초록 ▼

세포치료제 제조시 동물유래 피더세포, 우혈청, 돼지 트립신 등의 사용으로 외래성바이러스 및 마이코플라스마 오염 등 안전성에 대한 우려가 제기되고 있다. 따라서, 세포치료제의 임상적 활용을 높이기 위해서는 동물성 인자를 배제하고 임상 적용이 가능한 배양조건을 확립하는 것이 중요하며, 이에 대한 노력의 일환으로 동물유래 성분을 배제한 줄기세포 배양방법이 활발히 개발되고 있다. 하지만, 동물유래 성분을 배제한 배양액에서 계대배양시 염색체 이상이 보고되는 등 유전적 안정성 문제가 제기되고 있다. 따라서 본 연구에서는 동물 성분을 제거한,

세포치료제 제조시 동물유래 피더세포, 우혈청, 돼지 트립신 등의 사용으로 외래성바이러스 및 마이코플라스마 오염 등 안전성에 대한 우려가 제기되고 있다. 따라서, 세포치료제의 임상적 활용을 높이기 위해서는 동물성 인자를 배제하고 임상 적용이 가능한 배양조건을 확립하는 것이 중요하며, 이에 대한 노력의 일환으로 동물유래 성분을 배제한 줄기세포 배양방법이 활발히 개발되고 있다. 하지만, 동물유래 성분을 배제한 배양액에서 계대배양시 염색체 이상이 보고되는 등 유전적 안정성 문제가 제기되고 있다. 따라서 본 연구에서는 동물 성분을 제거한, 중간엽줄기세포와 유도만능줄기세포에 최적화된 배양방법을 확보하고, 배양방법에 따른 생물학적 특성 분석을 통하여, 세포치료제 개발 시 품질 평가 시험법 개발시 고려사항을 도출하고자 한다. 중간엽줄기세포의 경우, 골수유래 중간엽줄기세포를 이용하여 xeno-free 배양액을 이용한 배양법을 확립하였다. 이후 세포학적인 평가로 세포의 형태학적 관찰, 세포 증식율 비교, 세포주기 분석, 미분화 지표물질 확인 등을 실히하였다. 배양방법에 따른 유전체 안정성을 확인하기 위하여 핵형분석을 실시한 결과, 두 배양방법 모두 정상핵형을 보임을 확인하였고, 기능적평가로서 자가재생능 확인, 분화능 확인, 세포의 이동능력을 확인하였다. 유도만능줄기세포의 경우, 마우스배아섬유세포를 배제한 xeno-free 배양방법을 확립하고 기존의 배양법과 비교분석하였다. 분석 결과, 기존의 배양법과 마찬가지로 iPSC의 콜로니가 잘 형성되는 것을 관찰하였다.
세포의 형태 및 미분화 지표물질을 확인하였고, 핵형분석을 통하여 유전체 안정성을 확인하였다. 마지막으로, 배양방법에 따른 iPSC의 배아체 형성능을 확인하였으며 3배엽으로의 분화능도 확인하였다. 이상의 결과를 바탕으로 줄기세포의 동물성분 제거 배양 시 품질평가 시험법 개발시 고려사항을 도출하였다.

(출처 : 국문 요약문 3p)

Abstract ▼

enogenic materials, such as mouse embryonic fibroblast(MEF)s, FBS, porcine trypsin, used in stem cell culture cause transmission of microbial contaminants as well as immune rejection by high contents of xenogenic proteins. Therefore, the culture condition using xenogenic materials brings about safet

enogenic materials, such as mouse embryonic fibroblast(MEF)s, FBS, porcine trypsin, used in stem cell culture cause transmission of microbial contaminants as well as immune rejection by high contents of xenogenic proteins. Therefore, the culture condition using xenogenic materials brings about safety issues during clinical trials or development of cell therapeutics. To minimize these safety issues, many xeno-free media have been developed. However, some papers have been reported that xeno-free condition may occurs genomic instability. In order to apply xeno-free media, quality evaluation of stem cells must be performed. In the present study, we established xeno-free culture method using mesenchymal stem cells and iPSCs and analyzed characteristics of stem cells with different culture conditions. In the case of mesenchymal stem cells, we used bone marrow-derived mesenchymal stem cells. After establishing xeno-free culture condition, we analyzed cell morphology, cell proliferation, cell cycle, expression of stemness marker. And we investigated genetic stability using karyotyping analyses. We also performed CFU assay, cell migration assay and multillineage differentiation assay. In case of iPSC, we established xeno-free culture condition with no MEFs. We obseved cell morphology and stemness markers of iPSCs. Next, we investigated genetic stability using karyotyping analyses and differentiation ability through the formation of embryoid body. Finally we obseved 3 germ layer marker expression.

(출처 : Summary 4p)

목차 Contents

• 표지 ... 1
• 자체연구개발과제 최종보고서 ... 2
• 국문 요약문 ... 3
• Summary ... 4
• 목차 ... 5
• 연구개발과제 연구결과 ... 6
• 제1장 연구개발과제의 개요 ... 6
• 제2장 연구개발과제의 국내·외 연구개발 현황 ... 10
• 제3장 연구개발과제의 연구수행 내용 및 결과 ... 13
• 제4장 연구개발과제의 연구결과 고찰 및 결론 ... 43
• 제5장 연구개발과제의 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 ... 47
• 제6장 연구개발과제의 연구개발 결과 활용계획 ... 49
• 제7장 참고문헌 ... 50
• 제8장 첨부서류 ... 53
• 끝페이지 ... 74