초록 ▼

IV. 연구개발결과

1. 신선편이채소 중 주요 오염 식중독균 검출을 위한 PCR primer 제작
S. aureus는 16s rRNA, coa (coagulase), can (collagen adhesion), nuc (S. aureus specific gene)의 4개 유전자를 선택하였고, L. monocytogenes는 iap (invasion associated protein), hly (hemolycin), inlA (internalin), 16s rRNA 4개 유전자, Salmonella 에서는 inv (

IV. 연구개발결과

1. 신선편이채소 중 주요 오염 식중독균 검출을 위한 PCR primer 제작
S. aureus는 16s rRNA, coa (coagulase), can (collagen adhesion), nuc (S. aureus specific gene)의 4개 유전자를 선택하였고, L. monocytogenes는 iap (invasion associated protein), hly (hemolycin), inlA (internalin), 16s rRNA 4개 유전자, Salmonella 에서는 inv (Salmonella specific invasion), fliC (fllagella), 16s rRNA의 3개 유전자, E. coli O157:H7는 16s rRNA, eae (intimin), fliC (fllagella), rfb (O157 specific gene)를 목표 유전자로 하여 유전자별 균 특이 프라이머 2-3종을 선택하여 제작하였다.

2. Real-time PCR에 의한 개별 식중독균별 분석조건 확립
식중독균 추적을 위해 국제적으로 정보공유가 가능한 검출용 primer를 1차 선정한 후 PCR을 수행하여 최적 primer를 선정하였다. 결정된 primer를 사용한 검출감도 확인을 위해 Ct값 결정용 real-time PCR을 수행하였다. 각 식중독균의 DNA를 추출하여 이 template를 10배씩 5.2±0.4에서 1.2±0.3 log cfu/mL 세포수가 되도록 단계별로 희석하여 real-time PCR을 수행한 다음 기본 log curve 및 정량 분석을 위한 standard curve를 도출하였다.

3. 유전자 검출용 랩온어칩의 설계 및 제작
랩온어칩은 3D CAD를 이용하여 positive, negative 및 real sample channel과 같이 3채널 구조로 설계하였으며 열 전달 효율을 극대화 할 수 있게 구조 설계되었다. 이러한 설계를 바탕으로 코어금형을 제작 완료하였으며 이를 이용하여 Cyclo Olefin Copolymer (COC) 재질 로 랩온어칩을 성형 사출하여 실제 유전자 증폭 및 검출이 가능한 유전자 검출용 칩의 시제품을 제작하였다.

4. 랩온어칩에서의 PCR증폭 성능 검증
유전자 증폭이 가능하도록 온도변화가 원활이 이루어지는 시스템과 실시간으로 증폭결과를 확인 할 수 있는 광학 시스템을 구축하였고, 구축된 시스템을 이용하여 유전자 증폭 및 실시간 검출을 검증하였다.

5. 다중 식중독균 검출을 위한 real-time PCR 조건 최적화
4종 식중독균의 용해곡선 분석을 통해 T_m값이 5℃이상 차이가 나는 E. coli O157:H7 (87℃)과 S. aureus (80℃), Salmonella spp. (88℃)와 L. monocytogenes(80℃)를 동시 검출할 수 있는 프라이머를 선정한 후, 단일 real-time PCR 용해곡선 분석을 실시하였다. 선별된 프라이머의 검출감도는 S. aureus (Ct;26)와 L. monocytogenes (Ct;26)는 10² cfu/mL까지 E. coli O157 (Ct;26)과 Salmonella spp. (Ct;27)는 10 cfu/mL까지 검출 가능하였다. 4종 균에 각각 오염된 양상추에서 실험한 결과 S. aureus와 Salmonella spp.는 10³ cfu/mL까지 E. coli O157과 L. monocytogenes는 10² cfu/mL까지 검출되어 식품시료에 오염된 경우 검출감도가 1 log cfu/mL 더 낮음을 확인하였다. DNA 추출 없이 colony real-time PCR 수행 결과, 10⁵ cfu/mL에서 Ct 25 이상으로 검출됨을 확인하였다. 양상추에서 다중 검출을 수행한 결과 E. coli O157:H7과 S. aureus (Ct;26)는 10⁴ cfu/mL, Salmonella spp.와 L. monocytogenes (Ct;25)는 10³ cfu/mL까지 검출되었다. Applied Biosystems 7500 system과 본 과제에서 개발한 랩온어칩 시스템 NBS-100을 동일조건에서 4종 식중독균의 DNA 샘플로 비교한 결과 L. monocytogenes (Ct;16과 17)은 검출 감도가 유사하였으며, E. coli O157:H7과 S. aureus, Salmonella spp.는 ABI 시스템이 10 cfu/mL 수준으로 감도가 더 높았다.

6. 나노자성-면역 분리 기반 시료 전처리 기술 확립
5 nm 크기를 갖는 자성 입자의 제작을 통해 자성체 입자 표면에 Au가 환원되어 core/shell 형태의 자성/금 나노입자를 제작하였고 XRD, SEM 및 TEM을 통해 제작된 입자의 특성을 평가하였다. 제작된 입자는 평균 10 nm 크기를 가졌으며 Fe₃O₄와 Au의 결정이 만들어졌음을 알 수 있었다. 또한 SPR을 이용한 항체고정화 조건을 확인하였다. 모델 식품검체 로부터 균 특이 분리 최적 조건을 조사하여 10³ cell/mL 분리 및 검출을 확인하였으며 TEM을 통해 미생물 검체 표면에 흡착된 입자를 확인하였다.

7. 다중검출용 랩온어칩의 설계 및 제작
다중검출용 랩온어칩은 단일칩과 동일한 설계 툴인 3D CAD를 이용하여 inlet, outlet, PCR 증폭 및 계측부위로 구성하여 25 X 60 X 0.7 mm 크기로 3채널로 설계되었다. PCR 시스템 기판 내 PCR 증폭부위는 2 X 5 X 0.2 mm로 설계하였으며 이를 기준으로 PCR 계측부위 (1 X 3 X 0.1 mm) 또한 설계하였다. 다중검출을 위한 랩온어칩에 대한 코어금형을 제작 성형사출을 통해 칩 시제품을 제작하였다. 제작한 칩의 시제품은 Polycarbonate (PC)재질의 3 채널을 가지며 각각의 채널은 5 ~ 10 μL 부피를 가진다. 제작한 칩은 120℃ 이상의 고온에서도 형상의 변화가 없었으며 90% 이상의 광투과 특성을 확인하였다.

8. 다중검출용 광학계 시스템 구축
다중검출을 위한 형광광학계를 설계하고 제작하였으며 열원부분과 결합시켜 real-time PCR 장비를 구축하였으며 구축된 장비의 광학부분의 성능평가를 실시한 결과 DNA 70pg ~ 800 ng에서 형광 측정을 확인하였다. 또한 L. monocyogenes ATCC153131을 선택하여 DNA 50 ng에서 30 cycles을 기준으로 Roche사의 LightCycle 1.5 모델과 제작한 real-time PCR (NBS-100, 나노바이오시스(주))을 비교 평가한 결과 유사한 PCR 효율과 진행시간을 확인하였다.

9. 나노자성-면역 분리기반 시료 전처리 기술을 이용한 식중독균 농축 및 전처리
식중독균 특이항체와 나노자성 중합체를 이용한 시료전처리 방법으로 NBS-100에 의한 real-time PCR 결과 전통적인 배지법으로 검출하지 못한 10 cfu/mL에서도 식중독균을 검출 할 수 있었다. 기존 시료전처리법과 비교한 결과, 나노자성 중합체를 이용한 시료전처리 방법은 10 cfu/mL의 적은 수의 세균이 존재하는 실험군에서 기존의 전처리법보다 더 좋은 검출능을 나타내었다. 따라서 실제 식품에서 아주 적은 수로 존재하는 식중독균의 검출에 효과적일 수 있을 것으로 사료된다.

10. 시료 전처리 기술이 적용된 랩온어칩 검출 시스템 특성 평가 및 검증
신선편이채소 중 양상추, 치커리, 베이비채소를 대상으로 하여 E. coli O157:H7 NCCP11091, S. aureus ATCC6538, Salmonella spp. ATCC13076, L. monocytogenes ATCC15313의 10-10⁶ cfu/mL 세포수에서 검출감도 조사 결과, E. coli O157:H7은 모든 시료에서 10 cfu/mL 세포수까지 검출되었으며, 시료에 따른 검출감도의 큰 차이는 없었다. 주요 식중독균의 검출에 사용된 4쌍의 검출 프라이머가 각 식중독균에 특이적인지 확인하기 위하여 E. coli O157:H7 2종, Salmonella spp. 3종, L. monocytogenes 2종, S. aureus 2종, S. epidermidis 1종, B. cereus 1 종에 대한 특이성을 검증하였다. 각 균 특이적인 프라이머 의해 다른 식중독균은 검출되지 않았다. 본 연구팀에서 개발한 NBS-100과 공전법, NBS-100과 기존에 사용해 왔던 ABI7500와의 성능을 비교한 결과, 모든 경우에 공전법으로 10²cfu/mL까지 검출되었으며, 공전법으로 검출되지 않았던 10 cfu/mL에서 NBS-100으로 E. coli O157:H7 등의 검출이 가능하였다. ABI7500에 의한 분석법과 비교한 경우에도 큰 차이는 없으나 조금 더 좋은 검출능을 나타내었다. 그러나 기존 공전법으로 최소 24시간 소모되는 검출 시간이 개발된 시스템에서 2-4시간으로 현장에서 실시간 검출이 가능할 것으로 사료된다. 본 시스템에서 2종의 모델시료에서 4종의 식중독균의 검출에 대한 real-time PCR의 C_T에 대한 RSD 값이 베이비채소에서 0.1-1.9%, 양배추에서 0.1-2.5%로 나타내므로 재현성 실험에서 요구되는 0.1-5%의 RSD 값에 포함되므로 NRS-100시스템과 관련 프라이머들의 실험 재현성을 확인하였다.

11. 시료 전처리용 하드웨어 시스템 구축과 시스템 특성 평가 및 검증
주관기관에서 연구한 시료전처리 프로토콜과 상용 프로토콜을 분석하여 시료전처리 장치 외부 및 내부 공정용 공정을 개발하였으며, 용액주입부, Lysis 모듈부, membrane filter, 3 way 밸부 및 용액 배출부로 각 모듈별로 설계하고 그 성능을 평가하였다. 이를 바탕으로 300(가로) X 150(세로) X 300(높이) mm의 외각 크기와 총 5 kg 정도 무게를 가지는 시료전 처리용 하드웨어 시스템을 설계하고 제작하였다. 이를 이용하여 상추, 양배추 및 치커리 등의 신선편이채소로 시료전처리용 하드웨어 시스템을 이용하여 식품오염균 (E. coli O157, Samonella spp., L. monocytogenes ATCC15313)이 3시간이내로 분리됨을 검증하였다.

12. 식중독균 검출용 다중검출 랩온어칩 시스템의 시작품 제작
균일성과 효율적인 온도제어 알고리즘을 통하여 펠티어 열원소자를 이용한 ± 1℃ 이내편차를 가지면서 30 cycle 기준 40분 이내 수행할 수 있는 다중검출용 온도제어 모듈을 설계/제작하였으며 LED 광원 (470 nm, SYBR green), 렌즈 및 필터 (520 nm), photo diode를 이용한 다채널 (3채널) 광학 검출 모듈을 설계/제작하였다. 이를 바탕으로 20 X 20 X 30 cm의 외각 크기 정도의 소형 고속 real-time PCR에 대한 시작품을 제작 완료하였다.

(출처 : 요약문 7p)

Abstract ▼

IV. Results and Recommendation
1. PCR primer fabrication for detection of food-borne pathogens in fresh-cut
vegetables: Primers used in this study were targeted to genes encoding for the 16s rRNA, coa (coagulase), can (collagen adhesion), and nuc (S. aureus specific gene) in S. aureus, lap (In

IV. Results and Recommendation
1. PCR primer fabrication for detection of food-borne pathogens in fresh-cut
vegetables: Primers used in this study were targeted to genes encoding for the 16s rRNA, coa (coagulase), can (collagen adhesion), and nuc (S. aureus specific gene) in S. aureus, lap (Invasion associated protein), hly (hemolycin), inlA (internalin), and 16s rRNA in L. monocytogenes, inv (Salmonella specific invasion), fliC (fllagella), 16s rRNA in Salmonella spp., and 16s rRNA, eae (intimin), fliC (fllagella), rfb (O157 specific gene) in E. coli O157:H7. These primers were selected based on their specificity, and synthesized for use.

2. Establishment of food-borne pathogene analysis condition using real-time PCR.
In order to establish detection limits of the real-Time PCR, 10-fold serial dilutions of the four reference strains were analyzed covering a range from 5.2±0.4 to 1.2±0.3 log cfu/mL. Reaction conditions for each pathogen using SYBR Green were optimized to develop efficient real-time PCR, and standard curve was generated from the real-time PCR cycle threshold values for quantitative analysis.

3. Design and fabrication of LOC for gene detection: Disposable plastic LabChip for real-time PCR was designed and fabricated using 3D CAD. The LabChip based on a Cyclo Olefin Copolymer (COC) had three channels comprising positive, negative and sample channels, and was generated using core-mold. Consequently, a disposable plastic three channel real-time PCR system to detect food pathogens within 90 min was developed.

4. Evaluation of performance for LOC-based real-time PCR amplification: We designed a prototype of fluorescence optics for real-time PCR system, and tested the performance of optic part from measuring the fluorescence intensity at 488 nm and 520 nm. In addition, we checked the accuracy of temperature control.

5. Real-time PCR optimization for multi-detection of food-borne pathogens: Selected oligonucleotide primers for food pathogens were tested for PCR amplification of a DNA fragment with a melting temperature for E. coli O157:H7, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus. The limits of detection (LOD) of the selected primers were 10² cfu/mL for S, aureus (Ct;26) and L. monocytogenes (Ct;26), and were 10 cfu/mL for E. coli O157:H7 (Ct;26), and Salmonella spp. (Ct;27). In colony real-time PCR without extracting DNA, the LOD was decreased to 10⁵cfu/mL. When the lettuce artificially inoculated with four strains was analyzed using real-time PCR, the LOD was 10⁴ cfu/mL for E. coli O157:H7 and S. aureus (Ct;26), and was 10³ cfu/mL for Salmonella spp. and L. monocytogenes (Ct;25).

6. Establishment of imnmnomaRnetic separation based sample preparation method: The gold-coated iron magnetic nanoparticles were synthesized and characterized. E. coli O157:H7, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus were simultaneously separated and detected using nanoparticles as magnets and for absorbance measurement. Core-shell structured Fe₃O₄/Au particles were prepared from iron core particles by reduction of Fe ions and nucleation of gold ions on core particle surfaces. The Fe₃O₄/Au particles were purified and modified using 16-mercaptohexadecanoic acid as a coupling agent for anti-E. coli O157:H7 antibodies, anti-L. monocytogenes antibodies, anti-Salmonella spp. antibodies, anti-5. aureus antibodies under optimized immobilization conditions. The Fe₃O₄/Au particles produced were comprised of Fe₃O₄ core particles with a diameter of less than 5 nm and coated in a gold shell approximately 5 nm thick. These Fe₃O₄/Au particles were used to demonstrate the feasibility of high.sensitivie detection, and the specificity of Fe₃O₄/Au particle binding with E. coli O157:H7, L. monocytogenes, Salmonella spp., S. aureus were confirmed.

7. Design and fabrication of LOC for mult-detection: Multi-detecting LOCs was designed using the same tool and comprised with inlet, outlet, PCR amplification and detection part including 3 channels as 25 X 60 X 0.7 mm size. The PCR amplification part in the system was designed as 2 X 5 X 0.2 mm size. And from the amplification design, the PCR detection part was also designed as 1 X 3 X 0.1 mm size. The Labchip for prototype fabricated from the molding injection and had 3 channels and 5 ~ 10 μL volume with polycarbonate (PC). The fabricated chips didn't any change the shape even high temperature at 120℃ and had the good optical transparent property over 90%.

8. Optic system setup for mult-detection: We designed the fluorescence optics for multi-detection and set up the real-time PCR system. And then we confirmed the performance of optic part from measuring the fluorescence intensity at DNA 70pg ~ 800ng. When the fabricated real-time PCR (NBS-100) was compared with LightCycle 1.5 (Roche) from resulting DNA 50 ng with 30 cycles of L. monocyogenes ATCC153131, we knew that the PCR efficiency and consuming time was similar.

9. Application of immunomagnetic separation based sample preparation to fresh-cut vegetables: Two procedures for sample preparation prior to real-time PCR (NBS-100) were compared in this study: one was based on immunomagnetic separation of the target bacteria from the sample, using magnetic particles coated with immunoglobulin antibodies to E. coli O157:H7, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus. The other was conventional plating method based on the serial dilution of sample. As a result, immunomagnetic separation using real-time PCR (NBS-100) assay was capable of detecting 10 cfu/g of sample. In contrast, conventional cultural method based on the serial dilution of sample gave negative result at 10 cfu/g of sample. Thus, the combination of immunomagnetic separation and real-time PCR (NBS-100) makes possible the development of a automated detection process with high sensitivity, which require a minimum of manual work.

10. Performance test for the combined immunomagnetic separation based sample preparation and LOC based real-time PCR: The performance of the combined LOC based real-time PCR and immunomagnetic separation based sample preparation was evaluated in vegetables including as lettuce, chikory and baby vegetables artificially inoculated with 10-10⁶ cfu/mL of Et coli O157:H7, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus. Regardless of the sample used, E. coli O157:H7 was detected at 10 cfu/g of sample. The optimized multiplex PCR based on immunomagnetic separation showed that the selected primers were specific to the detection of E. coli O157:H7, L. monocytogenes, Salmonella spp., and S. aureus. When our NBS-100 based on immunomagnetic separation was compared with ABI7500 and conventional plating method (KFDA code), NBS-100 was capable of detecting 10 cfu/g of sample at which yielded negative result by conventional cultural method. As compared with ABI7500, NBS-100 gave the same or better results. In addition, RSD for C^T of NBS-100 based on immunomagnetic separation was 0.1-1.9% in baby vegetable and 0.1-2.5% in lettus, indicating that reproducibility of our NBS-100 based on immunomagnetic separation was good. These results from this study showed that the developed real-time PCR combined with immunomagnetic separation is promising in terms of sensitivity, specificity and reproducibility.

11. Fabrication and evaluation of sample preparation H/W system: The sample preparation system and its internal process was developed from the research results of competent authorities and analysis of conventional protocol. And the system was designed according each module with solution inlet, Lysis, membrance filter, 3-way valve and solution outlet and evaluated the performance. From the results, we fabricated the H/W system for sample preparation with 300 X 150 X 300 mm as size and 5 kg as weight. Using the fabricated system, we confirmed that the pathogens ((E.coli O157, Samonella spp., L. monocytogenes ATCC15313) was separated from fresh-cut foods (lettuce, cabbage and chicory).

12. Prototype fabrication of multi-detection LOC based real-time PCR: We completed a portable rapid sample preparation system to isolate food pathogens from fresh vegetables within 3 hours and made an efficient 3 channel LabChip-based real-time PCR system to detect food pathogens within 40 min.

(출처 : SUMMARY 13p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제출문 ... 2
• 요약문 ... 4
• SUMMARY ... 12
• CONTENTS ... 18
• 목차 ... 20
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 22
• 제1절 연구개발의 목적 ... 22
• 제2절 연구개발의 필요성 ... 22
• 1. 경제적·산업적 필요성 ... 22
• 2. 기술적 연구개발의 필요성 ... 24
• 제3절 연구개발의 범위 ... 26
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 28
• 제1절 국내·외 관련분야에 대한 기술개발 현황 ... 28
• 1. 세계적 수준 ... 28
• 2. 국내수준 ... 30
• 제2절 연구결과가 국내·외 기술개발현황에서 차지하는 위치 ... 31
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 33
• 제1절 이론적, 실험적 접근방법 ... 33
• 1. 신선편이채소 중 주요 오염 식중독균 검출을 위한 PCR primer 제작 ... 33
• 2. Real-time PCR에 의한 개별 식중독균별 분석조건 확립 ... 33
• 3. 유전자 검출용 랩온어칩의 설계 및 제작 ... 33
• 4. 랩온어칩에서의 PCR증폭 성능 검증 ... 33
• 5. 다중 식중독균 검출을 위한 real-time PCR 조건 최적화 ... 34
• 6. 나노자성-면역 분리 기반 시료전처리 기술 확립 ... 34
• 7. 다중검출용 랩온어칩의 설계 및 제작 ... 37
• 8. 다중검출용 광학계 시스템 구축 ... 37
• 9. 나노자성-면역 분리기반 시료 전처리 기술을 이용한 식중독균 농축 및 전처리 ... 37
• 10. 시료 전처리 기술이 적용된 랩온어칩 검출 시스템 특성 평가 및 검증 ... 38
• 11. 시료전처리용 하드웨어 시스템 구축과 시스템 특성 평가 및 검증 ... 38
• 12. 식중독균 검출용 다중검출 랩온어칩 시스템의 시작품 제작 ... 39
• 제2절 연구내용 ... 39
• 1. 신선편이채소 중 주요 오염 식중독균 검출을 위한 PCR primer 제작 ... 39
• 2. Real-time PCR에 의한 개별 식중독균별 분석조건 확립 ... 39
• 3. 유전자 검출용 랩온어칩의 설계 및 제작 ... 39
• 4. 랩온어칩에서의 PCR증폭 성능 검증 ... 39
• 5. 다중 식중독균 검출을 위한 real-time PCR 조건 최적화 ... 39
• 6. 나노자성-면역 분리 기반 시료전처리 기술 확립 ... 39
• 7. 다중검출용 랩온어칩의 설계 및 제작 ... 40
• 8. 다중검출용 광학계 시스템 구축 ... 40
• 9. 나노자성-면역 분리기반 시료 전처리 기술을 이용한 식중독균 농축 및 전처리 ... 40
• 10. 시료 전처리 기술이 적용된 랩온어칩 검출 시스템 특성 평가 및 검증 ... 40
• 11. 시료전처리용 하드웨어 시스템 구축과 시스템 특성 평가 및 검증 ... 40
• 12. 식중독균 검출용 다중검출 랩온어칩 시스템의 시작품 제작 ... 40
• 제3절 연구결과 ... 41
• 1. 신선편이채소류 식품의 주 오염 식중독균 검출을 위한 Primer 제작 ... 41
• 2. Real-time PCR에 의한 개별 식중독균별 분석조건 확립 ... 43
• 3. 유전자 검출용 랩온어칩의 설계 및 제작 ... 47
• 4. 랩온어칩에서의 PCR증폭 성능 검증 ... 49
• 5. 다중 식중독균 검출을 위한 real-time PCR 조건 최적화 ... 55
• 6. 나노자성-면역 분리 기반 시료전처리 기술 확립 ... 61
• 7. 다중검출용 랩온어칩(Lab-on-a-chip)의 설계 및 제작 ... 74
• 8. 다중검출용 광학계 시스템 구축 ... 79
• 9. 나노자성-면역 분리기반 시료 전처리 기술을 이용한 식중독균 농축 및 전처리 ... 81
• 10. 시료 전처리 기술이 적용된 랩온어칩 검출 시스템 특성 평가 및 검증 ... 83
• 11. 시료전처리용 하드웨어 시스템 구축과 시스템 특성 평가 및 검증 ... 90
• 12. 식중독균 검출용 다중검출 랩온어칩 시스템의 시작품 제작 ... 97
• 제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 104
• 제1절 연도별 연구목표 및 평가착안점에 입각한 연구개발목표의 달성도 ... 104
• 제2절 관련분야의 기술발전에의 기여도 ... 109
• 제5장 연구개발 성과 및 성과활용 계획 ... 110
• 제1절 연구개발 성과 ... 110
• 1. 논문게제 성과 ... 110
• 2. 특허 성과 ... 110
• 3. 기술 이전 ... 111
• 4. 세미나 발표 ... 111
• 제2절 연구개발 상용화 및 산업화 계획 ... 111
• 제3절 기술확산 및 지식재산권 확보 계획 ... 112
• 1. 기술 확산 ... 112
• 2. 지식재산권 확보 계획 ... 113
• 제4절 추가연구, 타연구에 활용계획 ... 113
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 114
• 1. 시료 전처리 (Sample Prep) ... 114
• 2. 해외 진단 시장 전망 및 허가 지침 ... 114
• 3. NGS (Next-generation sequencing) 기술 ... 116
• 제7장 참고문헌 ... 118
• 끝페이지 ... 120