최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
다음과 같은 기능을 한번의 로그인으로 사용 할 수 있습니다.
NTIS 바로가기다음과 같은 기능을 한번의 로그인으로 사용 할 수 있습니다.
DataON 바로가기다음과 같은 기능을 한번의 로그인으로 사용 할 수 있습니다.
Edison 바로가기다음과 같은 기능을 한번의 로그인으로 사용 할 수 있습니다.
Kafe 바로가기주관연구기관 | 충북보건과학대학교 산학협력단 |
---|---|
연구책임자 | 박기랑 |
참여연구자 | 최영국 |
보고서유형 | 최종보고서 |
발행국가 | 대한민국 |
언어 | 한국어 |
발행년월 | 2016-11 |
과제시작연도 | 2016 |
주관부처 | 식품의약품안전처 Ministry of Food and Drug Safety |
등록번호 | TRKO201700017581 |
과제고유번호 | 1475008998 |
사업명 | 의약품등안전관리 |
DB 구축일자 | 2017-11-25 |
키워드 | 유전자치료.품질평가시험.검증.gene therapy.QC testing.validation. |
DOI | https://doi.org/10.23000/TRKO201700017581 |
◆ 총괄 연구 목표
1. 유전자치료제 제조에 사용되는 세포기질, 바이러스 은행, 플라스미드 DNA 등을 포함한 원료의 특성분석 및 품질평가 시험법 확립
2. 제품화에 근접한 Adeno-associated virus(AAV) 바이러스 벡터 및 비바이러스 벡터인 플라스미드 DNA 유전자치료제의 원액 및 완제품의 품질관리를 위한 품질평가 시험법 확립
◆ 1차년도 연구 내용 및 결과
1. 유전자치료제의 품질관리 관련 시험법의 국제기준 및 해외 CRO의 관련 자료 등 유전자치료제의 품질평가를 위한 시험법개발 동향
◆ 총괄 연구 목표
1. 유전자치료제 제조에 사용되는 세포기질, 바이러스 은행, 플라스미드 DNA 등을 포함한 원료의 특성분석 및 품질평가 시험법 확립
2. 제품화에 근접한 Adeno-associated virus(AAV) 바이러스 벡터 및 비바이러스 벡터인 플라스미드 DNA 유전자치료제의 원액 및 완제품의 품질관리를 위한 품질평가 시험법 확립
◆ 1차년도 연구 내용 및 결과
1. 유전자치료제의 품질관리 관련 시험법의 국제기준 및 해외 CRO의 관련 자료 등 유전자치료제의 품질평가를 위한 시험법개발 동향 조사
2. 유전자치료제 제조에 사용되는 세포기질, 바이러스 은행, 플라스미드 DNA 등을 포함한 원료의 특성분석 및 품질평가 시험법 확립: 제품화에 가장 근접한 운반체(벡터)로 Adeno-associated virus(AAV) 및 플라스미드 DNA 벡터를 시험법 개발 대상 유전자치료제로 선정, GMP 제조를 고려한 제조공정별 품질관리 시험항목 설정, 세포주(E.coli, HEK293, Sf9 등) 또는 발현벡터 등의 특성분석, 오염인자 검출시험법 등 품질 평가시험법 개발, 검증 및 표준화(SOP) 확립
3. 플라스미드 벡터 원료: identity(DNA sequencing, mRNA sequencing, marker retention(plasmid loss testing), E.coli host cell identification(16S rRNA gene sequencing, API 20E testing), DNA sequence of plasmid DNA from cell bank), stability(Copy number, integration site number and structure map confirmation), purity(bacteriophage detection in microbial cell bank, residual DNA analysis)
4. AAV 벡터 원료: 원료(plasmid, baculovirus) strength & purity(determination of concentration, determination of A260/A280, titration of baculovirus by qPCR), 원료(plasmid, cell substrate) safety(determination of endotoxin, determination of FHV, NoV, BoV, PaV by qPCR, determination of Spiroplasma species by EP methods, RAPD analysis, Isoenzyme analysis), 원료(AAV trans & cis plasmid) identity(full length sequencing and restriction enzyme analysis, sequencing(5’and 3’ITR, transgene, promoter, poly A signal) and restriction enzyme analysis)
◆ 2차년도 연구 내용 및 결과
1. 유전자치료제(AAV 및 플라스미드 DNA)의 원액 및 완제품의 품질관리를 위한 시험법 확립: 잔류단백질시험 등 원액 및 완제품 단계에서의 품질 평가시험법 개발, 원액 및 완제품의 품질관리 시험법 검증 및 표준화(SOP) 확립
2. 유전자치료제의 품질관리에 필요한 품질평가 시험법 제시
3. 플라스미드 벡터 원액 및 완제품: Determination of plasmid isoform or residual RNA by electrophoresis &HPLC
4. AAV 벡터 원액 및 완제품: Physical particles titer assay of AAV vector by an ELISA, titration of recombinant AAV viral genomes by a qRT-PCR, AAV vector infectious titer assay by a Taqman TCID50, AAV vector titration by an OD260/OD280, AAV vector purity and identity assay by a SDS-PAGE, Detection and quantitation of residual Sf9 DNA by a qRT-PCR, Detection and quantitation of residual Sf9 host cell protein by an ELISA, Detection of residual Benzonase by an ELISA, Detection of replication competent AAV(rcAAV), Detection and quantitation of residual plasmid DNA by a qRT-PCR
( 출처 : 요약문 6p )
The project aims were to develop characterization testing methods of cell substrate, virus banks, plasmid DNA etc., as raw materials in manufacturing of gene therapeutic products and also to establish QC testing protocols of bulk harvest and finished lots for Adeno-associated virus(AAV) vectors and
The project aims were to develop characterization testing methods of cell substrate, virus banks, plasmid DNA etc., as raw materials in manufacturing of gene therapeutic products and also to establish QC testing protocols of bulk harvest and finished lots for Adeno-associated virus(AAV) vectors and plasmid DNA as non-viral vectors, which were evaluated as the most recommended gene delivery vectors for BLA approval.
The first year of this study was to investigate the international regulatory guidelines and the related information from global CROs for quality control and QC testing protocols of gene therapeutics’s production. We developed and established characterization testing methods of cell substrate, virus banks, plasmid DNA etc., as raw materials in manufacturing of AAV and plasmid DNA vectors based on manufacturing process. For raw materials of plasmid DNA vectors of gene therapeutic products, the testing methods of identity(DNA sequencing, mRNA sequencing, marker retention(plasmid loss testing), E.coli host cell identification(16S rRNA gene sequencing, API 20E testing), DNA sequence of plasmid DNA from cell bank),stability(Copy number, integration site number and structure map confirmation) and purity(bacteriophage detection in microbial cell bank, residual DNA analysis) were established.
For AAV vectors, the characterization protocols of raw materials(plasmid, baculovirus) strength & purity(determination of concentration, determination of A260/A280, titration of baculovirus by qPCR), raw materials(plasmid, cell substrate) safety(determination of endotoxin, determination of FHV, NoV, BoV, PaV by qPCR, determination of Spiroplasma species by EP methods, RAPD analysis, Isoenzyme analysis), raw materials(AAV trans & cis plasmid) identity(full length sequencing and restriction enzyme analysis, sequencing(5’ and 3’
ITR, transgene, promoter, poly A signal) and restriction enzyme analysis) were established.
All testing protocols were validated to generate SOPs using a method validation process.
The second year of this study was to develop QC testing protocols of bulk harvest and finished lots for Adeno-associated virus(AAV) vectors and plasmid DNA such as residual DNA, residual host cell protein, residual agents derived from manufacturing process. For bulk harvest and final products of plasmid DNA, plasmid isoform or residual RNA were determined by electrophoresis & HPLC. For bulk harvest and final products of AAV, QC testing protocols of physical particles titer assay of AAV vector by an ELISA, titration of recombinant AAV viral genomes by a qRT-PCR, AAV vector infectious titer assay by a Taqman TCID50, AAV vector titration by an OD260/OD280, AAV vector purity and identity assay by a SDS-PAGE, detection and quantitation of residual Sf9 DNA by a qRT-PCR, detection and quantitation of residual Sf9 host cell protein by an ELISA, detection of residual Benzonase by an ELISA, detection of replication competent AAV(rcAAV), detection and quantitation of residual plasmid DNA by a qRT-PCR were developed and established. All testing protocols were validated to generate SOPs using an analytical method validation process.
( 출처 : SUMMARY 8p )
과제명(ProjectTitle) : | - |
---|---|
연구책임자(Manager) : | - |
과제기간(DetailSeriesProject) : | - |
총연구비 (DetailSeriesProject) : | - |
키워드(keyword) : | - |
과제수행기간(LeadAgency) : | - |
연구목표(Goal) : | - |
연구내용(Abstract) : | - |
기대효과(Effect) : | - |
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.