초록 ▼

○ 연구목표
제 1군 법정감염병인 장출혈성 대장균의 신속한 분리 동정법 개발은 위한 독소특이항체 및 마그네틱 비드를 이용한 키트 개발

○ 연구내용
Shiga-toxin 1 및 2 A subunit 재조합 단백질 정제 : Stx-1은 재조합 단백질을 확보하였으며,Stx-2는 균액으로부터 단백질을 정제하여 사용하였다.

Stx1 및 Stx2 단클론 항체 생산 및 외막단백질과의 교차반응 확인 : Balb/c 마우스를 이용하여 단클론항체를 생산하는 cell line들을 확보 하였으며, 생산된 항체가 다른

○ 연구목표
제 1군 법정감염병인 장출혈성 대장균의 신속한 분리 동정법 개발은 위한 독소특이항체 및 마그네틱 비드를 이용한 키트 개발

○ 연구내용
Shiga-toxin 1 및 2 A subunit 재조합 단백질 정제 : Stx-1은 재조합 단백질을 확보하였으며,Stx-2는 균액으로부터 단백질을 정제하여 사용하였다.

Stx1 및 Stx2 단클론 항체 생산 및 외막단백질과의 교차반응 확인 : Balb/c 마우스를 이용하여 단클론항체를 생산하는 cell line들을 확보 하였으며, 생산된 항체가 다른 단백질들과 교차반응이 없음을 확인하였다.

Protein G & protein A magnetic bead의 항체 부착능 확인: Protein G&A 모두 항체의 부착능이 유사하였으며, 본 연구에서는 4℃에서 18시간 반응을 통해 비드와 항체의 부착을 최적화하였다.

Stx1 producing E. coli & Stx2 producing E. coli의 분리 확인: 전 배양과정에서 2시간 이후부터 분리율이 급격히 증가하였으며, 신속한 균분리를 위해 4시간 배양을 최적의 조건으로 확립하였다.

병원성 대장균의 분리 한계 확인: 일반대장균(10⁸CFU)에 장출혈성대장균(10²~10⁴CFU)을 단계별로 희석하고 마그네틱 비드-항체를 첨가하여 배양 후 자석을 이용하여 일반대장균을 세척한 결과,10²CFU의 경우 100개의 콜로니중 약 80개 이상 (>80%)의 콜로니가 장출혈성대장균임을 확인하였다.

정상세균총 및 다른 병원성 세균과의 교차반응 확인: 일반대장균 및 다른 병원성 세균과의 분리동정에서도 모두 80% 정도의 균분리율을 확인하였다.

Wild type 균주의 분리율 : O157주의 경우 90% 이상의 분리율을 보였으며, 다른 혈청형의 경우에는 80%의 분리율을 확인하였다.

○ 기대성과 및 활용방안
[공익적 측면]: 비병원성 대장균과의 선별분리에 어려움으로 인해 많은 비용과 시간 그리고 노동력을 사용하여 장출혈성 대장균을 분리하고 있으나, 본 키트의 개발로 모든 면에서 간편하고 신속한 병원체의 분리,동정이 이뤄짐으로써 질병의 확산 방지에도 커다란 효과가 있을 것으로 기대된다.

[경제.산업적 측면]: 장출혈성 대장균의 분리동정에 사용되는 막대한 유전자 분석 비용과 시간 그리고 노동력의 소모를 획기적으로 줄일 것이다.
본 연구를 통해 장출혈성 대장균의 분리동정의 초석을 마련하면 궁극적으로 의료비 및 관련 사회 비용 등의 절감을 유도하고, 국제적 특허 취득으로 인한 국가 경제에 이바지 할 뿐 만아니라 국제 특허에 대한 대체를 통해 국부 유출을 줄일 것이다.

[기술적 측면]: 장출혈성 대장균 뿐만 아니라 다른 병원체의 특이항원을 선별하여 병원체의 분리동정을 다양한 병원체로 확대 시킬 수 있을 것으로 기대된다.

( 출처 : 요약서 )

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 연구최종보고서 ... 2
• 내부연구과제 요약서 [총괄] ... 3
• 내부연구과제 연구결과 요약서 [총괄과제] ... 4
• 제1장 연구의 목적 및 필요성 ... 5
• 제2장 연구의 연구목표 및 달성도, 대외기여도 ... 6
• 제3장 국내·외 기술개발 현황 ... 6
• 제4장 연구의 내용 및 결과 ... 8
• 1. Shiga-toxin 1 및 2 A subunit 재조합 단백질 정제 ... 8
• 2. 마우스 면역을 통한 단클론항체 제작 ... 8
• 3. Stx1 & Stx2 단클론 항체 생산 및 외막단백질과의 교차반응 확인 ... 9
• 4. Protein G & protein A magnetic bead의 항체 부착능 확인 ... 10
• 5. Stx1 producing E. coli & Stx2 producing E. coli의 분리 확인 ... 10
• 6. 병원성 대장균의 분리 한계 확인 ... 11
• 7. 정상세균총 및 다른 병원성 세균과의 교차반응 확인 ... 11
• 8. 쉬가 독소 분비를 증가시키는 첨가제에 의한 분리율 확인 ... 14
• 9. Wild type 균주의 분리율 ... 14
• 10. 세척방법 및 세척액에 의한 분리율 ... 15
• 제5장 연구결과의 활용계획 ... 15
• 제6장 연구의 주요 연구 성과 및 계획 ... 15
• 제6장 기대성과 및 활용방안 ... 15
• 제7장 주요 연구 변경사항 ... 16
• 제8장 추가 연구 계획 ... 16
• 제9장 연구비 집행 실적 내역 ... 17
• 제10장 참여연구원 ... 19
• 제11장 참고문헌 및 첨부문서 ... 19
• 끝페이지 ... 21