보고서 정보
주관연구기관 |
농림수산검역검사본부 |
연구책임자 |
박수정
|
참여연구자 |
김명애
,
강정우
,
임채미
,
조병훈
,
손성완
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2010-12 |
과제시작연도 |
2010 |
주관부처 |
농림수산식품부 |
사업 관리 기관 |
농림수산검역검사본부 |
등록번호 |
TRKO201400003698 |
과제고유번호 |
1545002303 |
사업명 |
수의과학기술개발연구 |
DB 구축일자 |
2014-05-07
|
키워드 |
Antiprotozoals.Hormones.LC-MS/MS.Depletion.Meat.Liver.Urine.
|
초록
▼
5. 최종 연구결과 요약
가. 축산물내 항원충제의 확인․정량법 개발 및 조사
◦ 축산물내 항원충제의 확인정량법 확립 및 검증
- 대상물질 (14종) : Amprolium, clopidol, decoquinate, diaveridine, diclazuril, dicyclanil, ethopabate, halofuginone, imidocarb, nicarbazine, robenidine, roxarsone, toltrazuril, zoalene
- 컬럼 : Waters BEH C18 (2.1x50 mm, 1.7
5. 최종 연구결과 요약
가. 축산물내 항원충제의 확인․정량법 개발 및 조사
◦ 축산물내 항원충제의 확인정량법 확립 및 검증
- 대상물질 (14종) : Amprolium, clopidol, decoquinate, diaveridine, diclazuril, dicyclanil, ethopabate, halofuginone, imidocarb, nicarbazine, robenidine, roxarsone, toltrazuril, zoalene
- 컬럼 : Waters BEH C18 (2.1x50 mm, 1.7 μm)
- 이동상 용매 : 0.1 % formic acid가 포함된 증류수와 acetonitrile의 시간대 비율 조절
- 시료전처리 : 2mM ammonium formate가 포함된 acetonitrile/water (4:1, v/v)로 추출한 후 C18 분말 500 mg을 분산시키고, hexane으로 정제 후 질소농축하여 0.2um PVDF syringeless filter로 여과후 분석
- 최종 확인․정량: 물질별 최적의 확인․정량을 위한 정량, 정성이온 선별 및 MRM(multiple reaction monitoring) 분석조건 확립
- 시료별 평균 회수율은 근육 85.1~106.2 %, 신장 83.1~104.0 %, 간장 81.3~108.1 %, 계란 91.3~105.6 %, 우유 89.3~107.7 %였으며, 변이계수는 근육, 신장, 간장, 계란, 우유 모두 15 % 이내로 국제기준을 충족하였음
◦ 국내 사용빈도가 높은 항원충제 4종 (Amprolium, clopidol, diclazuril, toltrazuril)에 대한 incurred sample 제조 및 잔류소실 양상 조사
- Amprolium : 닭에 음수 1L당 240mg 농도로 5일간 연속 급여한 결과, 근육, 간장, 신장 모두 투약 중단 시점부터 MRL 이하 수준이었음
- Clopidol : 닭에 사료 1kg당 250mg 농도로 5일간 연속 급여한 결과, 근육, 간장, 신장 모두 휴약 1일부터 MRL 이하 수준이었음
- Diclazuril : 닭에 사료 1kg당 1mg 농도로 5일간 연속 급여한 결과, 근육, 간장, 신장 모두 투약 중단 시점부터 MRL 이하 수준이었음
- Toltrazuril : 닭에 음수 1L당 25mg과 50mg 농도로 2일간 투여후 5일 경과하여 재투여 투약 후 7일에 marker residue인 toltrazuril sulfone의 농도는 권장용량 투여군의 경우 근육, 간장, 신장 모두 휴약후 14일부터, 두배용량 투여군의 경우 휴약후 21일부터 EU MRL 이하 수준으로 감소하였으며, 가식부위별 잔류소실양상이 간장, 신장, 근육순으로 오래 잔류하는 경향을 보여, 향후 검사대상 시료는 간장이 보다 적절할 것으로 판단되었음
◦ 국내산 소간 100건, 돼지간 100건, 닭간 100건, 오리간 30건, 원유 50건, 계란 50건 등 총 430건에 대한 항원충제의 잔류실태를 조사한 결과 amprolium 2건, clopidol 29건, diclazuril 8건, toltrazuril/toltrazuril sulfone/toltrazuril sulfoxide 29건이 검출됨
- 닭간 : 100건 검사결과 2건에서 amprolium이 0.197 mg/kg 농도로, 23건에서 clopidol 이 0.027~4.614 mg/kg 농도로, 8건에서 diclazuril이 0.104~0.525 mg/kg 농도로 검출되었으나, 모두 잔류허용기준 이하였음. 또한 toltrazuril이 2건에서 0.161~0.469 mg/kg 농도로, toltrazuril sulfone이 29건에서 0.067~1.822 mg/kg 농도로, toltrazuril sulfoxide이 3건에서 0.209~0.76 mg/kg 농도로 검출되었음
- 오리간 : 30건 검사결과 6건에서 clopidol이 0.023~0.078 mg/kg 농도로 검출되었으나, 모두 잔류허용기준 (20 mg/kg) 이하였음
- 소간, 돼지간, 계란, 우유 : 검출내역 없음
나. 축산물내 스테로이드성 호르몬의 확인․정량법 개발 및 조사
◦ LC-MS/MS 기기분석조건 확립
- 대상물질 (12종) : 17β-estradiol, zeranol, zearalenone, diethylstilbestrol (DES), altrenogest, hexestrol, dienestrol, progesterone, testosterone, trenbolone, melengestrol acetate (MA), Medroxyprogesterone acetate (MPA), norgestomet
․ 내부표준물질 : Progesterone-d9(+ve), Estradiol-d4(-ve), DES-d8(-ve)
- 컬럼 : Agilent Eclipse plus C18 (2.1x100 mm, 1.8 μm)
- 이동상 용매 : 20 mM ammonium acetate 와 methanol의 시간대 비율 조절
- 시료전처리 : Acetonitrile에 녹인 1% acetic acid로 1차 추출 후 HLB cartridge로 SPE 정제하여 분석, 내부 표준법으로 정량
- 최종 확인․정량: 각 물질별 parent ion과 2개의 daughter ion 간의 ion ratio 확인
◦ 시료별 평균 회수율은 근육 62.2~117.5 %, 신장 62.3~113.0 %, 간장은 64.7~116.6 %, 우유는 71.8~117.8 % 였으며, 변이계수는 근육, 신장, 간장, 우유 모두 15 % 이내로 대체로 국제기준을 충족하였음
◦ 국내산 시․도 소 40마리, 돼지 90마리 포함한 총 140 두의 간장 시료와 원유 40건을 상으로 잔류실태를 조사한 결과, progesterone, testosterone 등 천연호르몬이 20ng/g수준이하로 검출되었음
목차 Contents
- 총괄요약표 ... 1
- 연구과제 최종결과보고서 ... 4
- Ⅰ. 연구배경 및 목표 ... 4
- 1. 연구배경 ... 4
- 2. 연구최종목표 ... 6
- 3. 연차별 연구개발 목표 및 내용 ... 6
- Ⅱ. 연구방법 및 수행전략 ... 6
- 1. 재 료 ... 6
- 2. 연구전략 및 방법 ... 7
- Ⅲ. 연구결과 ... 8
- 제1세부과제 : 축산물내 항원충제의 확인․정량법 개발 및 조사 ... 8
- 제2세부과제 : 축산물내 스테로이드성 호르몬의 확인․정량법 개발 및 조사 ... 20
- Ⅳ. 연구결과요약 ... 25
- 제1세부과제 : 축산물내 항원충제의 확인․정량법 개발 및 조사 ... 25
- 제2세부과제 : 축산물내 스테로이드성 호르몬의 확인․정량법 개발 및 조사 ... 25
- Ⅵ. 연구결과 활용실적 및 계획 ... 26
- Ⅶ. 참고문헌 ... 27
- 끝페이지 ... 27
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