초록 ▼

유방암 단계의 진행 단계에 따른 메틸화 수준이 지속적으로 증가하거나 또는 감소하는 유전자를 전체 유전자 중에서 찾아내기 위하여, 메틸화 데이터베이스 집단을 수집하고 분석하였다.

in silico에서의 유전자 발현에 메틸화의 영향이 나타나는 유전자를 확인하고, 그렇게 하여 메틸화의 증가가 지속적으로 나타나는 잠재적인 후성유전학적 유방함 마커인 NEFL을 개발하기 위하여 세포주와 조직 모두에서 그것의 프로모터 메틸화와 발현을 선택하고 조사하였다.

NEFL 유전자는 정상조직과 비교하여 암 조직에서 과메틸화되어 있

유방암 단계의 진행 단계에 따른 메틸화 수준이 지속적으로 증가하거나 또는 감소하는 유전자를 전체 유전자 중에서 찾아내기 위하여, 메틸화 데이터베이스 집단을 수집하고 분석하였다.

in silico에서의 유전자 발현에 메틸화의 영향이 나타나는 유전자를 확인하고, 그렇게 하여 메틸화의 증가가 지속적으로 나타나는 잠재적인 후성유전학적 유방함 마커인 NEFL을 개발하기 위하여 세포주와 조직 모두에서 그것의 프로모터 메틸화와 발현을 선택하고 조사하였다.

NEFL 유전자는 정상조직과 비교하여 암 조직에서 과메틸화되어 있다는 것을 밝혔다.

유방암에서 비정상적으로 프로모터에 메틸화됨으로써 조절되지 않는 주요 기능적인 경로들을 알아보기 위해, 게놈 전체(genome-wide)메틸화 데이터베이스를 분석하고 Ingenuity Pathway (또는 기능적인) 분석을 수행했다. 가장 높게 과메틸화 (hypermethylation)와 저메틸화 (hypomethylation)을 보이는 GPCR들은 각각 Ⅰ기에선 LPAR2와 GPR133, Ⅱ기에선 GALR3와 GPR135이며, Ⅲ기에선 QRFPR과 CELSR1,Ⅳ기에선 GPR56와 BDKRB2이다.

비정상적으로 메틸화된 GPCR 중에 4기의 암 단계 동안 빈번하게 나타난 유전자들을 다음 실험을 위해 선별하였다. SCTR과 같은 GPCR이 3개 이상의 암 단계에서 나타났다. SCTR이 정상 조직보다 암 조직에서 발현이 저하되면서 높은 메틸화 수준을 보이는 것을 확인할 수 있었다.

유방암에서 SCTR의 역할을 밝히기 위해, MCF-10A 세포에 일시적으로 SCTR의 mRNA를 표적으로 하는 siRNA를 형질주입하여 SCTR의 발현을 저해시켰고, 이를 마이크로어레이 분석을 통해 게놈 수준의 발현 양상을 확인해보았다. IPA의 결과는 종양형성에서의 역할이 있음을 내포하는 “세포의 움직임, 암,연결조직 질병”경로를 Top네트워크로 나타냈다.

이 네트워크에서 특히, 세포주기와 연관된 유전자의 다수가 발현이 증가되었거나 저해되었는데, SCTR의 경우 siRNA에 의해 발현이 저해되었을 때 세포 분열이 증가하였다. 이는 SCTR이 종양 억제자 같은 활동성을 가지고 있다는 것을 의미한다.

세포 주기에서 SCTR이 정상세포와 암세포에서 다르게 작용하는지를 확인하고자, 안정된 형질주입에 의해 MCF-7 암세포에서 SCTR을 과발현시켰고, 세포 주기의 측면에서 그 세포들을 관찰해보았다. 그 결과, G1기 세포들은 30% 증가되었고 S기와 G2/M기의 세포의 40%감소되어 전체적으로 세포 분열이 35% 증가되었음을 확인하였다. 이 사실은 SCTR이 세포주기에 연관된 유전자들을 조절하면서 MCF-7 암세포의 세포 분열을 촉진시킨다는 것을 의미한다.