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Ⅳ. 연구 결과

❍ 야생동물협의회를 통한 전국 야생동물구조센터와 국립환경과학원간의 유기적 공조를 통한 효율적인 전국 야생동물시료 채취·수집과 질병감염 조사 및 모니터링을 위한 체계를 구축
‑ 전국 야생동물구조센터의 시료채취·수집 및 보관에 관련된 물품의 균일화: 지역거점 야생동물질병 진단기관(본 연구과제에서는‘경남야생동물센터’가 지역거점 진단기관 역할 담당)에서 일괄적으로 통일된 물품을 전국야생동물구조센터에 발송하였다
‑ 살아있는 상태로 구조된 야생동물의 시료채취 및 수집·보관 매뉴얼을 마련 및 전국

Ⅳ. 연구 결과

❍ 야생동물협의회를 통한 전국 야생동물구조센터와 국립환경과학원간의 유기적 공조를 통한 효율적인 전국 야생동물시료 채취·수집과 질병감염 조사 및 모니터링을 위한 체계를 구축
‑ 전국 야생동물구조센터의 시료채취·수집 및 보관에 관련된 물품의 균일화: 지역거점 야생동물질병 진단기관(본 연구과제에서는‘경남야생동물센터’가 지역거점 진단기관 역할 담당)에서 일괄적으로 통일된 물품을 전국야생동물구조센터에 발송하였다
‑ 살아있는 상태로 구조된 야생동물의 시료채취 및 수집·보관 매뉴얼을 마련 및 전국 야생 동물구조센터와 공유하였다.
‑ 야생동물질병 조사를 위한 폐사체 야생동물시료채취 및 수집·보관 매뉴얼을 마련하였다.
‑ 야생동물질병 조사를 위해 수집·보관된 냉동시료는 질병검사를 위한 콜드체인 수송에 필요한 물품을 통일하여, 지역거점 야생동물질병 진단센터에서 일괄적으로 준비, 월 1회 지속적으로 시료수집 지역 센터로 발송하였다.

❍ 전국 야생동물구조센터에서 구조된 야생동물의 질병조사를 위한 구조 현황 및 시료정보 파악을 위한 정보공유
‑ 2016년 전국 지역 센터별, 축종별 구조현황과 치료 및 폐사체 현황에 대한 자료수집 및 분석을 통해 구조현황 및 폐사체 현황에 관한 정보를 공유하였다:
• 2016년(1월~10월) 전국 야생동물구조센터에 접수된 구조건수는 총 9,530건이었다.
• 축종별 전국 야생동물구조현황은 조류 6,825점(71.6%), 포유류 2,652점(27.8%), 파충류 52점(0.5%)으로 조류가 전체 야생동물구조의 71.6%를 차지, 가장 구조 빈도가 높았다.
• 전국 총 9,530건의 구조·접수 중 구조 후 조치 및 치료가 이루어진 건수가 5,123건 (53.8%), 폐사체로 접수 또는 구조·접수 후 폐사된 개체는 4,407(46.2%)건이었다.
‑ 2016년 전국 야생동물구조센터에 접수, 구조·치료 및 폐사된 야생동물로 부터 야생동물 감염병 검사를 위한 폐사체 수집·보관 및 수송이 이루어졌다(국립환경과학원).
• 야생동물반입이 금지된 제주도를 제외한 모든 지역 센터로부터 포유동물 폐사체가 225점 (107%), 조류 사체가 313점(313%)으로 모두 폐사체 시료수집에 대한 기준목표 초과달성이 이루어졌다.
• 포유동물 페사체 수집 기준목표치는 210점으로 설정되었고, 실제 수집결과 포유동물 폐사체 총 225점(104%)이 수집, 기준목표에 충분히 도달하였다. 수집된 폐사체 시료 중, 고라니 176점(117%), 너구리 39점(78%), 노루 4점(40%), 기타 포유동물 6점이 수집되었다.
‑ 2016년 전국 야생동물구조센터에 접수, 구조·치료 및 폐사된 야생동물로 부터 야생동물 감염병 검사를 위한 시료 채취(혈액) 및 수집은 거점 야생동물감염병진단기관(경남야생동물센터)을 중심으로 이루어졌다.
‑ 수집·보관된 시료는 시료정보와 함께 상위기관(국립환경과학원)에 제공되었다.
• 국립환경과학원에 제공된 혈청시료는 고라니 233점(155%), 너구리 91점(114%), 노루 24점 (80%), 조류 146점(146%) 총 494점으로, 수집계획에 없었던 오소리 혈청시료가 1점이 추가되었다(총 495점). 노루 혈청시료를 제외하고 계획·수집한 모든 동물혈청시료에서 기준목표치를 초과달성하였다.

❍ 야생동물 감염병 검사를 위해 2016년 전국 야생동물구조센터로부터 수집 및 보관된 시료 (혈청과 진드기)는 거점 야생동물감염병진단기관(경남야생동물센터)으로 콜드체인수송을 통해 확보되었고, 중증열성혈소판감소증후군(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome, SFTS) 감염검사에 사용되었다.
‑ 포유동물에서 수집된 혈청은 고라니 233점, 너구리 91점, 노루 24점으로 국립환경과 학원에 제공된 포유동물 혈청시료 모두를 포함시켰다. 고라니 1점, 오소리 1점의 혈청시료가 추가되어, 총 349점의 혈청시료가 수집되었다.
• 지역별로는 총 349점 혈청 중 강원 32점(9.2%), 경기 34점(9.7%), 경북 6점(1.7%), 대전 14점(4.0%), 부산 30점(8.6%), 울산 17점(4.9%), 경남 82점(23.5%), 제주 18점(5.2%), 전남 16점(4.6%), 전북 43점(12.3%), 충남 33점(9.5%), 충북 24점(6.9%)으로 경남시료가 23.5%로 비교적 높은 혈청시료점유율을 나타냈고, 8%미만의 시료점유율을 보인 지역은 경북, 대전, 울산 제주, 전남, 충북 등인 것으로 나타났다.
• 계절별로는 총 349점 혈청 중 3월 19점(5.4%), 4월 22점(6.3%), 5월 13점(3.7%), 6월 37점 (10.6%), 7월 63점(18.1%), 8월 47점(13.5%), 9월 57점(16.3%), 10월 75점(21.5%), 11월 16점(4.6%)이 수집·확보되었으며 7~10월 사이에 총 시료의 70%에 가까운 시료가 수집되었다.
• 포유동물별로는 총 349점 시료 중 고라니 혈청 233점(66.8%), 너구리 혈청 91점 (26.1%), 노루 혈청 24점(6.9%), 기타 오소리 혈청 1점(0.3%)으로 고라니 혈청이 전체 혈청시료의 67%로 가장 많이 수집되었다.
‑ 고라니, 너구리, 노루 등의 포유동물 163개체에서 수집된 진드기시료는 총 1,466마리였으며 진드기수집기준 목표치를 47%초과 달성하였다. 지역별, 시기별, 포유동물의 종류별로 진드기시료 분포현황은 다음과 같다.
• 수집된 총 1,466마리의 진드기는 지역별로 강원 185마리(12.6%), 경기 42마리(2.9%), 경북 58마리(4.0%), 대전 60마리(4.1%), 부산 196마리(13.4%), 울산 121마리(8.3%), 경남 146마리(10.0%), 제주 172마리(11.7%), 전남 120마리(8.2%), 전북 68마리(4.6%), 충남 168마리(11.5%), 충북 130마리(8.9%)로 전국적으로 3~13%사이에서 지역 수집률을 나타났다.
• 수집된 총 1,466마리의 참진드기는 계절별로 3월 33마리(2.3%), 4월 37마리(2.5%), 5월 64마리(4.3%), 6월 370마리(25.2%), 7월 311마리(21.2%), 8월 221마리(15.1%), 9월 283마리(19.3%), 10월 98마리(6.7%), 11월 49마리(3.3%)로 6~9월 사이에 전체 수집된 진드기의 80%이상이 수집되었다.
• 수집된 총 1,466마리의 진드기는 포유동물별로 고라니 951마리(64.9%), 너구리 261마리 (17.8%), 노루 254마리(17.3%)로 총 진드기시료의 약 65%가 고라니에서 수집되었다.
‑ 전국에서 구조된 야생동물 고라니, 너구리, 노루 등의 포유동물 163마리로부터 1,466 마리의 진드기를 수집, 종별·발육단계별 동정하여 분류한 결과는 다음과 같다.
• 1,466마리의 참진드기 중 Haemaphysalis longicornis (작은소피참진드기)가 87%로 대부분을 차지했고, Ixodes nipponensis (일본참진드기), Haemaphysalis flava (개피참진드기)는 각각 8.7%, 4.3%의 진드기시료점유율을 나타냈다.
• 발육단계별로 수집된 진드기시료를 동정·분석한 결과 수집된 시료의 대부분을 차지하는 Haemaphysalis longicornis (작은소피참진드기)과 Ixodes nipponensis (일본참진드기)는 발육단계 중 성충이 각각 70.6%, 89.1%로 대부분을 차지하는 것으로 나타났다. 성충 중 암컷의 비율은 이들 두 종에서 각각 81.8%, 91.2%로, 암컷이 수컷에 비해 채집빈도가 매우 높은 것으로 나타났다.

❍ 수집된 혈청 및 참진드기 pool시료는 중증열성혈소판감소증후군(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome, SFTS) 감염조사를 위한 검체로 사용하였다.
‑ 전국 센터에서 수집된 1,466마리의 참진드기는 검체로 사용하기 위해 개체별로 분리하여한 pool당 평균 3.1마리가 들어있는 465개의 pool시료로 만들어졌다.
‑ 혈청시료에 대한 감염조사: 수집된 총 349개의 혈청 중 329점의 혈청이 최종적으로 사용 되었다. 검출률의 정확성을 위해 IC RNA를 추출과정부터 첨가, viral RNA추출 및 증폭 과정의 오류가 발생한 시료 및 불량한 시료 20점을 모두 배제시켰다.
• TaqMan® One-Step Real-Time RT-PCR(1차 양성 스크리닝, target region 75bp)에 의해 1차적으로 스크리닝한 결과, 총 49점이 양성의심검체로 평가되었다.
• 양성의심검체로 평가된 혈청시료 총 49점에 대해 One-Step RT-Nested PCR(2차 확진 검사, target region 346bp)에 의해 최종적으로 양성검체를 확진했다. 확진된 양성검체는 총 6점으로, 1.82%(6/329)의 양성검출률을 나타냈으며, 그 중 1점의 시료(G1363S)가 DNA염기서열분석에 의해 99% 일치를 보였다.
• 계절별 야생동물혈액의 SFTSV 감염률 현황은 6월 5.4%를 나타냈고 8월, 9월, 10월 각각 2.2%, 20.%, 2.8%를 나타냈다.
‑ 진드기 pool시료에 대한 감염조사: 총 1,466마리의 참진드기 시료는 465개의 pool로 만들어졌다. 검사과정에서 48개의 시료가 누락 및 증폭과정 오류로 제외되어, 총 461개의 pool 시료가 유전자 감염검사에 검체로 사용되었다.
• 총 461개의 pool시료에 대해 TaqMan® One-Step Real-Time RT-PCR(1차 검사, target region 75bp)에 의해 1차적으로 스크리닝한 결과, 149개의 진드기 pool시료가 의심검체로 평가되었다.
• 양성의심검체(149개의 진드기pool시료)에 대해 One-Step RT-Nested PCR(2차 확진 검사, target region 346bp)에 의해 최종적으로 확진된 양성검체는 43개의 진드기pool시료로 3.2%(43/1,351)의 야외최소감염률(MFIR)을 나타냈다.
• 확진된 양성검체 43개 pool시료중 24개의 pool에서 확인된 진한 target band(346bp)는 DNA염기서열분석이 이루어졌고, 그 결과는 L21H-2를 제외하고는 99% 일치하는 결과를 나타냈다.
• 지역별 MFIR현황은 양성검출은 강원 0.6%, 경기 34.2%, 대전 1.9%, 부산 1.1%, 울산 0.8%, 경남 3.4%, 제주 2.6%, 전남 5.9%, 전북 4.5%, 충남 3.2%, 충북 1.5%를 보였으며, 가장 높은 야외최소감염률을 보인 곳은 경기지역으로 나타났다.
• 계절별 MFIR현황은 양성검출은 3월 3.0%, 4월 2.7%, 6월 1.2%, 7월 4.7%, 8월 9.2%, 9월 0.7%, 10월 1.4%, 11월 3.1%로 나타났으며, 8월에 가장 높은 MFIR을 보였다. 포유동물별로 MFIR은 고라니, 너구리, 노루에서 각각 3.8%, 1.6%, 2.5%를 나타냈으며, 고라니에서 가장 높은 MFIR을 보였다.
(출처:요약문 4~8p)

목차 Contents

• 표지 ... 1제출문 ... 2요약문 ... 3목차 ... 9표목차 ... 13그림목차 ... 15I. 서론 ... 18 1. 연구사업의 배경 ... 18 가. 기후변화에 따른 전염병증가 ... 18 나. 야생동물감염병의 통합적 접근 및 관리의 필요성 ... 19 2. 연구 필요성 ... 22 3. 연구 목표 ... 23Ⅱ. 과업의 범위 및 연구추진체계 ... 26 1. 과업의 범위 ... 26 가. 전국야생동물센터와 유기적 공조를 통한 중장기 시료확보방안 마련 ... 26 나. 전국적인 시료확보체계 운영을 통해 수집된 야생동물 시료 및 정보를 상위기관에 제공 ... 26 다. 야생동물별 주요 질병검사를 위한 시료채취·보관·수송 매뉴얼 마련 ... 27 라. 수집·확보된 2016년 야생동물시료의 SFTS 감염률 조사 ... 27 2. 연구추진체계 ... 28 3. 연구추진일정 계획 ... 29 4. 연구원 구성 ... 30Ⅲ. 연구내용 및 방법 ... 32 1. 질병검사를 위한 전국야생동물시료의 효율적인 확보방안마련 ... 32 가. 야생동물 감염병 조사를 위한 전국 야생동물시료의 확보체계구축 ... 32 나. 야생동물감염병 검사를 위한 전국 야생동물시료수집 계획 마련 ... 35 2. 야생동물질병 모니터링을 위한 주요 질병별 시료채취 확보방안 마련 ... 39 가. 포유야생동물별 주요 질병 조사 및 선정 ... 39 나. 동물의 질병조사를 위해 사용되는 다양한 시료들에 대한 조사 ... 39 다. 야생동물구조센터의 구조·치료 업무 중에 채취·보관 가능한 시료 ... 40 3. 전국 시료확보체계 운영을 통해 확보된 야생동물시료의 SFTSV 감염조사 ... 41 가. 야생동물시료의 SFTS 바이러스 감염 조사·진단과정의 매뉴얼 ... 41 나. 수집된 야생동물 혈청시료에 대한 SFTS 감염률 조사·분석 과정 ... 43 나. 야생동물에서 채집한 참진드기의 흡혈·비흡혈 분리 및 동정과 pooling ... 48Ⅳ. 연구결과 및 고찰 ... 52 1. 효율적인 전국 시료확보방안 및 체계구축 ... 52 가. 관계기관의 유기적 공조·협력을 통한 시료확보 ... 52 나. 2016년 전국 야생동물구조센터의 구조현황 ... 55 다. 유기적 공조를 통한 야생동물질병 검사를 위한 전국적인 시료수집 ... 61 2. 야생동물 종류별 주요 감염병 검사를 위한 실험실 시료채취 매뉴얼마련 ... 66 가. 초기 구조·치료 과정에 있는 야생동물로부터 시료채취 ... 70 나. 야생동물 구조·치료 과정에서 발생하는 폐사체로부터 부검을 통한 시료채취 ... 72 3. 수집된 혈청 및 참진드기 시료의 SFTS 바이러스 검출 ... 73 가. 국내외 SFTS 발생동향 및 특성분석 ... 73 나. 2016년 수집·확보된 혈청시료의 SFTSV 감염조사 ... 81 다. 2016년 수집·확보된 진드기시료의 SFTSV 감염조사 ... 90Ⅴ. 결론 및 개선사항 ... 106 1. 결론 ... 106 2. 개선사항 ... 110 가. 야생동물 질병모니터링 네트워크의 필요성 및 목적 ... 110 나. 야생동물 질병모니터링 네트워크 구축 방안 ... 110 다. 야생동물 질병연구 및 구조·치료에 대한 제도개선 사항 ... 111Ⅵ. 기대성과(활용방안) 또는 향후계획 ... 114 1. 기대성과(활용방안) ... 114 2. 향후계획 ... 114Ⅶ. 참고문헌 ... 116Ⅷ. 부 록 ... 120 부록1. 2016년도 전국 야생동물구조센터의 야생동물 종별·지역별 구조·치료 현황 ... 121 부록2. 2016년도 국립환경과학원에 제공된 사체시료 목록 및 정보-포유류 ... 125 부록3. 2016년도 국립환경과학원에 제공된 사체시료 목록 및 정보-조류 ... 129 부록4. 2016년도 국립환경과학원에 제공된 혈청시료 목록 및 정보 ... 134 부록5. 2016년도 SFTSV감염조사를 위해 전국야생동물센터와 유기적 공조를 통해 포유류에서 수집된 혈청 및 진드기 목록 및 정보 ... 141 부록6. 2016년도 야생포유류에서 채집한 진드기의 동정 및 흡혈여부 조사 및 진드기 pool시료 목록·정보 및 SFTSV 감염검사 결과 ... 149 부록7. 2016년도 개체별 수집된 혈청 및 진드기시료의 SFTSV 감염검사 결과 ... 159 부록8. 2016년도 국내 야생동물 혈청 및 진드기pool의 양성시료로부터 부분적인 SFTSV의 S 분절(346bp)에 대한 유전자분석결과 및 계통도 작성을 위해 사용된 DNA 염기서열 ... 167 부록9. 2016년도 야생동물 질병진단을 위한 시료채취 매뉴얼 ... 174끝페이지 ... 248