (EG) as CPA showing 3.7% of hatching rate after thawing.
When it comes to pacific oyster, the desired CPA concentration of D-type larva showed 22% and 24% of DMSO and equilibration time was 60, 10, 90 minutes respectively. In the D-type larva freezing test, the survival rate was 42.8% after thawing followed by immersing 0.2 M sucrose and CPA 2.0 M EG and freezing with protocol. However, CPA EG was effective for abalone trochophore larva, the survival rate of larva after thawing was 0%.
If cryopreservation is spread and commercialized in aquaculture sector, more effective and safer management of good breed, rare and native species as well as endangered species would be possible. In addition, it also will allow us to produce predictable cultured food as it could provide systemized, simplified and scientific production procedure.
Moreover, it will contribute to the use and management of national fisheries resources by making good use of aquatic organism's gamete and seed bank.

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 3
• 보고서 요약 ... 4
• 요약문 ... 5
• SUMMARY ... 6
• 목차 ... 7
• Contents ... 8
• 그림 목차 ... 9
• List of Figures ... 11
• 표 목차 ... 13
• List of Tables ... 14
• 제1장 연구개발 과제의 개요 ... 16
• 제1절 연구개발 배경 ... 16
• 제2절 연구개발 필요성 ... 17
• 제3절 연구개발 목표 ... 17
• 제2장 국내외 기술개발 현황 및 과학기술정보 ... 19
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 20
• 제1절 유용 양식 어류의 수정란 및 발생 배(embryo)의 냉동보존 기술 ... 20
• 1. 재료 및 방법 ... 20
• 2. 결과 ... 22
• 제2절 유용 양식 패류의 수정란 및 발생 배(embryo)의 냉동보존 기술 ... 32
• 1. 참굴과 전복의 적정 난 발생 및 발생단계 조사 ... 32
• 2. 최적 희석액 및 동해방지제 구명 ... 35
• 3. 적정 냉동·해동 방법 탐색 ... 45
• 4. 참굴의 최적 냉동보존 방법 검정 ... 62
• 제4장 목표달성도 및 관련분야 기여도 ... 64
• 1. 연도별 연구개발 목표 및 달성도 ... 64
• 2. 기대효과 ... 64
• 제5장 연구개발 결과 활용계획 ... 65
• 1. 활용방안 ... 65
• 2. 연구성과 활용 ... 65
• 제6장 참고문헌 ... 66