초록 ▼

1. 본 과제는 본 연구진에서 보유하고 있는 기술인 “황색포도구균 유래 세포밖 소포체를 이용한 황색포도구균 감염 예방 백신 개발“ 을 위해 기 보유하고 있던 후보물질의 안전성, 면역성, 유효성, PK 분석 그리고 CMC 연구 등을 통해 “황색포도구균 백신 후보물질의 최적화” 를 수행한 연구임.
2. 총 95종의 환자유래 황색포도구균 균주로부터 중증도, MRSA 여부, alpha-holysin 발현 여부를 기준으로 8종의 후보균주를 선정하였으며, 유효성을 기준으로 최적의 균주 2종을 선정하였음.
3. 표준균주 그리고 최적의

1. 본 과제는 본 연구진에서 보유하고 있는 기술인 “황색포도구균 유래 세포밖 소포체를 이용한 황색포도구균 감염 예방 백신 개발“ 을 위해 기 보유하고 있던 후보물질의 안전성, 면역성, 유효성, PK 분석 그리고 CMC 연구 등을 통해 “황색포도구균 백신 후보물질의 최적화” 를 수행한 연구임.
2. 총 95종의 환자유래 황색포도구균 균주로부터 중증도, MRSA 여부, alpha-holysin 발현 여부를 기준으로 8종의 후보균주를 선정하였으며, 유효성을 기준으로 최적의 균주 2종을 선정하였음.
3. 표준균주 그리고 최적의 균주 2종 유래 세포밖 소포체를 분리하여 안전성을 평가하였고, 본 백신의 생산공정을 따를 경우, 세균 및 endotoxin의 오염이 없었고 이를 투여했을 때 국부 및 전신적 독성은 발생하지 않았음.
4. 세포밖 소포체의 면역성을 BMDC 와 in-vivo 실험을 통해서 평가하였고, BMDC의 maturation 및 사이토카인의 분비를 효과적으로 유도하며, in-vivo 에서 체액성 면역 반응 뿐 만 아니라 세포성 면역을 유도함을 확인.
5. 세포밖 소포체 백신의 방어능을 서바이벌 모델을 이용하여 평가했을 때, 효과적임을 확인하였음,
6. 일반적으로 백신의 경우 PK 분석을 요구하지 않으나, first in class 인 점을 감안하여 지표물질을 선정하고, 이에 대한 단일항체를 생산하여 체액에서 PK 를 분석 시도하였고, 또한 EV 전체에 대한 PK profile을 분석함.
7. 세포밖 소포체 백신의 안정성을 다양한 조건에서 물리/화학적 특성을 통해 평가하였고, 대부분의 조건에서 세포 밖 소포체 백신은 부형제 첨가 없이도 안정적으로 존재하며, 백신 효능에도 차이가 없음을 확인하였음.
8. 최종적으로 발효조를 이용한 대량 생산( 200ug/L 이상 )의 조건을 확립하였음.

(출처 : 보고서 요약서 3p)

Abstract

IV. Results: we developed 2 optimized final candidates from 95 staphylococcus aureus isolated from child patients which were based on the safety, immunogenecity, efficacy, PK and stability

(출처 : SUMMARY 9p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 제 출 문 ... 2
• 보고서 요약서 ... 3
• 요 약 문 ... 5
• SUMMARY ... 8
• CONTENTS ... 10
• 목차 ... 11
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 13
• 제1절 연구개발의 필요성 ... 13
• 1. 세균 백신 개발의 중요성 ... 13
• 2. 황색 포도구균 (staphylococcus aureus) 감염의 위험성 ... 13
• 제2장 국내외 기술개발 현황 ... 17
• 제1절 국내외 기술개발현황 ... 17
• 1. 국내 기술개발현황 ... 17
• 2. 국외 기술개발현황 ... 17
• 3. 그람양성세균 백신의 개발기술현황 ... 17
• 4. 황색포도구균 백신 개발 현황 (State of art) ... 20
• 5. 황색포도구균 백신에 대한 효율적인 백신 개발전략: 세포밖 소포체 백신 ... 21
• 6. 본 연구진의 기술개발현황 ... 22
• 제3장 연구개발수행 내용 및 결과 ... 33
• 제1절 안전성 평가 ... 34
• 1. 무균시험 ... 34
• 2. Endotoxin 오염 시험 ... 37
• 3. 이상독성 부정시험 ... 39
• 4. 단/장기 독성시험 ... 43
• 제2절 면역성 연구 ... 57
• 1. BMDC maturation 유도 성능 test (in vitro) ... 57
• 2. BMDC cytokine 생성 유도 성능 test (in vitro) ... 59
• 3. 단/장기 항체생성반응 test (in vivo) ... 62
• 4. 단/장기 T 세포 면역반응 유도 test (in vivo) ... 65
• 제3절 유효성 연구 ... 71
• 1. 포도구균 유래 폐렴모델 확립/평가 ... 71
• 2. 상기 모델에서의 백신 방어능 평가 ... 74
• 제4절 PK 분석 ... 80
• 1. S-EV proteom 분석 ... 80
• 2. 지표물질 선정, cloning 및 재조합 단백질 생산 ... 81
• 3. 단일항체 생산 ... 85
• 4. ELISA 및 Immunoblot 분석을 통한 PK 분석 ... 90
• 5. Whole body imaging 분석을 통한 PK 분석 ... 93
• 제5절 CMC 연구 ... 96
• 1. 후보균주 선정 ... 96
• 2. 온도, 기간, 보존제 첨가에 따른 안정성 시험 ... 97
• 3. 물리/화학적 특성 분석 (TEM, DLS, NTA 분석) ... 114
• 4. 대량 생산 조건 확립 ... 127
• 제4장 목표 달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 130
• 제1절 목표 달성도 ... 130
• 1. 연구개발 목표 ... 130
• 2. 세부 목표 ... 130
• 3. 목표 달성도 ... 131
• 제2절 관련 분야에의 기여도 ... 133
• 1. 새로운 백신의 플랫폼 개발 ... 133
• 제5장 연구개발결과의 활용계획 ... 134
• 제1절 연구개발결과의 활용방안 ... 134
• 1. 폐렴구균, Enterococcus 균 등의 그람양성세균 백신개발에의 활용 ... 134
• 2. Epicutaneous patch와 같은 새로운 투여방법 개발에의 활용 ... 134
• 제2절 기대성과 ... 134
• 1. 기술적 측면 ... 134
• 2. 경제적, 산업적 측면 ... 135
• 제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 135
• 제1절 현재 임상시험 중인 백신에 관한 정보 ... 135
• 1. 백신 개발의 추세 ... 135
• 제7장 연구시설, 장비 현황 ... 137
• 제8장 참고문헌 ... 138
• 끝페이지 ... 156