초록 ▼

VHSV의 어체내 침입특성을 알아보기 위하여, 감염 초기단계의 체내 침입을 위한 감염가, 침입을 위해 필요한 노출시간과 침입 이후 체내 감염가 변화 등을 조사하여 침지 감염에 의한 넙치의 VHSV 침입 조건을 설정하고, 이를 바탕으로 침입 경로로 사용되어질 것으로 생각되는 체표, 아가미 및 지느러미를 통한 바이러스의 침입특성을 비교하였다. 각각의 침입 경로별 감염가 조사를 통해 침입 문호를 확인하고 그에 연계된 체내 증식특성을 바이러스 감염가, 바이러스 특이유전자 검출, 병리학적 조사 및 면역학적 분석 방법으로 비교 검토하였다. 그

VHSV의 어체내 침입특성을 알아보기 위하여, 감염 초기단계의 체내 침입을 위한 감염가, 침입을 위해 필요한 노출시간과 침입 이후 체내 감염가 변화 등을 조사하여 침지 감염에 의한 넙치의 VHSV 침입 조건을 설정하고, 이를 바탕으로 침입 경로로 사용되어질 것으로 생각되는 체표, 아가미 및 지느러미를 통한 바이러스의 침입특성을 비교하였다. 각각의 침입 경로별 감염가 조사를 통해 침입 문호를 확인하고 그에 연계된 체내 증식특성을 바이러스 감염가, 바이러스 특이유전자 검출, 병리학적 조사 및 면역학적 분석 방법으로 비교 검토하였다. 그 결과를 요약하면 아래와 같다.
1. 수중의 VHSV가 넙치의 외부 침입 문호를 통하여 체내로 침입할 수 있는 감염가를 조사하였다. 이를 위하여 대상 바이러스의 선행연구에서 밝혀진 발병수온 및 비 발병수온 조건인 10℃ 및 25℃의 수온 조건에서 10^2.8, 10^3.8, 10^4.8, 10^5.8 TCID₅₀/mL의 바이러스 감염가로 30초, 1분, 5분, 10분간의 노출 조건으로 감염시키고, 감염 후 1시간, 6시간, 12시간, 24시간 및 48시간째에 4마리씩의 넙치를 무작위로 채집하여 체내 바이러스 감염 정도를 TCID₅₀법, qRT-PCR을 통해 분석 조사하여, 수중의 바이러스가 체외로 노출된 체표를 이용하여 체내로 감염되어질 수 있는 적정농도를 검토한 결과, 10℃ 조건에서 VHSV 바이러스 침지에 따른 감염 가능 최소 바이러스 감염가는 10^3.5 TCID₅₀/mL 이상으로 확인 되었고, 최소 침지 시간은 5분 이상의 노출이 요구되는 것을 확인할 수 있었다. 25℃ 조건에서는 10^6.8 TCID₅₀/mL 60분의 노출에서도 VHSV의 감염에 의한 폐사는 발생하지 않은 것으로 확인되었다.
2. 체내부로의 바이러스 침입에 의한 감염의 성립을 위하여 수중의 바이러스가 어느 정도 노출(접촉) 하여야하는 가를 확인해 보기 위하여 앞의 실험을 통하여 확인된 10℃ 수온 조건에서 LD₅₀ 감염농도인 10^5.8 TCID₅₀/mL 감염가의 10배 감염가 조건인 10^6.8 TCID₅₀/mL 감염가의 VHSV를 10분, 15분, 30분 및 60분 동안 노출시킨 후 15일간 사육하면서 각 실험구의 누적 폐사율, 체내 기관별 침입 바이러스의 감염가 및 바이러스 특이 유전자의 정량적 변동을 측정 및 분석 한 결과, 10분 노출구는 7일째부터 폐사가 발생하기 시작하여 시험 종료일까지 약 60%의 누적 폐사율이, 15분 노출구는 8일째부터 폐사가 시작되어 65%, 30분 노출구는 7일째 폐사 시작하여 70%, 60분 노출구는 감염 6일째부터 폐사발생 시작하여 시험 종료일까지 95%의 누적 폐사율이 관찰되었고, 25℃ 실험구에서는 모든 노출 시간 구에서 VHSV에 의한 폐사는 발생하지 않았다. 넙치에 VHSV가 어체 내로 침투하기 위해서는 적정 감염수온 및 감염가 조건 하에서 10분 이상의 노출이 수반되어야 함을 확인할 수 있었다.
3. 체내부로의 바이러스 침입에 사용되어질 수 있는 어체 표면을 부위별로 구분하여 각각의 부위를 통한 침입특성을 비교해보기 위하여 넙치의 아가미, 체표면의 측선, 지느러미 기부에 국한적으로 10^6.8TCID₅₀/mL로 감염가를 조정한 VHSV를 10분간 노출하여 실험한 결과 아가미, 체표 측선, 지느러미기부 각각의 노출 실험구에서 80%, 100%, 50%의 누적 폐사를 보였고, 아가미, 근육, 심장, 비장, 신장에서 감염 7일째에 6.55, 5.8, 8.05, 7.55, 8.05 log₁₀ TCID₅₀/mL의 감염가가 측정되었다.
4. VHSV 침입에 저항하는 넙치 어체 초기 면역 반응을 알아보기 위하여 어체에 노출된 바이러스 농도별 그리고 노출 시간에 따른 넙치의 비장 및 신장 내에서의 초기 면역 반응에 대한 정량 분석을 실시하고, 병리조직학적, 면역조직학적 연구를 수행하였다. 초기면역 단계에서 발생하는 넙치의 면역관련 특이적 변화를 구체적으로 해명하기 위해서는 실험 조건의 조정 등을 통한 결과 검토를 거쳐 해당 결과는 연구실적 제출 기한 내에 논문으로 공개하고자 한다.

(출처 : 요약문 3p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 목차 ... 2
• Ⅰ. 연구결과 요약문 ... 3
• Ⅱ. 연구내용 및 결과 ... 4
• 1. 연구과제의 개요 ... 4
• 2. 국내외 기술개발 현황 ... 4
• 3. 연구수행 내용 및 결과 ... 4
• 4. 목표 달성도 및 관련 분야에의 기여도 ... 6
• 5. 연구결과의 활용계획 ... 6
• 6. 연구과정에서 수집한 해외과학기술정보 ... 6
• Ⅲ. 연구성과 ... 7
• 끝페이지 ... 7