보고서 정보
주관연구기관 |
제넥신 Genexine, Inc. |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2013-11 |
과제시작연도 |
2013 |
주관부처 |
농림축산식품부 Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs(MAFRA) |
과제관리전문기관 |
농림축산검역본부 Animal and Plant Quarantine Agency |
등록번호 |
TRKO201400001801 |
과제고유번호 |
1545006085 |
사업명 |
농림축산검역검사기술개발 |
DB 구축일자 |
2014-08-16
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키워드 |
감별 마커.백신.진단법.돼지 열병 바이러스.Differentiation marker.vaccine.diagnostic method.CSFV.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201400001801 |
초록
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돼지 열병 바이러스 감염에 의한 가축전염병으로 나타나는 윤리적, 복지적 및 경제적 타격을 해결하기 위해 감염을 효율적으로 예방할 수 있는 백신 개발이 중요한 사안이다. 특히, 백신의 효능을 검증하기 위해 DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated Animals) 전략에 따라 야외 감염과 백신 접종 간의 구별을 가능하게 하는 감별 마크를 포함하는 백신 개발이 절실하다. 이런 관점에서, 본 연구의 목적은 감별 마커백신 적용 가능한 마커 단백질 검색과 감별 진단법을 확립하는 것이다.
이러한
돼지 열병 바이러스 감염에 의한 가축전염병으로 나타나는 윤리적, 복지적 및 경제적 타격을 해결하기 위해 감염을 효율적으로 예방할 수 있는 백신 개발이 중요한 사안이다. 특히, 백신의 효능을 검증하기 위해 DIVA (Differentiating Infected from Vaccinated Animals) 전략에 따라 야외 감염과 백신 접종 간의 구별을 가능하게 하는 감별 마크를 포함하는 백신 개발이 절실하다. 이런 관점에서, 본 연구의 목적은 감별 마커백신 적용 가능한 마커 단백질 검색과 감별 진단법을 확립하는 것이다.
이러한 목적을 위해서 본 연구진은 크기, 면역원성, 안전성, 소·돼지 단백질과 homology/cross-reactivity, 분석 용이성 등의 기준에 따라 C-myc, C14orf1, CYYR1, HBV S, HCV E2, HIV p24 총 6개의 마커 후보물질을 선택하였다. 각 마커들은 direct, bridge, 그리고 competitive ELISA 감별법을 바탕으로 진단법으로서 개발 가능성을 확인하고 개체별 돼지혈청을 이용하여 마커로서 적합성을 확인한 후에 최종적으로 CYYR1과 HCV E2를 후보 마커로 도출하였다.
동물 접종 실험을 통해 후보 마커 단백질이 DIVA 백신으로 적용 가능한지 확인하기 위해 돼지 열병 바이러스 E2항원과 마커 단백질이 같이 발현할 수 있는 유전자를 합성하였다. 본 연구에서는 기존에 유전자 전달 및 백신 개발에 다방면으로 많이 활용되고 있는 재조합 아데노 바이러스를 벡터를 이용하여 각 마커 백신을 제작하고, 설정된 공정에 따라 대량 생산, 정제 및 품질 분석을 진행하였다.
최종적으로 도출된 CYYR1 포함하는 아데노바이러스 마커 백신을 마우스와 돼지에 접종한 후 면역화된 혈청을 확보하였으며, 확립된 감별 진단법을 통해 마커에 대한 항원 생성 여부를 판별함으로 DIVA 백신 개발의 감별 마커로서의 가능성을 제시하였다.
본 연구를 통해 도출된 기술은 기반 기술로서 돼지 열병 바이러스 백신뿐만 아니라 Aujeszky’s disease, infectious bovine rhinotracheittis, foot and mouth disease, avian influenza 와 같은 다른 가축 전염병 질환의 예방을 위한 백신개발에 적용 가능하다.
Abstract
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Due to ethical, welfare and economic aspect in connection with a contagious viral epizootic disease caused by classical swine fever virus (CSFV), the development of novel vaccines becomes more and more important. Particularly, there is a clear need for more efficient safer marker vaccine to differen
Due to ethical, welfare and economic aspect in connection with a contagious viral epizootic disease caused by classical swine fever virus (CSFV), the development of novel vaccines becomes more and more important. Particularly, there is a clear need for more efficient safer marker vaccine to differentiate infected from vaccinated animals (DIVA) assisting the control of future CSF outbreak. In this context, the aim of this study is to develop novel marker proteins and diagnostic method for the application to DIVA vaccine.
For this purpose, we initially selected the six different marker protein candidates, c-myc, C14orf1, CYYR1, HBV S, HCV E2, HIV p24, based on the several criteria such as, size, immunogenicity, safety, cross-reactivity/homology with swine/bovine proteins, and availability of diagnositc method. We tested the specificity and sensitivity of the diagnostic methods to measure the presence of antibody against each marker using direct, bridge, and competitive ELISA, and then examined the suitability of diagnostics method for each marker with individual naive swine serum.
To evaluate the possibility of maker proteins as DIVA vaccine in animal models, we synthesized the genes encoding both each marker and CSFV E1, E2 antigens. Herein, we used recombinant adenovirus (rAd) as vaccine vector which is versatile tool for the gene therapy and vaccine development. After generating rAds expressing each marker vaccine, we produced and purified them in a large scale under our standard operating procedures. Finally, after vaccination of rAd expressing CYYR1 marker vaccine into mouse and pig, we examined the generation of antibody against CYYR1 marker protein in immunized serum using the established diagnostic method. Collectively, we suggest that CYYR1 would be a candidate of marker protein for the development of DIVA vaccine against CSFV, and would be also applicable in developing vaccines against other contagious epizootic diseases caused by Aujeszky’s disease, infectious bovine rhinotracheittis, foot and mouth disease, avian influenza
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 용역연구사업 연구결과보고서 ... 2
- 제 출 문 ... 3
- 목 차 ... 4
- Ⅰ. 연구개발결과 요약문 ... 5
- (한글)감별 마커백신 적용 가능한 단백질 검색 및 감별진단법 확립 ... 5
- (영문)Development of marker vaccine and diagnostic method for differentiating infected from vaccinated animal ... 6
- Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 7
- 제1장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 목표 ... 7
- 제2장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 내용 및 방법 ... 11
- 제3장 총괄연구개발과제의 최종 연구개발 결과 ... 28
- 제4장 총괄연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 30
- 제5장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 31
- 제6장 기타 중요변경사항 ... 33
- 제7장 참고문헌 ... 34
- 제8장 첨부서류 ... 35
- 끝페이지 ... 39
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