보고서 정보
주관연구기관 |
차의과학대학교 산학협력단 CHA University |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
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발행년월 | 2014-11 |
과제시작연도 |
2013 |
주관부처 |
보건복지부 [Ministry of Health & Welfare(MW)(MW) |
등록번호 |
TRKO201600004381 |
과제고유번호 |
1465013865 |
사업명 |
질환극복기술개발 |
DB 구축일자 |
2016-08-13
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키워드 |
난치성 난소암.암줄기세포.바이오마커.치료타깃.Intractable ovarian cancer.cancer stem cell.Biomarker.Treatment target.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201600004381 |
초록
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□ 연구 내용 1: 난소암의 Cancer Stem cell (CSC)를 가장 효율적으로 분리하는 방법 규명
○ 난소암 세포와 환자 암세포에서 CD 44, CD133, ALDH 1 등의 marker를 이용한 분리법 / spheroid assay 를 이용한 CSC 분리법의 난소암 Cancer stem cell (CSC) 분리법으로서의 효용성 확인
○ 결과 :
1.CD44, CD133 등의 marker는 난소암 세포주 간, 환자 샘플간 차이가 심하고 일관성이 없어 적절치 못하다고 판단됨.
2. ALDH1(+) 세포는
□ 연구 내용 1: 난소암의 Cancer Stem cell (CSC)를 가장 효율적으로 분리하는 방법 규명
○ 난소암 세포와 환자 암세포에서 CD 44, CD133, ALDH 1 등의 marker를 이용한 분리법 / spheroid assay 를 이용한 CSC 분리법의 난소암 Cancer stem cell (CSC) 분리법으로서의 효용성 확인
○ 결과 :
1.CD44, CD133 등의 marker는 난소암 세포주 간, 환자 샘플간 차이가 심하고 일관성이 없어 적절치 못하다고 판단됨.
2. ALDH1(+) 세포는 stem cell marker 들이 상당히 증가되어 있어 CSC 가 많이 포함되어 있다고 판단됨. 그러나 spheroid-forming cell 에 비하여 부족 하다고 판단됨.
3. spheroid-forming 세포가 다양한 stem cell marker 들이 의미있게 증가돠어 있어 가장 적절한 CSC 분리법으로 판단됨.
□ 연구 내용 2 : CSC marker (+) 난소암 줄기 세포의 분자생물학적 특성 규명을 통한 치료 표적 후보 물질 도출
- 1년차에서 밝혀진 효율이 가장 좋은 CSC 분리방법, 즉 spheroid assay로 난소암 줄기세포를 분리하고 이에 대한 분자 생물학적 특성을 규명함.
○ 암 발생 및 전이 관련 유전자 특성 규명
- 난소암환자의 조직에서 추출한 CSC 특이 유전자 발굴 : cDNA microarray 후 qRT-PCR, immunohistochemical stain 으로검증.
○ 결과 :
1.cDNA microarray 결과 5배 이상 의미있게 증가되어 있는 gene들은 381개, 5배이상 의미있게 감소한 gene 들은 238개임.
2.cDNA microarray에서 5배이상 의미있는 값을 보였던 gene들중 oncogenesis 에 관련되고 gene ontology 분류에서 가장 의미잇게 높았던 다음과 같은 유전자 14개를 대상으로 74예의 난소암 환자 샘플에서 발현을 비교하고 그 임상적 의미를 검증함 :GSC(8.39배), VAV3(11.75배), FOXA2(15.11배), LEF1(28.76배), COMP(15.34배), AZU1(13.36배), GRIN2A(7.34배),IL17F(17.36배), CD86(8.67배), PYY (11.98배), FIGF(14.01배), NKX3-2(9.43배), WNT3A(6.19배) ,PDK4(11.34배)
3.qRT-PCR, 면역화학염색을 이용한 유전자의 발현의 임상적 의미검증 : Distant metastasis 는 VAV3, NKX3-2, LEF1 의 과발현과 연관성이 높고, 항암제 내성은 NKX3-2 의 과발현과의 연관성이 높았음.
□ 연구 내용 3 : CSC marker (+) 난소암 줄기 세포 특이 유전자 제어를 통한 효능 검증
○ 난소암의 암줄기 세포 특이 유전자 조절을 통한 항암제 내성 극복 방법 개발
- 2년차 연구에서 밝혀진 CSC 특이 암 발생 및 전이 관련 유전자를 siRNA 또는 gene transfection 시켜 종양 억제 효과 있는지 조사함.
- 항암 효과는 MTT assay / Apoptosis assay/ Cell invasion, migration assay 로 관찰함
○ 결과 : VAV3, NKX3-2, LEF1, PYY 등의 유전자 조절 후 spheroid-forming capacity, colony-formation 등은 감소하였으나 apoptosis, cell cycle 에 미치는 영향은 크지 않았음. 현재 동물실험 진행중임.
Abstract
▼
I. Purpose
- Ovarian cancer is a highly lethal gynecological malignancy with high mortality rate and frequent recurrence.
- Cancer stem cells (CSC) is believed to be involved in recurrence and chemoresistance in ovarian cancer.
- The purpose of this study is to isolate the ovarian CSCs effe
I. Purpose
- Ovarian cancer is a highly lethal gynecological malignancy with high mortality rate and frequent recurrence.
- Cancer stem cells (CSC) is believed to be involved in recurrence and chemoresistance in ovarian cancer.
- The purpose of this study is to isolate the ovarian CSCs effectively from the primarily cultured human ovarian cancers, and to identify the characteristic genes of ovarian CSCs to develop the effective treatment targets for intractable ovarian cancers.
Ⅱ. Contents and Results
○ Selection of effective methods and isolation of ovarian CSC.
Results :
1. Spheroid-forming assay was the most effective method for isolation of CSC among the various methods, such as CD44, CD133 cell surface markers and Aldefluor assay for ALDH1(+) cells.
2. Ovarian CSCs were isolated from 17 different patients with high grade ovarian cancers.
○ identification of molecular biological characteristics of ovarian CSC, and molecular targets for CSC.
Results :
1. Fourteen genes were selected for candidate markers and targets by high-throughput analysis with cDNA microarray.: GSC, VAV3, FOXA2, LEF1, COMP, AZU1, GRIN2A, IL17F, CD86, PYY, FIGF, NKX3-2, WNT3A,PDK4
2. With 74 cases of high grade ovarian cancers, these genes were validated using qRT-PCR and immunohistochemistry.
: Distant metastasis was associated with overexpression of VAV3, LEF1, and NKX3-2. The chemoresistance was related with overexpression of NKX3-2. The overexpression of VAV3 was an independent poor survival indicator by multivariate Cox analysis.
○ Validation of molecular targets for ovarian CSC by functional studies ( cell viability test, TUNEL assay, colony forming assay, spheroid-forming assay)
Results :
1. After treatment with siRNA of VAV3, LEF1, NKX3-2, colony-formation and spheroid-formation were significantly decreased.
2. Apoptosis, and cell cycle change was not significantly altered by siRNA treatment of these gene.s
Ⅲ. Application
1. VAV3, FOXA2, and NKX3-2, the identified genes from this project, were candidate biomarkers for poor prognosis and survival in ovarian cancer.
2. These genes are expected to develop the treatment targets for intractable ovarian cancer.
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