초록 ▼

1. ARS network에 속하는 3개의 유전자 (AIMP1, AIMP2, and KRAS)을 pIRES2- EGFP에 클로닝 high affinity streptavidin binding peptide tag과 Western blot 분석용Flag-tag이 함께 들어감.
2. HEK 293T과 HCT-8 세포주에 위의 expression vectors를 transfection하였다. Western blot (FLAG)로 보았을 때, 3개의 proteins이 잘 expression 되는 것을 확인.
3. Affinity

1. ARS network에 속하는 3개의 유전자 (AIMP1, AIMP2, and KRAS)을 pIRES2- EGFP에 클로닝 high affinity streptavidin binding peptide tag과 Western blot 분석용Flag-tag이 함께 들어감.
2. HEK 293T과 HCT-8 세포주에 위의 expression vectors를 transfection하였다. Western blot (FLAG)로 보았을 때, 3개의 proteins이 잘 expression 되는 것을 확인.
3. Affinity purification으로 3 단백질올 세포 extract에서 pull down하였을 때 (AIMP1, AIMP2, AIMP3), copurification 되는 단백질을 SDS-PAGE후 silver staining으로 확인.
4. copurified proteins을 LC-MS/MS하고 그 결과를 SAINT로 statistical validation하였을 때, complex-forming ARSs such as AIMP1, AIMP2, AIMP3, DARS, EPRS, IARS, KARS, LARS, MARS, QARS, RARS이 나타남.
5. HCT-8 대장암 세포 주에서 AIMP1, AIMP2, KARS를 bait로 했욜 때, 각각에서 동정된 37, 143, 86개의 네트워크 단백질을 유형에 따라 분류하였을 때, AIMP1, AIMP2, KARS의 네트워크 단백질이 전체적으로 유사한 분포를 보임. AIMP2의 네트워크 단백질 중에 ion channel, transmembrane receptor, transporter에 관여하는 단백질이 특이적으로 동정.
6. AIMP1 의 두 개의 isoform, AIMP2의 main isoform 뿐만 아니라 DX2 isoform도 발견하였고, 많은 phosphorylation sites (S886 for EPRS, S596 for KARS, etc.) 도 관찰

(출처 : 보고서 요약서 3p)

Abstract ▼

IV. Results
7. Three genes belonging to ARS network (AIMP1, AIMP2, and KRAS) were cloned into an expression vector pIRES2-EGFP with high affinity streptavidin binding peptide tag, plus Flag-tag to aid Western blot analysis.
8. HEK 293T and HCT-8 cells were transiently transfected with the expr

IV. Results
7. Three genes belonging to ARS network (AIMP1, AIMP2, and KRAS) were cloned into an expression vector pIRES2-EGFP with high affinity streptavidin binding peptide tag, plus Flag-tag to aid Western blot analysis.
8. HEK 293T and HCT-8 cells were transiently transfected with the expression vectors. When visiualized by Western blot against FLAG, three proteins were well expressind in both cell lines.
9. Affinity purification of tagged protein (AIMP1, AIMP2, AIMP3) from cell extracts showed copurification several proteins when visualized by silver staining after SDS-PAGE.
10. LC-MS/MS analysis of the copurified proteins and then statistical validation of the mass spectiometric data revealed compkx-forming ARSs such as AIMP1, AIMP2, AIMP3, DARS, EPRS, IARS, KARS, LARS, MARS, QARS, RARS.
11. In HCT-8 colon cancer cell lines, 로 했을 때, the number of identified proeins were 37, 143, and 86 for the bait AIMP1, AIMP2, and KARS respectively. The interaction network of these proteins showed very similar maps. However, The network generated by AIMP2 includes many other proteins such as ion channel, transmembrane receptor, and transporters
12. We identified two isoforms of AIMP1, DX2 isoform as well as the main isoform of AIMP2, and many phosphorylation sites (S886 for EPRS, S596 for KARS, etc.)

(출처 : SUMMARY 6p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 보고서 요약서 ... 3
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 6
• CONTENTS ... 8
• 목차 ... 9
• 제1장 연구개발 과제의 개요 ... 10
• 제1절 연구개발 과제의 정의 ... 10
• 제2절 연구개발대상 기술의 경제적·산업적 중요성 및 연구개발의 필요성 ... 10
• 1. 글로벌(Global) ... 10
• 2. 기초원천(Ground breaking) ... 10
• 3. 융합연구(Group approach) ... 10
• 4. 미래성장(Growth and sustainability) ... 10
• 5. 기타 ... 10
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 12
• 제1절 세계적 수준 ... 12
• 제2절 국내수준 ... 12
• 1. 프로테오믹스 이용기술개발 프런티어 사업 ... 12
• 2. 생체기능조절물질 개발 프런티어 사업 ... 13
• 3. 보건의료유전체 사업 ... 13
• 4. 한국파스퇴르연구소의 세포기반 스크리닝 연구 ... 13
• 제3절 주요연구기관 연구현황 ... 13
• 제3장 연구개발 수행 내용 및 결과 ... 16
• 제1절 ARS 네트워크 단백질의 정성 분석 ... 16
• 제2절 ARS 단백질의 Isoform과 PTM 동정 ... 30
• 제3절 MRM을 이용한 ARS 단백질 정량 ... 37
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 39
• 제1절 단계 목표 ... 39
• 제2절 연구목표 달성도 ... 39
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 40
• 제1절 연구개발결과의 활용방안 ... 40
• 제2절 기대효과 ... 40
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 41
• 제1절 프로테오믹스 분석 기술 발달 ... 41
• 제2절 MRM을 이용한 다중 단백체 정량 분석 흐름 ... 41
• 제3절 프로테오지노믹스를 통한 바이오마커 개발 전략 ... 41
• 제7장 연구시설·정비 현황 ... 43
• 제8장 참고문헌 ... 44
• 끝페이지 ... 44