초록 ▼

실험동물을 이용하지 않거나 또는 사용되는 실험동물수를 줄이거나 혹은 실험동물에 스트레스 등을 줄이는 방법을 이용하는 3R(replacement, reduction, refinement) 원칙에 따라 동물실험을 대체하기 위한 대체법 개발이 국제적으로 활발히 진행되고 있으며, OECD와 EU 등은 전담기관을 두어 대체시험법에 대한 개발을 추진 중에 있다. 현재 피부감작성과 관련된 대체시험법으로 가장 보편화 된 대체시험 방법으로 마우스의 국소 림프절의 림프구 증식 정도를 분석하는 국소림프절시험법이 있으나 동물은 전혀 사용하지 않는, 좀

실험동물을 이용하지 않거나 또는 사용되는 실험동물수를 줄이거나 혹은 실험동물에 스트레스 등을 줄이는 방법을 이용하는 3R(replacement, reduction, refinement) 원칙에 따라 동물실험을 대체하기 위한 대체법 개발이 국제적으로 활발히 진행되고 있으며, OECD와 EU 등은 전담기관을 두어 대체시험법에 대한 개발을 추진 중에 있다. 현재 피부감작성과 관련된 대체시험법으로 가장 보편화 된 대체시험 방법으로 마우스의 국소 림프절의 림프구 증식 정도를 분석하는 국소림프절시험법이 있으나 동물은 전혀 사용하지 않는, 좀 더 정확한 의미의 동물대체 시험법 개발을 시급하다. 현 연구에서 사용하는 HaCaT는 인체유래 각질세포주로써, 유전자 변형이 없는 누구나 구매 및 사용할 수 있는 세포주이며 실제 각질세포와 유사하다. HaCaT를 이용하여 시험물질 처치 후 75%의 세포생존 농도를 구한 후 이 농도 및 희석 농도에서 IL-1α와 IL-6 사이토카인의 발현량을 가지고 감작물질을 구분하는 시험법을 세계 최초로 개발하였다. 이에 인체 유래 각질세포주 HaCaT를 이용한 피부 감작 시험법에 대한 검증 연구를 3개 시험기관이 GLP 수준으로 참여 수행하여 실험실내, 실험실간 재현성을 확인하고 예측력을 평가하였다. 예측력 평가를 위해 총 30종에 대해 3개의 참여팀이 나누어 진행하여 결과를 얻었으며 그에 대한 예측력 결과는 서울대 83.3%(15/18), 대구가톨릭대학교 94.4%(17/18), 서울대학교 병원 72.2%(13/18) 종합적인 정확도 83.3% (25/30)의 예측력을 나타내었다. 이를 통해 본 시험법의 새로운 피부 감작성 대체시험법으로써 가능성을 엿볼 수 있었으며, 본 과제를 통해 시험법의 프로토콜 최적화를 진행하였으며, 엄격한 VMT 검증하에 검증보고서와 통계보고서등을 작성하였으며, 향후 국제 가이드라인채택을 위한 각질세포 타겟 시험법으로 제안하는데 필요한 자료를 마련하였다고 사료된다.

(출처 : 국문 요약문 6p)

Abstract ▼

There has been a considerable effort in recent years in development of a in vitro skin sensitization test targeting key events of the skin sensitization Adverse Outcome Pathway (DPRA, Keratinosens, LuSens, MUSST, hCLAT, Vitosens and GARD). However, one of the most widely used in vitro skin sensitiza

There has been a considerable effort in recent years in development of a in vitro skin sensitization test targeting key events of the skin sensitization Adverse Outcome Pathway (DPRA, Keratinosens, LuSens, MUSST, hCLAT, Vitosens and GARD). However, one of the most widely used in vitro skin sensitization test, Local Lymph Node Assay, LLNA uses animal partly in that the method is based on the proliferation of lymphocyte in lymph node of mice. It is important to develop a new cell-based skin sensitization test which doesn’t need animal.

Human keratinocyte cell line, HaCaT, we use is non-genetic transformed, easy to handle and similar to normal human keratinocyte. So, we developed a novel in vitro skin sensitization test using HaCaT as an alternative to animal experiments and 3 laboratories did validation study of total 30 chemicals to predict performance of our methods. According to our results, the accuracy of each lab is 83.3%(15/18), 94.4%(17/18), 72.2%(13/18) respectively. Thus, this validation study suggests that measuring extracellular production of pro-inflammatory cytokines IL-1α and IL-6 by human HaCaT cells may potentially classify skin sensitizers from non-sensitizers.

(출처 : Summary 8p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 용역연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 제출문 ... 3
• 목차 ... 4
• Ⅰ. 총괄연구개발과제 요약문 ... 6
• 국문 요약문 ... 6
• Summary ... 8
• Ⅱ. 총괄연구개발과제 연구결과 ... 10
• 제1장 총괄연구개발과제의 목적 및 필요성 ... 10
• 제2장 총괄연구개발과제의 내용 및 방법 ... 23
• 제3장 총괄연구개발과제의 최종결과 및 고찰 ... 39
• 제4장 총괄연구개발과제의 연구성과 ... 70
• 제5장 총괄참고문헌 ... 72
• 제6장 첨부서류 ... 76
• 끝페이지 ... 78