보고서 정보
주관연구기관 |
국립수산과학원 National Fisheries Research and Development Institute |
연구책임자 |
김명석
|
참여연구자 |
정승희
,
조미영
,
도정완
,
한현자
,
김진도
,
황금빛
,
최혜승
,
정현도
,
전려진
,
정진욱
|
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 |
한국어
|
발행년월 | 2017-02 |
과제시작연도 |
2016 |
주관부처 |
해양수산부 Ministry of Oceans and Fisheries |
등록번호 |
TRKO201700007563 |
과제고유번호 |
1525005462 |
사업명 |
수산시험연구 |
DB 구축일자 |
2017-10-12
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키워드 |
넙치.진단키트.에드와드병.연쇄구균병.비브리오병.olive flounder.diagnostic kit.Edwardsiellosis.Streptococcosis.Vibriosis.
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DOI |
https://doi.org/10.23000/TRKO201700007563 |
초록
▼
국내 양식 넙치에 발생하는 중요한 세균성 질병인 연쇄구균병, 에드와드병, 비브리오병에 대한 새로운 진단법과 진단키트를 개발하였음
1. 어병 세균의 유전자 정보 확보를 위해 연쇄구균, 에드와드균, 비브리오균에 대해 16S rDNA 염기서열 비교·분석, 종판별 부위 선정, 진단 probe 선별, 반응 조건 최적화로 PNA기반 RT-PCR 시제품을 제작
2. 3종 어병세균 (E. tarda, S. parauberis, V. harveyi)에 대한 단클론 항체를 제작하였고 다수의 어병 세균과 교차반응 테스트를 통하
국내 양식 넙치에 발생하는 중요한 세균성 질병인 연쇄구균병, 에드와드병, 비브리오병에 대한 새로운 진단법과 진단키트를 개발하였음
1. 어병 세균의 유전자 정보 확보를 위해 연쇄구균, 에드와드균, 비브리오균에 대해 16S rDNA 염기서열 비교·분석, 종판별 부위 선정, 진단 probe 선별, 반응 조건 최적화로 PNA기반 RT-PCR 시제품을 제작
2. 3종 어병세균 (E. tarda, S. parauberis, V. harveyi)에 대한 단클론 항체를 제작하였고 다수의 어병 세균과 교차반응 테스트를 통하여 특이도 높은 항체를 확보하여 rapid kit 제작
3. 연쇄구균병, 에드와드병, 비브리오병에 걸린 넙치의 면역진단키트, 분자진단키트, 미생물 배양법을 비교하여 임상증상이 있는 넙치에서 진단키트 결과의 유효성 확인
4. 연쇄구균, 에드와드균, 비브리오균의 테트라사이클린계, 퀴놀론계 항생제에 대한 내성 유전자를 분석하여 항생제 내성 유전자 판별을 통한 신속 처방법 개발
(출처:보고서 요약 p.3)
Abstract
▼
Outcome
1. Securement of genetic information about fish pathogenic bacteria to develop a molecular diagnostic kit
a. Analysis of DNA sequencing in Streptococcus spp., E. tarda and Vibrio spp.
To obtain the genetic information of fish pathogenic bacteria, we performed a comparative DNA
Outcome
1. Securement of genetic information about fish pathogenic bacteria to develop a molecular diagnostic kit
a. Analysis of DNA sequencing in Streptococcus spp., E. tarda and Vibrio spp.
To obtain the genetic information of fish pathogenic bacteria, we performed a comparative DNA sequencing analysis using the 16S rDNA gene. Consequently, we developed detection makers of high pathogenic S. iniae and genotype detection makers of E. tarda.
b. Analysis of the antibiotics resistance gene of fish pathogenic bacteria
Tetracycline and quinolone resistance genes were investigated on Streptococcus spp., E. tarda, Vibrio spp.. respectively. We discovered new antibiotics resistance genes from fish pathogenic bacteria.
2. Development of a molecular diagnostic kit and a immune diagnostic kit for the diagnosis of bacterial diseases in cultured olive flounder
a. Development of a molecular diagnostic kit and a immune diagnostic kit for streptococcsis, edwardsiellosis and vibriosis
We selected maker genes in fish pathogenic bacteria and sort of a diagnostic probe. We also optimized reaction condition. Based on these results, we developed the PNA based real time-PCR. Monoclonal antibodies were created with three species of bacteria such as E. tarda, S parauberis and V. harvey. So, the rapid kit was formed with high specificity antibodies after completing cross species tests with some other infectious bacterial species.
b. Development of a rapid detection system for antibiotics resistance genes
To prescribe antibiotics that does not need bacterial culture, we developed the real time-PCR based diagnostic method. It can detect tetracycline and quinolone resistance genes on Streptococcus spp., E. tarda and Vibrio spp.
3. Field test of the rapid diagnostic kit
a. Field application of the diagnostic kit for three target species of bacteria
We compared the results that we obtained from the immune diagnostic kit, the molecular diagnostic kit and the bacterial culture method, to confirm the validation of diagnostic results in flounder infected with Edwardsiellisos, Streptococosis and Vibriosis. Then, we conducted a filed test for cultured flounder with the symptoms.
(출처:SUMMARY p.5)
목차 Contents
- 표지 ... 1
- 제출문 ... 2
- 보고서 요약 ... 3
- 요약문 ... 4
- SUMMARY ... 5
- 목차 ... 6
- CONTENTS ... 7
- 제 1 장 연구개발과제의 개요 ... 8
- 제 2 장 국내외 기술개발 현황 ... 11
- 제 3 장 연구개발 수행내용 및 결과 ... 17
- 제1절 분자 진단키트 제작을 위한 어병 세균 3종 유전자 정보 확보 ... 17
- 1. Streptococcus spp., E. tarda and Vibrio spp.의 유전자 정보 확보 ... 17
- 2. 어병 세균의 항생제 내성 유전자 분석 ... 24
- 제2절 넙치 세균성 질병 진단용 분자 진단 키트 및 면역 진단 키트 제작 ... 30
- 1. 연쇄구균병, 에드와드병, 비브리오병 분자 진단 키트 제작 ... 30
- 2. 연쇄구균병, 에드와드병, 비브리오병 면역 진단 키트 제작 ... 43
- 3. 항생제 신속처방 시스템 구축 ... 47
- 제3절 진단키트 현장 평가 ... 56
- 1. 진단키트 유효성 평가 ... 56
- 2. 진단키트 현장 적용 ... 60
- 제 4 장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 66
- 제 5 장 연구개발결과의 활용계획 ... 68
- 제 6 장 참고문헌 ... 69
- 끝페이지 ... 70
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